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人教(2019)生物必修1（知识点+跟踪检测）
第9讲 降低化学反应活化能的酶
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2.2.1　说明绝大多数酶是一类能催化生化反应的蛋白质，酶活性受到环境因素 如pH和温度等 的影响
一、酶的本质及作用
1．酶的基础知识
化学本质 绝大多数是蛋白质 少数是RNA
合成原料 氨基酸 核糖核苷酸
合成场所 核糖体 主要是细胞核
来源 一般来说，活细胞都能产生酶
生理功能 具有催化作用
作用原理 降低化学反应的活化能
2.酶的作用原理
据无酶催化条件和有酶催化条件下某化学反应的能量变化过程图填空。
(1)无酶催化的反应曲线是②。
(2)有酶催化的反应曲线是①。
(3)ca段的含义是在无催化剂的条件下，反应所需要的活化能。
(4)ba段的含义是酶降低的活化能。
(5)若将酶催化改为无机催化剂催化该反应，则b点在纵轴上将向上移动。
二、酶的作用特性及影响因素
[基础微点练清]
1．判断正误
(1)酶与底物结合后，酶的构象不发生改变(×)
(2020·浙江选考，T1A)
(2)植物、动物和微生物能产生淀粉酶(√)
(2020·浙江选考，T5A)
(3)酶能为反应物提供能量(×)
(新人教版必修1 P80“概念检测”T2A)
(4)嫩肉粉中起分解作用的酶是纤维素酶(×)
(新人教版必修 1 P85“概念检测”T1)
(5)过酸、过碱或者温度过高，都会破坏酶的空间结构，从而使肽键断裂(×)
(6)细胞中各类化学反应之所以能有序进行，与酶在细胞中的分布有关(√)
(7)酶的基本组成单位是氨基酸和脱氧核糖核苷酸(×)
2．(2021年1月新高考8省联考·湖北卷)在生物体内，酶是具有催化作用的有机物。下列关于酶的叙述，错误的是(　　)
A．过氧化氢酶、脲酶和麦芽糖酶的化学本质都是蛋白质
B．DNA聚合酶和DNA连接酶都能催化磷酸二酯键的形成
C．胰蛋白酶的合成及分泌与核糖体、内质网和高尔基体有关
D．淀粉酶和盐酸通过降低反应物的活化能催化淀粉水解
解析：选D　绝大多数酶的化学本质都是蛋白质，少数酶的化学本质是RNA。而过氧化氢酶、脲酶和麦芽糖酶的化学本质是蛋白质，A正确。DNA聚合酶能催化磷酸二酯键的形成，从而将游离的脱氧核苷酸连接到正在合成的子链上；DNA连接酶也能催化磷酸二酯键的形成，从而将两个DNA片段连接到一起，B正确。胰蛋白酶属于分泌蛋白，分泌蛋白的合成首先要在核糖体上合成肽链，然后还要经过内质网和高尔基体的加工，形成一定的空间结构，C正确。淀粉酶和盐酸都能催化淀粉的水解，其作用机理是降低淀粉分解反应的活化能，而不是降低反应物的活化能，D错误。
3．下列有关酶的叙述正确的是(　　)
①是有分泌功能的细胞产生的　②有的从食物中获得，有的在体内转化而来　③凡是活细胞，一般都能产生酶　④酶都是蛋白质　⑤有的酶不是蛋白质　⑥酶在代谢中有多种功能　⑦在新陈代谢和生长发育中起调控作用　⑧酶只是起催化作用
A．①②⑤　　　　　　　　　 B．④⑤⑧
C．③⑤⑧ D．①③⑤
解析：选C　凡是活细胞，一般都能产生酶，①错误，③正确；酶只能在细胞内合成，②错误；酶的本质绝大部分是蛋白质，少数是RNA，④错误，⑤正确；酶在代谢中只起催化作用，⑥⑦错误，⑧正确。
4．人体蛋白质被水解的过程如图所示，下列相关叙述正确的是(　　)
A．蛋白质的水解只发生在细胞外，如消化道内
B．该过程中酶分子可发生可逆性形变
C．该过程为放能反应，释放的能量可用于合成ATP
D．可用单位时间内分解蛋白质的量代表酶的活性
解析：选B　蛋白质的水解也会发生在细胞内，A错误；蛋白质的水解反应不释放能量，C错误；单位时间内蛋白质的减少量可以代表酶促反应速率，但不能代表酶活性，D错误。
5．(新人教版必修1 P80“概念检测”T1)酶对细胞代谢起着非常重要的作用，可以降低化学反应的活化能。下列关于酶的作用特点及本质的叙述，正确的是(　　)
