资源简介

微生物的分离和计数
易错归因
对微生物分离的方法原理、操作注意事项等掌握不全面；对微生物计数的方法原理、计算公式理解不到位等。
典型易错题
例1（2022·辽宁·建平县实验中学模拟预测）酵母的蛋白含量高，可用作饲料蛋白，且有些酵母能利用工业废甲醇作为碳源进行繁殖，既可减少污染，又可降低成本。研究人员拟从土壤中分离该类酵母并大量培养，操作流程如下图。下列相关叙述错误的是（ ）
（注：25×16型血细胞计数板，表示计数室中有25个中格，每个中格又分成16个小格。）
A．取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约70℃的培养基倒入培养皿混匀
B．只有③过程中使用的培养基需以甲醇作为唯一的碳源
C．⑤过程扩大培养时需要保证充足的营养并营造无氧环境
D．将发酵液稀释1000倍后，用25×16（1mm×1mm×0.1mm）血细胞计数板计数5个中格中的细胞数为60个，则发酵液中每毫升有3×109个细胞
【答案】D
【解析】分离某种微生物的原理：选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养，酸碱度，温度和氧等要求或加入某种抑制物质造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。平板浇注分离是将少量的菌液与融化的固体培养基充分混合均匀后倒入培养皿，所以温度过高使微生物失活，温度过低培养基又易成固态，因而选择50°C左右的培养基倒入培养皿混匀，A错误；③是进行选择培养，需要以甲醇作为唯一的碳源，将分解甲醇的酵母筛选出来，⑤扩大培养时也需要以甲醇作为唯一的碳源，不是只有③过程，B错误；酵母是兼性厌氧型真菌，在有氧条件下可大量繁殖，酵母扩大培养时，需保证充足的营养和氧气等条件，C错误；已知血细胞计数板的规格为25×16（1mm×1mm×0.1mm），若5个中格中的细胞数为60个，则可得公式60÷（5×16）×400×10000×1000=3×109，D正确。故选D。
例2（2022·湖南岳阳·一模）在农业生产研究上，常需要进行微生物的分离和计数。
（1）下表为两种微生物的培养基配方：
A组
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
B组
纤维素粉 NaNO3 Na2HPO4·7H2O KH2PO4 MgSO4·7H2O KCl 酵母膏 水解 酪素
5g 1g 1.2g 0.9g 0.5g 0.5g 0.5g 0.5g
注：上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容至1000mL。
①虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有________________________________。
②从功能上来看，上述两种培养基均属于________培养基。根据配方判断两培养基的作用分别是：_____________________________________。
（2）如图是某同学采用的接种微生物的方法，请回答下列问题：
①本实验采用的接种微生物的方法是________________法，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意：_______________________________________________________________________________________________________（答2项）。
②三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为106的稀释液中各取0.1mL涂平板，得到以下统计结果：
甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；
乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是209、240和250，取平均值233；
丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；
在三位同学的统计中，______同学的统计是正确的，据此计算，每克土壤样品中含细菌______________个。
【答案】（1）① 水、无机盐、碳源、氮源 ②选择培养基 分离尿素分解菌；分离纤维素分解菌
（2） ①平板划线法 每次划线前要灼烧接种环；冷却后从上一次划线的末端开始划线 ②乙 2.33×109
【解析】配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌；分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。为了保证稀释涂布平板法统计菌落数目的结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
（1）①虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源、氮源。
②据题表中的培养基的配方分析，A组中的氮源为尿素，应该是筛选尿素分解菌的选择培养基。B组中的碳源是纤维素，应该是筛选纤维素分解菌的选择培养基。
