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2021学年第二学期高二生物学案
学案 序号 2 年段班级 高二 学生姓名 作业日期
章节课题 1.2纯净的目标微生物可通过 分离和纯化获得 审核人 授课日期
学习目标 1. 阐明使用无菌技术可获得纯净的微生物培养物。 2. 概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法。
知识回顾 1．微生物是人们对所有形体微小、肉眼不可见的生物的统称。（杂居混生） 2．发酵工程：采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接利用微生物的工作过程。 3. 无菌技术：在培养某种微生物时，防止其他微生物混入，保持无菌物品及无菌区域不被污染的技术。
新知学习 一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化 （一）接种方法 自然接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。 人为接种： 目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面 用于保存菌种（接种环）。 单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。 （二）单菌落分离：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落 1．平板划线法： （1）原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。 (2)方法：通常用___________蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、______________或其他形式的划线，以实现接种的目的。 2．稀释涂布平板法 接种时，通常需要先将菌液进行_____________，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，（移液管或枪）加在固体培养基表面，然后用___________将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养。这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。 注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。 2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。 二、活动：接种、培养并分离酵母菌 1．目的要求 (1)用平板划线法或____________________接种酵母菌。 (2)用_________培养基大量扩增酵母菌。 2．方法步骤 三、采用稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量倒平板的具体要求 （一）稀释涂布平板法可对微生物进行计数 1.原理：当样品稀释度足够高时,平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的________________活菌，用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。 2.原则：在保证能准确计数的前提下，减小稀释度。在实际操作中，适于计算的平板上菌落数的数目通常为30到300。统计的菌落数往往比活菌的实际数目要少，因为当两个或多个细胞，连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 3.计数要求：在同一稀释度下涂布3个(或3个以上)平板，取平均值。 4.公式：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。 （二）显微镜计数法可直接对菌液中的微生物进行计数 1.原理：利用特定_________________，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量。2.方法：用血细胞计数板计数（显微镜计数法）。 3.显微镜下观察
问题探究 思考：1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 2.判断液体培养基成功接种酵母菌的依据是什么？ 3.显微镜直接计数法有什么缺点吗？
影响实验结果的误差分析及改进办法
课堂练习 1.分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是(　　)　　　　　　　　　　　 ①加尿素　②不加尿素　③加琼脂　④不加琼脂　⑤加葡萄糖　⑥不加葡萄糖　⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐 A.①③⑤⑦ B.②④⑥⑧ C.①③⑤⑧ D.①④⑥⑦ 2.下图表示培养和分离X细菌的部分操作步骤,下列相关叙述正确的是(　　) A.步骤①倒平板操作时,倒好后应立即将其倒过来放置 B.步骤②将接种环在火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后进行平板划线 C.步骤③应多个方向划线,使菌种逐渐分散,培养后出现单菌落 D.步骤④培养箱培养后可用来对X细菌进行计数 3.在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验,在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片,d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如下图。以下判断错误的是(　　) A.a处抑菌效果小于b处 B.b处的滤纸片没有沥干 C.c处抗生素无效 D.d为对照 4.筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后,若细菌能分解淀粉,培养平板经稀碘液处理,会出现以菌落为中心的透明圈(如图),实验结果见下表。 菌种菌落直径(C)/mm透明圈直径(H)/mmH/C细菌Ⅰ5.111.22.2细菌Ⅱ8.113.01.6
下列有关本实验的叙述,错误的是(　　) A.培养基除淀粉外,还含有氮源等其他营养物质 B.筛选分解淀粉的细菌时,菌液应稀释后涂布 C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外 D.H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异 5.甲、乙、丙为三种微生物,下表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖;甲能在Ⅰ中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在Ⅱ中正常生长繁殖,甲和丙都不能。下列说法正确的是(　　) 培养基粉状硫 10 gK2HPO4 4 gFeSO4 0.5 g蔗糖 10 g(NH4)2SO4 0.4 gH2O 100 mLMgSO4 9.25 gCaCl2 0.5 gⅠ++++-+++Ⅱ+++-++++Ⅲ++++++++
注:“+”表示培养基中加入了这种物质,“-”表示培养基中没有加入这种物质 A.甲、乙、丙都是异养型微生物 B.甲、乙都是自养型微生物,丙是异养型微生物 C.甲是异养型微生物,乙是固氮微生物,丙是自养型微生物 D.甲是固氮微生物,乙是自养型微生物,丙是异养型微生物 6.下图为纯化大肠杆菌的一个操作环节,下列相关叙述错误的是(　　) A.该操作步骤是接种,方法是平板划线法 B.除第一次划线外,以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端 C.图中细菌密度最小的是5处 D.该接种方法适用于细菌的计数 7.对酵母菌溶液中的酵母细胞进行计数的方法,下列描述不正确的是(　　) A.可以用显微镜直接计数,需要血细胞计数板,但数据可能偏大 B.也可以用培养菌落的方法间接计数,但数据可能偏大 C.无论用哪种方法计数,都必须进行浓度梯度稀释 D.无论用哪种方法计数,都必须多次计数求平均值 8.将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤后得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。回答下列问题。 (1)M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制　　　　的生长,加入了链霉素的培养基属于　　　　培养基。 (2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有　　　　　　　　　(答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有　　　　　　　　　　(答出两点即可)。 (3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是　　　　,该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133;乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
学习反思 思考：1.操作的第一步灼烧接种环：是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环：是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落；划线结束后仍灼烧接种环：能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。 3.不能区分死菌和活菌；个体小的菌体在显微镜下难以进行观察。 练习：CCACD DB 8. (1)细菌　选择　(2)碳源、无机盐　蛋白质、核酸　(3)碘液　淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈　(4)乙同学的结果中,1个平板的计数结果与另2个相差悬殊,结果的重复性差

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