A．酶不能脱离生物体起作用
B．酶只有释放到细胞外才起作用
C．所有的酶都是蛋白质
D．酶是具有催化作用的有机物
解析：选D　酶可以脱离生物体在体外起作用，也可以在细胞内部起作用。酶大多数是蛋白质，少数是RNA，酶是具有催化作用的有机物。
6．(新人教版必修1 P78“科学方法”)生物学实验中经常用到对照实验，那么什么是对照实验？
提示：除作为自变量的因素外，其余因素(无关变量)都保持一致，并将结果进行比较的实验叫作对照实验。
一、酶的本质和作用
[试考题·查欠缺]
1．(2021·福州模拟)在蛋白质合成过程中，肽酰转移酶催化核糖体上一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基间形成肽键。该酶对核糖核酸酶敏感，但对蛋白酶不敏感。下列关于肽酰转移酶的叙述错误的是(　　)
A．肽酰转移酶在核糖体上合成
B．肽酰转移酶在核糖体中起作用
C．肽酰转移酶催化氨基酸脱水缩合
D．肽酰转移酶能降低反应的活化能
解析：选A　肽酰转移酶对核糖核酸酶敏感，但对蛋白酶不敏感，说明该酶的化学本质是RNA，不是在核糖体上合成的，A错误；肽酰转移酶催化核糖体上一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基间形成肽键，而肽键的合成场所是核糖体，由此可见肽酰转移酶在核糖体中起作用，并能催化氨基酸脱水缩合，B、C正确；酶能降低化学反应的活化能，D正确。
2．(2018·浙江选考)酶是生物催化剂，其作用受pH等因素的影响。下列叙述错误的是(　　)
A．酶分子有一定的形状，其形状与底物的结合无关
B．绝大多数酶是蛋白质，其作用的强弱可用酶活性表示
C．麦芽糖酶能催化麦芽糖的水解，不能催化蔗糖的水解
D．将胃蛋白酶加入pH＝10的溶液中，其空间结构会改变
解析：选A　酶具有一定的形状，酶的活性部位与底物结合形状发生改变发挥催化作用，作用完成后恢复原状，其形状与底物的结合有关；酶的本质绝大多数是蛋白质，少数是RNA，其催化作用的强弱可以用酶活性来表示；酶具有专一性，麦芽糖酶可以催化麦芽糖水解，不能催化蔗糖水解；酶在过酸或过碱的溶液中会发生变性失活，胃蛋白酶的最适pH为1.8左右，加入pH＝10的溶液中会使酶变性，空间结构发生改变。
3．(2021·汕头模拟)为验证食虫植物猪笼草的分泌液中含有蛋白酶，某学生设计了两组实验，如图所示。在35 ℃水浴中保温一段时间后，甲、乙试管中分别加入适量双缩脲试剂，丙、丁试管中不加任何试剂，可以达到实验目的的是(　　)
A．只有实验②可以 B．只有实验①可以
C．实验①、实验②都可以 D．实验①、实验②都不可以
解析：选A　由题意可知，本实验的目的是验证猪笼草分泌液中含有蛋白酶，实验的原理是若猪笼草分泌液中含有蛋白酶，蛋白质会被分解，又由于蛋白酶的本质是蛋白质，蛋白酶也可以与双缩脲试剂反应，因此不能通过双缩脲试剂检测蛋白质是否分解，可以通过蛋白块体积变化来判断蛋白质是否水解，则只有实验②可以达到实验目的。
[强知能·补欠缺]
1．从八个角度辨析有关酶的说法
项目 错误说法 正确理解
产生场所 具有分泌功能的细胞才能产生 活细胞(不考虑哺乳动物成熟红细胞等)
化学本质 蛋白质 有机物(大多为蛋白质，少数为RNA)
合成原料 氨基酸 氨基酸或核糖核苷酸
作用场所 只在细胞内起催化作用 可在细胞内、细胞外、体外发挥作用
合成场所 在核糖体上合成 在核糖体或细胞核中合成
温度影响 低温和高温均使酶变性失活 低温只抑制酶的活性，不会使酶变性失活；高温使酶变性失活
作用 酶具有调节、催化等多种功能 酶只起催化作用
来源 有的可来源于食物等 酶只在生物体内合成
　　2.酶的作用机理
酶作用的实质是降低化学反应的活化能。与无机催化剂相比，酶降低活化能的作用更显著，两者的比较如图所示。
图中各字母代表的含义：a、b、c分别代表无催化剂、使用无机催化剂、使用酶催化的化学反应过程，E1、E2、E3分别代表进行相应化学反应所需的活化能，ΔE代表使用酶后降低的活化能。