（2）①据图分析，图示表示平板划线法接种，是把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面，操作上应注意每次划线前接种环要灼烧；冷却后从上一次划线的末端开始划线。
②在进行平板菌落计数时，应选择菌落数在30～300之间的平板进行计数，同时为避免误差应选择至少3个或3个以上的平板进行计数并取平均值，因此乙同学的统计结果是正确的。每克土壤样品中含细菌为（C/V）×M＝平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=233÷0.1×106=2.33×109。
解题技巧
1．分离微生物的原理与措施
（1）原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的细胞与其他细胞分离，再给细胞提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。
（2）常用措施：
①接种过程中尽量使细胞分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。
②通过选择培养基来抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。
2．选择培养基四种常见制备方法或实例
3．微生物常用计数的方法
（1）活菌计数法（常用的是稀释涂布平板法）：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。
②操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，选择三个稀释度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。
③计算公式：每克样品中的细菌数＝（C/V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
④注意事项：
a、为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。
b、此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（2）显微镜直接计数法：
①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
②操作：用血细胞计数板计数。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定面积（1mm2）和高（0.1mm）的计数室，在1mm2的面积里又被划分成25个（或16个）中格，每个中格进一步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成的。将清洁干燥的计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，稍等片刻，待细菌全部沉降到计数室底部再在显微镜下统计4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。
③计算公式：每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。
④注意事项：不能区分死菌与活菌。
同类题练习
1．（2022·四川·盐亭中学一模）利用微生物分解纤维素对废弃物污染的减轻和作物秸秆再利用具有重要意义。某兴趣小组从富含纤维素的土壤中取样，加入选择培养基中进行振荡培养，之后接种于鉴别培养基上进行培养，筛选出能够分解纤维素的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A．选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长
B．振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质的充分接触和利用
C．鉴别培养基上涂布接种时，将1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀
D．加入刚果红的鉴别培养基上出现透明圈的菌落，可能是能够分解纤维素的微生物
2．（2022·湖北武汉·模拟预测）为了从反刍动物的瘤胃中分离出能分解尿素的微生物，某兴趣小组设计了如下实验流程。下列叙述错误的是（ ）
A．为创造无氧环境，可采用穿刺接种法
B．该实验使用的固体培养基是选择培养基
C．细菌能分解尿素，是因为它们能合成脲酶
D．脲酶将尿素分解为氨和CO2，会使培养基pH降低
3．（2022·辽宁沈阳·三模）刚果红是一种染料，可与纤维素反应形成红色复合物，但不会与纤维素水解产物发生反应。研究人员利用该原理从土壤中分离纤维素分解菌并计数，培养结果如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．刚果红培养基以纤维素为唯一碳源
B．将菌液分散在培养基表面用平板划线法
C．图中菌落丁分解纤维素的能力最强
D．用显微镜直接计数统计的结果往往比活菌实际数目多
4．（2022·天津·模拟预测）如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，有关叙述正确的是（ ）
A．步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落
