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(共11张PPT)
基因工程重点复习（2）
基因表达载体的构建
目的基因
直接导入
受体细胞
×
载体
基因表达载体的构建
构建表达载体的目的：
让目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代
使目的基因能够表达和发挥作用
知识回顾
1.载体
（1）载体的种类：
（2）载体的特点：a.含有一个至多个 ；
b.含有 ，随受体DNA同步复制；
c.常有特殊的 ，便于重组DNA分子的筛选；
d.对受体细胞 。
（3）常见的载体：
2.目的基因
获取目的基因的方法：
质粒、噬菌体、动植物病毒
限制酶切割位点
复制原点
标记基因
无害
质粒
人工合成、基因文库中获取、PCR技术
知识回顾
3.基因表达载体的组成
终止子
启动子
目的基因
标记基因
复制原点
基因
表达
载体
目的基因
启动子
终止子
≠起始密码子
≠终止密码子
标记基因
复制原点
知识回顾
基因表达载体的构建过程
重组DNA分子
限制酶
目的基因
限制酶切割位点
获取目的基因
DNA连接酶
限制酶
启动子
限制酶切割位点
终止子
标记基因
复制原点
质粒
基因重组
知识回顾
全称：
简称：
作用：识别双链DNA的 ，使每条链
的 断开。
作用结果： 或
全称：
类型： ，可连接黏性末端；
，即可连接黏性末端，
也可连接平末端。
限制性内切核酸酶
限制酶
特定核苷酸序列
特定部位
磷酸二酯键
黏性末端
平末端
DNA连接酶
E.coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
EcoRⅠ限制酶：GAATTC
SamⅠ限制酶： CCCGGG
全称：
简称：
作用：识别双链DNA的 ，使每条链
的 断开。
作用结果： 或
实践活动：动手完成基因表达载体的构建
以小组为单位，尝试构建基因表达载体
（1）尝试只用一种限制酶切割
（2）尝试用双酶切
限制酶种类 识别序列
EcoR Ⅰ GAATTC
CTTAAG
BamH Ⅰ GGATCC
CCTAGG
Hind Ⅲ AAGCTT
TTCGAA
思考讨论
1.只用一种限制酶切割的时候会出现什么现象？
（1）自身环化
（2）反向链接
2.双酶切时是否能用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ？为什么？
四环素抗性基因
EcoR Ⅰ
Hind Ⅲ
BamH Ⅰ
不能
因为BamH Ⅰ会破坏质粒的抗性基因，无法进行重组DNA筛选。同时BamH Ⅰ切割位点在目的基因上，也会破坏目的基因。
EcoR Ⅰ
Hind Ⅲ
BamH Ⅰ
课堂小结
DNA分子
（含目的基因）
载体（质粒）
①切割
一个切口
两个黏性末端
两个切口
获得目的基因
②
重组DNA
（重组质粒）
终止子
启动子
目的基因
标记基因
复制原点
基因
表达
载体
2.(不定项)下列属于获取目的基因方法的是（ 　　）
A．利用DNA连接酶复制目的基因 B．用DNA合成仪合成目的基因
C．从基因文库中获取目的基因 D．利用PCR技术扩增目的基因
B
习题检测
1.在受体细胞中能检测出目的基因是因为（　　）A．目的基因上有标记 B．质粒具有某些标记基因 C．重组质粒能够复制 D．以上都不正确
BCD
3.如图是利用基因工程技术培育转基因植物，生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性内切核酸酶。下列说法错误的是(　　)
A.卡那霉素抗性基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来
B.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠ
C.图示过程是基因工程的核心步骤
D.除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构
B

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