3．比较法助记酶与动物激素的“一同三不同”
相同：都具有微量、高效的特点，也具有一定特异性
不同 产生部位 几乎所有活细胞都产生酶；而只有内分泌细胞才能产生激素
化学本质 酶绝大多数是蛋白质，少数为RNA；激素的化学本质则为蛋白质、脂质、氨基酸衍生物等
作用机制 酶是催化剂，在化学反应前后，质量和性质不变；激素作为信号分子在发挥完作用后被灭活
4．联想法记忆具有“专一性(特异性)”的五类物质
(1)酶：每一种酶只能催化一种或一类化学反应。如限制性核酸内切酶能识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。
(2)载体蛋白：某些物质通过细胞膜时需要载体蛋白协助，不同物质所需载体不同，载体蛋白的专一性是细胞膜选择透过性的基础。
(3)激素：激素特异性地作用于靶细胞、靶器官，其原因在于它的靶细胞膜或胞内存在与该激素特异性结合的受体。
(4)tRNA：tRNA有61种，每种tRNA只能识别并转运一种氨基酸。
(5)抗体：抗体只能与相应的抗原发生特异性结合。
[练题点·全过关]
1．核酶是一类具有催化功能的单链RNA分子，可降解特定的mRNA序列。下列关于核酶的叙述错误的是(　　)
A．核酶的基本单位是核糖核苷酸
B．核酶能降低反应所需的活化能
C．核酶与脂肪酶的元素组成相同
D．核酶同样具有专一性和高效性
解析：选C　核酶的本质是RNA，脂肪酶的本质是蛋白质，二者的组成元素不同。
2．下列关于激素、抗体、酶和神经递质的叙述，正确的是(　　)
A．激素和抗体都具有特异性，只能作用于特定的靶细胞
B．激素和酶都具有高效性，能产生酶的细胞一定能产生激素
C．激素弥散在全身的体液中，一经靶细胞接受即被灭活
D．乙酰胆碱与特定分子结合后可在神经元之间传递信息
解析：选D　激素和抗体都具有特异性，激素只能作用于特定的靶细胞或靶器官，但抗体只能与相应的抗原结合，A错误；激素是由内分泌器官(或细胞)分泌的，酶是由活细胞产生的，激素和酶都具有高效性，能产生激素的细胞一定能产生酶，但能产生酶的细胞不一定能产生激素，B错误；内分泌腺分泌的激素弥散到体液(细胞外液)中，随血液流到全身，经靶细胞接受并发挥作用后才被灭活，C错误；乙酰胆碱是一种兴奋性神经递质，与突触后膜上特异性受体结合后可在神经元之间传递信息，D正确。
3．(2021年1月新高考8省联考·重庆卷)下列关于酶的叙述，正确的是(　　)
A．细胞衰老过程中所有酶的活性降低
B．胰蛋白酶能彻底水解蛋白质
C．赤霉素能诱导α淀粉酶产生
D．过氧化氢酶能升高过氧化氢的活化能
解析：选C　细胞衰老过程中，多种酶的活性降低，但与细胞衰老有关的酶的活性升高，A错误；胰蛋白酶可将蛋白质水解成多肽，但蛋白质彻底水解需要肽酶，B错误；赤霉素能诱导α淀粉酶产生，使种子无需萌发即可产生α淀粉酶，C正确；酶的作用机理是降低化学反应的活化能，D错误。
4．如图表示某反应进行时，有酶参与和无酶参与的能量变化，则下列叙述正确的是(　　)
A．此反应为放能反应
B．曲线Ⅰ表示有酶参与
C．E2为反应前后能量的变化
D．酶参与反应时，所降低的活化能为E4
解析：选D　曲线Ⅱ是有酶催化条件下的能量变化，其降低的活化能为E4，反应前后能量的变化应为E3，反应产物的能量值比反应物的高，所以此反应为吸能反应。
二、酶的三大特性及影响因素
[试考题·查欠缺]
1．(2019·浙江选考)为研究酶的特性，进行了实验，基本过程如下表所示：
步骤 基本过程 试管A 试管B
1 加入2%过氧化氢溶液 3 mL 3 mL
2 加入马铃薯匀浆 少许 —
3 加入二氧化锰 — 少许
4 检测
据此分析，下列叙述错误的是(　　)
A．实验的可变因素是催化剂的种类
B．可用产生气泡的速率作检测指标
C．该实验能说明酶的作用具有高效性
D．不能用鸡肝匀浆代替马铃薯匀浆进行实验
解析：选D　比较试管A和试管B中加入的物质，可知本实验的自变量是催化剂的种类，A正确；二氧化锰和马铃薯匀浆都可催化过氧化氢分解产生氧气，因此可以用产生气泡的速率作检测指标，B正确；马铃薯匀浆中含有过氧化氢酶，二氧化锰属于无机催化剂，通过比较二者催化过氧化氢分解的情况，可以证明酶具有高效性，C正确；鸡肝匀浆中也含有过氧化氢酶，所以可以用鸡肝匀浆代替马铃薯匀浆进行实验，D错误。