B．在配制步骤②、③的培养基时；高压蒸汽灭菌后还需调pH
C．步骤③中需要配制含酚红的选择性培养基进行筛选
D．步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
5．（2022·江苏泰州·模拟预测）幽门螺杆菌（含有脲酶）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。下列有关叙述不正确的是（ ）
A．分离纯化幽门螺杆菌时应使用以尿素为唯一氮源的培养基
B．鉴别幽门螺杆菌时应在培养基中加入酚红指示剂和缓冲物质
C．可用牛肉膏蛋白胨培养基作对照证明选择培养基的选择作用
D．可采用稀释涂布平板法对幽门螺杆菌进行分离和计数
6．（2021·辽宁丹东·一模）下图所示为分离某种以尿素为氮源的细菌实验过程，下列叙述错误的是（ ）
A．土样从有哺乳动物尿液的地方取，获得目的菌种几率很高
B．为验证尿素固体培养基具有选择作用，可用牛肉膏蛋白胨固体培养基作对照
C．将实验组和对照组37℃恒温培养24至48h时，需将平板倒置
D．在尿素固体培养基上生长的细菌都是以尿素为氮源的细菌
7．（2021·山东淄博·一模）某生物兴趣小组尝试对土壤中分解尿素的细菌进行分离并计数，相关叙述正确的是（ ）
A．制备选择培养基时，需加入尿素、琼脂、葡萄糖、硝酸盐等物质
B．用活菌计数法统计结果，活菌的实际数目往往比统计的菌落数低
C．脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红
D．每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M，C为某一稀释度下平板上的平均菌落数
8．（2022·江苏·模拟预测）新疆的“生命营养液”是以多种天然食材为原料发酵而成。为从中分离到红曲菌（真菌），现用无菌水将其稀释成浓度为10-1g/mL、10-2g/mL、10-3g/mL的悬液，分别取0.1mL稀释液涂布于含有氯霉素和四环素的PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）平板上，制备3个平行组。然后将PDA平板置于恒温培养箱培养，并连续7天统计平板上的菌落数。下列叙述正确的是（ ）
A．制备PDA培养基时，先高压蒸汽灭菌2～3h，冷却后再进行分装
B．计数时平板上菌落过于密集，可多做几组平行组进行实验统计
C．恒温培养前，需在培养皿底部标明组别、培养日期和稀释度等
D．可大幅度提高“生命营养液”中氯霉素和四环素含量以抑制杂菌
9．（2022·重庆·二模）研究发现，土壤中某种微生物能降解石油。分离降解石油的菌株和探索其降解机制的实验过程如图所示。回答下列问题：
（1）该实验所用的振荡培养的培养基只能以石油作为唯一碳源，其原因是__________________________________________________，这种培养基属于___________培养基。
（2）振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快，原因是振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高______________的利用率。
（3）若要测定活菌数量，可选用_________________法进行计数；若要测定培养液中微生物的菌体数，可在显微镜下用________________________________直接计数。
（4）为探究石油的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_________________________________________________，该实验设计是否合理？_________为什么？______________________________________________________。
（5）丙图中3号试管中样品液的稀释倍数为_______倍，5号试管的结果表明每克土壤中的活菌数为___________。该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要________，因为_____________________________________________________________________。
10．（2022·湖南·模拟预测）解磷菌是土壤中的一类功能微生物，通过自身分泌的有机酸和磷酸酶等代谢产物，能使土壤中难溶性或不溶性的磷转化成易于被植物吸收利用的有效态磷。从土壤中分离纯化解磷菌的步骤如下：
（1）按规范流程配制蒙金娜无机磷（磷酸三钙）培养基（见表格）：计算、称量、溶化和____________________后倒平板。从功能来看，此培养基属于___________培养基，其中酵母膏中含有的主要营养物质为______________________________（填1种）。
物质 葡萄糖 （NH4）2SO4 NaCl KCl FeSO4·7H2O MgSO4·7H2O
质量/g 10 0.5 3 0.3 0.03 0.3
物质 MnSO4·H2O CaCO3 酵母膏 磷酸三钙 琼脂 /
质量/g 0.03 5 0.4 20 30