2．(2020·北京高考)用新鲜制备的含过氧化氢酶的马铃薯悬液进行分解H2O2的实验，两组实验结果如图。第1组曲线是在pH＝7.0，20 ℃条件下，向5 mL 1%的H2O2溶液中加入0.5 mL酶悬液的结果，与第1组相比，第2组实验只做了一个改变。第2组实验提高了(　　)
A．悬液中酶的浓度　　　　　 B．H2O2溶液的浓度
C．反应体系的温度 D．反应体系的pH
解析：选B　H2O2可在过氧化氢酶的催化作用下生成水和O2。由图可知，第2组比第1组生成的O2的总量多，仅增加悬液中酶的浓度能够提高酶促反应速率，不能提高生成O2的总量，A错误；提高H2O2溶液的浓度，生成O2的总量会增加，B正确；提高反应体系的温度和pH，不能提高生成O2的总量，C、D错误。
3．(2021·鄂州模拟)不同的变量设置可用于验证酶的不同特性，相关实验记录如下表所示。
试管 1 2 3 4 5 6
斐林试剂 ＋ ＋ ＋ － － －
1%淀粉溶液 ＋ ＋ ＋ － － －
2%H2O2溶液 － － － ＋ ＋ ＋
少许MnO2 － － － － － ＋
新鲜唾液 － ＋ － － － －
少许鸡肝匀浆 － － ＋ － ＋ －
实验结果
注：“＋”表示添加，“－”表示不添加。
下列相关特性验证实验对应的组合选择或变量设置，错误的是(　　)
A．酶的催化性：1、2号对照
B．酶的专一性：1、2、3号对照
C．酶的高效性：4、5、6号对照
D．温度影响酶活性：5号逐渐变温前后对照
解析：选D　1号不加酶，2号加淀粉酶，1、2号对照可得出酶具有催化性，1号不加酶，2号加淀粉酶，3号加鸡肝匀浆(含H2O2酶)，1、2、3号对照可得出酶具有专一性；4号不加催化剂，5号加鸡肝匀浆(含H2O2酶)，6号加无机催化剂，4、5、6号对照可得出酶具有高效性；验证温度影响酶活性的实验应设置不同温度作为变量形成对照，5号逐渐变温前后对照不能达到实验目的。
[强知能·补欠缺]
1．用曲线模型表示酶的三大特性
(1)图1中酶对应曲线A，无机催化剂对应曲线B，未加催化剂对应曲线C，由此说明，与无机催化剂相比，酶的催化作用具有高效性。
(2)图2中加入酶B的反应速率和无酶条件下的反应速率相同，说明酶B对此反应无催化作用，而加入酶A的反应速率随反应物浓度的增大明显加快，说明酶的催化作用具有专一性。
(3)①图3中b点表示最适温度，e点表示最适pH。
②温度在a点时，酶的活性较低，但不会失活；温度大于或等于c点，酶会失活。pH≤d点、pH≥f点，酶会失活。
③由图3可知，酶的作用条件较温和，在最适宜的温度和pH条件下，酶的活性最高。
2．用曲线模型表示影响酶促反应的因素
(1)底物浓度、酶浓度与酶促反应速率的关系(图1、2)
①图1：在其他条件适宜、酶量一定的情况下，酶促反应速率随底物浓度增加而加快，但当底物达到一定浓度后，受酶数量和酶活性限制，酶促反应速率不再增加。
②图2：在底物充足、其他条件适宜的情况下，酶促反应速率与酶浓度呈正相关。
(2)温度和pH与酶促反应速率的关系(图3)
①图3：温度和pH是通过影响酶活性来影响酶促反应速率的；底物浓度和酶浓度是通过影响底物与酶的接触来影响酶促反应速率的，并不影响酶的活性。
②图3：反应溶液pH的变化不影响酶作用的最适温度；反应溶液温度的变化也不改变酶作用的最适pH。
(3)反应时间与酶促反应的关系(图4、5、6)
①图4、5、6的时间t0、t1和t2是一致的。
②随着反应的进行，反应物因被消耗而减少，生成物因积累而增多。
③t0～t1段，因反应物较充足，所以反应速率较高，反应物消耗较快，生成物生成速率较快。t1～t2段，因反应物含量较少，所以反应速率降低，反应物消耗较慢，生成物生成速率较慢。t2时，反应物被消耗干净，生成物也不再增加，此时反应速率为0。
[练题点·全过关]
1．如图是验证“酶的催化效率”活动的示意图。甲、乙两试管中发生的现象可用于证明酶具有(　　)
A．高效性　　　　　　　　 B．专一性
C．多样性 D．易变性
解析：选A　二氧化锰属于无机催化剂，它和肝脏研磨液中过氧化氢酶相比，后者催化产生较多的气泡，并且气泡产生速率较快，可用于验证酶具有高效性。
2．某兴趣小组探究乙醇的浓度和铁离子对纤维素酶活性的影响时进行了相关实验，结果如图所示，下列相关叙述正确的是(　　)
A．该实验的自变量是乙醇浓度，有无铁离子是无关变量
B．铁离子可使纤维素酶催化纤维素水解时的活化能升高
C．乙醇和铁离子对纤维素酶活化的抑制有相互促进作用
D．若要验证该酶的专一性，则实验的自变量是底物种类
解析：选D　根据该实验的目的可知，该实验的自变量是乙醇的浓度和有无铁离子，A错误；乙醇浓度为零时， 有铁离子组酶的活性较高，说明铁离子可使纤维素酶催化纤维素水解时的活化能降低，B错误；从图中信息可知，随着乙醇浓度的增大，纤维素酶的活性逐渐降低，可见乙醇对纤维素酶的活性有抑制作用，铁离子对纤维素酶的活性有促进作用，C错误；验证特定酶的专一性，实验的自变量是底物的种类，D正确。
3．(2021年1月新高考8省联考·湖北卷)甲同学从某哺乳动物的胃液中分离到了一种酶。为探讨该酶的最适pH，设计了如下实验方案，其中最合理的是(　　)
方案 pH范围 温度 酶活性测定 最适pH
A 1～6 25 ℃ 每间隔一个pH梯度进行酶活性测定 以pH对酶活性作图，酶活性最高时对应的pH为最适pH
B 1～14 25 ℃
C 1～6 37 ℃
D 1～14 37 ℃
解析：选C　哺乳动物的胃中存在胃酸，胃液呈酸性，故选取的pH范围应该是1～6。哺乳动物的体温一般和人类的体温差不多，作为本实验中的无关变量，应选择较适宜的温度37 ℃。
4．用某种酶进行有关实验的结果如图所示，下列有关说法错误的是(　　)
A．该酶的最适催化温度不确定
B．图2和图4能说明该酶一定不是胃蛋白酶
C．由图4实验结果可知酶具有高效性
D．由图3实验结果可知Cl－是酶的激活剂
解析：选C　图1显示温度对酶活性的影响，从图中能得到的结论是该酶的最适催化温度为30 ℃左右，A正确；图2显示该酶的最适pH为7，而胃蛋白酶的最适pH为1.5，由图4可知该酶为麦芽糖酶，B正确；图4说明酶具有专一性，C错误；图3能说明Cl－是酶的激活剂、Cu2＋是酶的抑制剂，D正确。
一、科学探究——巧用三种方法破解酶实验难题
1．鉴定酶的本质——试剂检测法
2．验证酶的高效性和专一性——对比法
(1)验证酶的高效性
[设计方案]
项目 实验组 对照组
材料 等量的同一种底物
试剂 与底物相对应的酶溶液 等量的无机催化剂
现象 反应速率很快； 或反应用时短 反应速率缓慢； 或反应用时长
结论 酶具有高效性
[操作示例]
(2)验证酶的专一性
[设计方案]
项目 方案一 方案二
实验组 对照组 实验组 对照组
材料 底物相同(等量) 与酶相对应的底物 另外一种底物
试剂 与底物相对应的酶 另外一种酶 同一种酶(等量)
现象 发生反应 不发生反应 发生反应 不发生反应
结论 酶具有专一性
[操作示例]
＋
3．探究酶的最适温度或pH——梯度法
[设计方案]
组别编号 1 2 … n
实验材料 等量的同种底物和酶
温度(或pH) t1(或a1) t2(或a2) … tn(或an)
衡量指标 相同时间内，各组酶促反应中生成物量的多少，或底物剩余量的多少
实验结论 生成物量最多的一组，或底物剩余量最少的一组对应的温度(或pH)最接近最适温度(或pH)
[操作示例]
(1)探究酶的最适温度
(2)探究酶的最适pH
O2的产生速率
[特别提醒]
酶活性实验探究中的“三宜”“四不宜”
(1)若底物选择淀粉和蔗糖，用淀粉酶来验证酶的专一性时，检测底物是否被分解的试剂“宜”选用斐林试剂，“不宜”选用碘液，因为碘液无法检测蔗糖是否被分解。
(2)若选择淀粉和淀粉酶探究酶的最适温度，检测底物被分解的试剂“宜”选用碘液，“不宜”选用斐林试剂，因为用斐林试剂鉴定时需水浴加热，而该实验中需严格控制温度。