（2）称取土壤_________g，溶于9mL无菌水中，10倍稀释法分别将梯度稀释至10-1~10-6倍，可选择_____________________________3个稀释倍数用移液枪吸取100μL土壤稀释液涂布至上述培养基中，37℃培养5d。观察出现解磷圈（透明圈）菌落的解磷圈直径（D）、菌落直径（d），以此初步确定菌株的解磷能力。已知接种的四个平板上的菌落数分别为215、236、312和254，每毫升土壤原液中的解磷菌活菌数约为2.35×108个，则土壤原液的稀释倍数为__________倍。
（3）从上述菌中找到解磷能力最强的菌进行扩大培养，并进行了磷酸酶的提取和分离，为了鉴定磷酸酶的分子纯度可以采用_____________________________________（方法）。
（4）将解磷能力最强菌重新接种振荡培养的菌悬液1mL，与1mL LB甘油液体培养基（含质量分数为40%的甘油），在2mL保藏管内混匀（甘油最终质量分数为20%），标记好菌株名称、日期，保存于______℃冰箱。
同类题练习参考答案
1．C 【解析】从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；筛选纤维素分解菌需要用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，在培养基中加入刚果红染液，在其菌落周围会出现透明圈。选择培养的原理是人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长，因此选择培养的目的是促进纤维素分解菌生长，抑制其他微生物的生长，A正确；振荡培养可以增加溶解氧量，促进微生物对营养物质和氧气的充分接触和利用，B正确；鉴别培养基上涂布接种时，将0.1mL菌液滴到培养基表面再用涂布器涂布均匀，C错误；加入刚果红的培养基上所出现的有透明圈的菌落，可能是分解纤维素的细菌或依赖刚果红而生存的真菌繁殖而成，D正确。故选C。
2．D【解析】穿刺接种法：用接种针取少许菌垂直穿刺于半固体培养基中进行培养，常用来接种厌氧菌、检查细菌的运动性或保藏菌种。根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，称为选择培养基。穿刺接种法常用来接种厌氧菌，因此为创造无氧环境，可采用穿刺接种法，A正确；由图可知，该实验使用的固体培养基，目的是分离出能够分解尿素的细菌，是典型的选择培养基，B正确；细菌想要分解尿素，必然含有能够分解尿素的酶，即细菌能合成脲酶，C正确；脲酶将尿素分解为氨和CO2，氨会使培养基碱性增强，pH升高，D错误。故选D。
3．B【解析】分解纤维素的微生物的分离实验的原理：①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。该实验的目的是从土壤中分离纤维素分解菌并计数，因此该刚果红培养基应该以纤维素为唯一碳源，A正确；微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法可用于计数，平板划线法不能用来计数，故将菌液分散在培养基表面应该用稀释涂布平板法，B错误；有透明圈说明纤维素被纤维素酶催化降解，透明圈大小与纤维素酶的量与活性有关，透明圈越大，说明降解纤维素能力越强，由图可知，菌落丁周围的透明圈最大，说明其降解纤维素的能力最强，C正确；由于显微镜直接计数时统计的数据包括了已经死亡的细菌，所以其统计的结果往往比活菌实际数目多，D正确。故选B。
4．A【解析】由于细菌分解在尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，pH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，pH升高，指示剂变红。步骤③是利用稀释涂布平板法将聚集的细菌分散成单个，从而获得单细胞菌落，A正确；制备培养基时，需要先调节pH，后进行高压蒸汽灭菌，B错误；步骤③中含有酚红指示剂的培养基是鉴别培养基，C错误；由于实验目的是筛选高效分解尿素细菌，所以应该以尿素作为唯一的氮源，而不应该加入牛肉膏和蛋白胨，D错误，故选A。
5．B【解析】脲酶可以将尿素分解成二氧化碳和氨气。分离纯化细菌的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。幽门螺杆菌可以合成脲酶，可以利用尿素，所以分离纯化幽门螺杆菌时应使用以尿素为唯一氮源的培养基，A正确；由于幽门螺杆菌在分解尿素的过程中会合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，使培养基碱性增强，pH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，即在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，pH升高，则该菌落周围会出现红色环带，故鉴别幽门螺杆菌时应在培养基中加入酚红指示剂，但不能加缓冲物质，B错误；为了证明选择培养基的选择作用，可用牛肉膏蛋白胨培养基做对照，牛肉膏蛋白胨培养基为普通培养基，不具有选择性，如果牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数大于选择培养基，说明选择培养基有选择作用，C正确；稀释涂布平板法可以用于微生物的分离和计数，因此对幽门螺杆菌进行分离和计数可才用稀释涂布平板法，D正确。故选B。