(3)在探究酶的适宜温度的实验中，“不宜”选择过氧化氢(H2O2)和过氧化氢酶作实验材料，因为过氧化氢(H2O2)在常温常压时就能分解，加热的条件下分解会加快，从而影响实验结果。
(4)在探究pH对酶活性影响时，“宜”保证酶的最适温度(排除温度干扰)，且将酶溶液的pH调至实验要求的pH后再让反应物与底物接触，“不宜”在未达到预设pH前，让反应物与酶接触。　 　
[素养训练]
角度一　考查实验材料和实验试剂的选取
1．为了探究温度、pH 对酶活性的影响，下列实验设计最合理的是(　　)
实验编号 探究课题 选用材料与试剂
A 温度对酶活性的影响 过氧化氢溶液、新鲜的肝脏研磨液
B 温度对酶活性的影响 新制的淀粉酶溶液、可溶性淀粉溶液、碘液
C pH对酶活性的影响 新制的蔗糖酶溶液、可溶性淀粉溶液、碘液
D pH对酶活性的影响 新制的淀粉酶溶液、可溶性淀粉溶液、斐林试剂
解析：选B　过氧化氢受热易分解，不宜用过氧化氢酶探究温度对酶活性的影响，实验A不合理；蔗糖酶不能催化淀粉水解，故实验C不合理；斐林试剂呈碱性，能与酸性物质发生反应，不适合用于探究pH对酶活性的影响，故实验D不合理。
角度二　考查实验操作过程及评价
2．(2016·全国卷Ⅰ)若除酶外所有试剂已预保温，则在测定酶活力的实验中，下列操作顺序合理的是(　　)
A．加入酶―→加入底物―→加入缓冲液―→保温并计时―→一段时间后检测产物的量
B．加入底物―→加入酶―→计时―→加入缓冲液―→保温―→一段时间后检测产物的量
C．加入缓冲液―→加入底物―→加入酶―→保温并计时―→一段时间后检测产物的量
D．加入底物―→计时―→加入酶―→加入缓冲液―→保温―→一段时间后检测产物的量
解析：选C　在测定酶活力的实验中，需要保证pH和温度均相同且适宜，故缓冲液应在加入底物和酶之前加入，只有C项符合要求。
3．某同学为了探究pH对人唾液淀粉酶活性的影响，设计了如下实验步骤：
①在A、B、C、D、E 5支试管中分别加入pH 5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的适宜浓度缓冲液5 mL，再分别加入质量分数为1%的淀粉液1 mL。
②各试管中分别加入适当浓度的唾液稀释液1 mL，摇匀。
③将5支试管放入70 ℃恒温水浴中，保温时间相同且合适。
④取出各试管，分别加入斐林试剂2 mL，摇匀。
⑤观察各试管溶液的颜色，通过颜色深浅判断唾液淀粉酶作用的最适pH。
上述实验步骤中有2处错误，请更正并说明更正的理由(不考虑试剂的浓度和加入量、pH梯度以及实验重复次数)，以便实验能得到正确的预期结果。
(1)________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)酶的活性受温度的影响，本题探究的是pH对酶活性的影响，因此，温度应为无关变量，必须适宜，而70 ℃恒温水浴的温度过高，会导致5组试管中的酶因高温而失活，最终不同pH下的实验结果一样。(2)本题选择的是斐林试剂，通过检测产物的生成量来确定酶的活性高低，斐林试剂鉴定还原糖必须要加热，如果不加热，则任何一组都不会出现砖红色沉淀。
答案：(1)③中70 ℃应改为37 ℃。因为人唾液淀粉酶作用的最适温度为37 ℃　(2)在观察各试管中溶液的颜色之前应将各试管放在沸水浴中一段时间。因为在高温条件下斐林试剂与还原糖反应显色
二、科学探究——实验变量的分析与实验设计
一、实验变量分析
实验过程中可以变化的因素称为变量。在生物实验设计中对“变量”的确立、操纵成为实验设计成功与否的关键。
1．变量类型
2．(单一)变量控制原则
无论一个实验有几个自变量，都应确定一个自变量对应观测一个因变量，这就是单一变量原则，它是处理实验中复杂关系的准则之一。
单因子变量原则要求在实验组和对照组的实验中都只能有一个变量，这样得出的实验结果与单一变量之间就能形成一一对应关系，便于观察实验结果，以及便于分析实验结果的成因。
3．无关变量要一致(等量原则)
在实验设计和操作中，要尽量减少无关变量，而且不同的实验组中无关变量应完全相同，这样就可排除无关变量对实验的干扰，排除实验偶然性，提高实验的准确率。
二、实验设计策略
1．程序
2．步骤书写
3．实验结果处理：将实验的结果用文字、曲线图、柱形图、表格等形式予以表达。
[素养训练]
1．(2021·漳州四校联考)下列关于酶特性实验设计的叙述，正确的是(　　)
A．验证酶的专一性时，自变量一定是酶的种类
B．验证酶的高效性时，自变量是酶的浓度
C．探究温度对酶活性影响时，自变量是温度
D．探究酶催化作用的最适pH时，应设置过酸、过碱、中性三组
解析：选C　验证酶的专一性时，自变量可以是酶的种类，也可以是底物的种类，A错误；验证酶的高效性时，自变量是催化剂的种类，B错误；探究温度对酶活性影响时，自变量是温度，C正确；探究酶催化最适pH时，过酸、过碱会使酶变性，使结果不精确，应设置酸性、中性、碱性多组不同pH的实验组，使实验尽可能精确，D错误。
2．下列有关实验设计的叙述，正确的是(　　)
A．实验材料的数量、温度和时间都可能是实验的变量
B．各种实验都必须单独设置对照组，确保单一变量
C．数据测量时只要认真准确记录，无需多次测量求平均值
D．探究实验中，实验结果总是与提出的假设一致
解析：选A　变量即实验过程中可以变化的因素，实验材料的数量、温度和时间都可能是实验的变量，A正确；探究实验一般都需要设置对照组，但也可能均为实验组，各组之间形成相互对照，B错误；进行数据测量时，为了减少误差，需多次测量求平均值，C错误；探究实验中，可能出现实验的结果与假设矛盾，可能是假设不正确，那么就需要进一步查找资料，重新作出假设，也可能是实验过程中的某一环节出了问题，那么就需要重新进行实验，D错误。
3．酶抑制剂能降低酶的活性，不同的抑制剂对酶活性的影响不同。某科研小组通过实验研究了两种抑制剂对某消化酶酶促反应速率的影响，对实验的结果进行分析并绘图，请回答下列问题：
(1)该实验的自变量是________________，实验中对无关变量应进行控制，该实验的无关变量有____________________________________(至少答出两项)。
(2)据图分析，随着底物浓度的升高，抑制剂________(填类型)的作用逐渐减小甚至消失。从活化能的角度分析，推测抑制剂降低酶促反应速率的原理是________________________________________________________________________。
(3)某同学认为该实验小组的实验过程应是：
a．将某消化酶溶液等分为①②③三组，将每组等分为若干份；
b．在一定条件下将三组消化酶溶液均与等量的不同浓度的底物混合；
c．在①中加入一定量的蒸馏水，②中加入等量的抑制剂Ⅰ，③中加入等量的抑制剂Ⅱ；
d．定时取样检测各反应中底物的量或产物的量，记录实验结果并绘图。
你认为该实验操作是否正确？________。如果不正确，请进行改正，________________________________________________________________________。
解析：(1)由图可知，该实验的自变量有两个，分别是抑制剂种类和底物浓度。该实验的无关变量有温度、pH、酶浓度、抑制剂的使用量、反应时间等。(2)由图可知，随着底物浓度的升高，曲线②的酶促反应速率逐渐与曲线①无抑制剂时相同，即抑制剂Ⅰ的作用逐渐减小甚至消失。抑制剂能降低酶活性，酶能降低化学反应所需的活化能。(3)该实验操作不正确，若对酶处理前先将酶与底物混合，则酶会与底物发生反应，故应先对酶进行不同的处理，然后再将处理后的酶与底物混合。
答案：(1)抑制剂种类和底物浓度　温度、pH、酶浓度、抑制剂的使用量等　(2)Ⅰ　在抑制剂的作用下，酶的活性(催化效率)降低，其降低化学反应活化能的能力下降(合理即可)　(3)不正确　步骤c应与步骤b互换，即先对酶溶液进行处理再加入底物(合理即可)
一、选择题
1．下列有关酶的叙述，正确的是(　　)
A．酶分子是在基因的指导下，在核糖体上合成的
B．一种酶催化化学反应的种类与其空间结构有关