6．D【解析】分离某种以尿素为氮源的细菌实验过程：土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。在含哺乳动物排泄物的土壤中有较多含脲酶的细菌，因此土样从有哺乳动物排泄物的地方取，获得目的菌种几率很高，A正确；取不同稀释倍数的土壤稀释液各0.1mL，分别涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基、尿素固体培养基上，其中牛肉膏蛋白胨固体培养基是对照，B正确；将实验组和对照组37℃恒温培养24至48h时，需将平板倒置，C正确；在尿素固体培养基上生长的细菌大多数是以尿素为氮源的细菌，还有一些利用空气中氮的微生物等，D错误。故选D。
7．D【解析】分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有尿素、琼脂糖、葡萄糖，尿素给分解尿素的细菌提供氮源，不能加硝酸盐，否则无法起到选择出尿素分解菌的作用，A错误；用活菌计数法统计结果时，有的活菌在培养过程中会死亡，而有的菌落是由多个活菌共同形成的，故活菌的实际数目往往比统计的菌落数高，B错误；脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH增加，加入酚红指示剂后变红，C错误；每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数，D正确。故选D。
8．C【解析】制备PDA培养基时，要先分装再高压蒸汽灭菌，防止分装过程杂菌污染，A错误；计数时平板上菌落过于密集，可稀释之后在进行计数，多做几组平行组进行实验统计是为了减少实验误差，B错误；恒温培养前，需在培养皿底部标明组别、培养日期和稀释度等，便于进行实验统计和对比观察，C正确；氯霉素和四环素是针对细菌起作用的抗生素，且大幅度提高“生命营养液”中氯霉素和四环素含量会导致培养液渗透压升高，也会抑制红曲菌生长，D错误。故选C。
9．（1）只有能降解石油的微生物能正常生长繁殖 选择
（2）溶解氧 营养物质
（3）稀释涂布平板 血细胞计数板(或特定的细菌计数板)
（4）目的菌能分泌降解石油的蛋白质　 不合理 缺少对照实验
（5）104 1.7×109 低 两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落
【解析】分析题图：图示是探索石油降解机制的实验过程，图甲中，首先用选择培养基从土壤中筛选菌种，再采用平板划线法分离出相应的菌种；图乙中：测定石油降解率。
（1）选择培养基只允许特定种类的微生物生长，又要抑制或阻止其他种类微生物生长，因而必须以石油为唯一碳源只让目的菌株生存繁殖，培养基上只有能降解石油的微生物能正常生长繁殖。
（2）振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；同时还能使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。
（3）图中检测土样中细菌含量采用的接种方法是稀释涂布平板法。若要测定培养液中微生物的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数。
（4）从图乙上清液中加入蛋白酶溶液可知是用于水解上清液中的某蛋白质的，由此可判定实验假设是目的菌株通过分泌某种蛋白质来降解石油，但是尚需设置不加入蛋白酶的对照组实验，否则没有说服力，因而不合理。
（5）将10g土样加入到90mL无菌水中定容至100mL后，土样稀释10倍，再经3次10倍稀释得到3号试管中的样品，故3号试管中样品的稀释倍数是104倍。5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为（168+175+167) ÷3÷0.1×106=1.7×109个。该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，因为两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。
10．（1）调pH、灭菌 选择 碳源、氮源、生长因子（或特殊营养物质）
（2）1 10-4、10-5、10-6g/mL 10-5
（3）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
（4） 20
【解析】培养基的配制过程为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
（1）调pH、灭菌后，倒平板。按规范流程配制蒙金娜无机磷（磷酸三钙）选择培养基。其中酵母膏中含有的主要营养物质为碳源、氮源、生长因子。
（2）称取土壤1g，溶于9mL无菌水中，即对土壤进行了10倍稀释。根据土壤中细菌的数目，且平板要用于计数，一般应选取10-4、10-5、10-6g/mL稀释梯度。由于平板上的菌落数为312的平板已经超出了30~300的统计范围，需要舍去，实际计算215、236和254三个平板的平均值，为235个菌落。这是0.1mL涂布下的平均值，1mL则为2350个菌落，每毫升土壤原液中的解磷菌活菌数约为2.35×108个，所以稀释了（2.35×108）/2350=105倍，即土壤原液的稀释倍数为10-5倍。
（3）鉴定磷酸酶（蛋白质）的分子大小可以采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
（4）甘油管藏法要保存于 20℃冰箱。
答案第1页，共2页
13 / 13

展开更多......

收起↑