C．经高温处理的胃蛋白酶，加入双缩脲试剂后不会出现紫色
D．酶与无机催化剂都通过提高化学反应的活化能来起催化作用
解析：选B　极少数酶为RNA，其合成场所是细胞核，A错误；蛋白质经高温处理后，仅是空间结构遭破坏，并没有破坏肽键，遇双缩脲试剂仍呈紫色，C错误；酶与无机催化剂都通过降低化学反应的活化能来起催化作用，D错误。
2．下列有关酶的探究实验的描述，正确的是(　　)
A．将温度由低温调至最适温度，酶的活性不变
B．探究蛋白酶的专一性，可用双缩脲试剂进行检测
C．酶的活性增强，产物的生成量增加
D．较低的pH环境中，胃蛋白酶仍能保持活性
解析：选D　低温抑制酶的活性，将温度由低温调至最适温度，酶的活性上升，A错误；探究蛋白酶的专一性，不可用双缩脲试剂进行检测，因为蛋白酶的本质是蛋白质，也会与双缩脲试剂反应，B错误；酶不会改变反应的平衡点，产物的生成量不会增加，C错误；胃蛋白酶的最适pH是1.5，较低的pH环境中，胃蛋白酶仍能保持活性，D正确。
3．下列关于酶的叙述正确的是(　　)
A．激素都是通过影响靶细胞内酶活性来调节细胞代谢
B．酶具有催化作用，并都能与双缩脲试剂反应呈紫色
C．酶的合成都包括转录和翻译两个过程
D．RNA聚合酶能催化转录过程，也能使DNA中的氢键断裂
解析：选D　激素调节细胞代谢既可以通过影响靶细胞内酶活性来调节，也可以通过影响靶细胞内某些控制酶合成的基因的表达来调节酶的数量，从而调节细胞代谢，A错误；酶是蛋白质或RNA，其中RNA不能与双缩脲试剂发生紫色反应，B错误；酶是蛋白质或RNA，其中蛋白质的合成包括转录和翻译两个过程，而RNA的合成只包括转录过程，C错误；RNA聚合酶催化RNA的合成过程，也能在转录过程中起到解旋的作用，因此能使DNA中的氢键断裂，D正确。
4．如图是酶催化特性的“酶－底物复合反应”模型，图中数字表示反应过程，字母表示相关物质。则下列各选项对此图意的解释正确的是(　　)
A．X是酶，过程①表示缩合反应
B．Y可表示酶，过程②体现了酶的多样性
C．复合物Z是酶发挥高效性的关键
D．①、②可以表示葡萄糖水解过程
解析：选C　据图分析，X在化学反应前后不变，表示酶；Y在酶的作用下生成F和G，说明该反应是分解反应，A错误。根据以上分析可知，Y不是反应物，过程②体现了酶具有催化作用，B错误。图中的复合物Z是酶与反应物的结合体，是酶发挥高效性的关键，C正确。葡萄糖是单糖，是不能水解的糖，D错误。
5．下列关于酶的叙述，正确的是(　　)
A．病毒都不含酶，所以酶只存在于细胞中
B．豌豆的圆粒与皱粒的差异在于能否合成淀粉酶
C．光合作用相关的酶只存在于类囊体膜和叶绿体基质
D．处于间期的根尖分生区细胞中有DNA聚合酶和RNA聚合酶
解析：选D　HIV含有逆转录酶，某些RNA病毒含有RNA复制酶，A错误；豌豆的圆粒与皱粒的差异是能否合成淀粉分支酶，B错误；对于绿色植物而言，光合作用相关的酶只存在于类囊体膜和叶绿体基质，但对于蓝藻而言，没有叶绿体，光合作用相关的酶存在于细胞质中，C错误；根尖分生区细胞在有丝分裂的间期会进行DNA复制和有关蛋白质的合成，因此细胞中存在DNA聚合酶，合成蛋白质的过程需要先转录，有RNA聚合酶的参与，D正确。
6．如图为某酶促反应过程示意图，有关叙述正确的是(　　)
A．图中R表示酶，可以为酶促反应提供活化能
B．温度、pH过高或过低会破坏酶的空间结构，使酶失活
C．加酶洗衣粉中的酶制剂通过催化图示反应，洗去各种污渍
D．活细胞产生的酶在生物体外适宜的条件下仍然具有催化活性
解析：选D　酶可以降低酶促反应所需的活化能，A错误；低温降低酶活性，不破坏酶结构，B错误；酶催化的专一性指一种酶只能催化一种或一类化学反应，图中仍是催化一种化学反应，只能去除某一种污渍，C错误；活细胞产生的酶在生物体外适宜的条件下仍然具有催化活性，D正确。
7．科学家使用巯基乙醇和尿素处理牛胰核糖核酸酶(牛细胞中的一种蛋白质)，可以将该酶去折叠转变成无任何活性的无规则卷曲结构。若通过透析的方法除去尿素和巯基乙醇，再将没有活性的酶转移到生理缓冲溶液中，经过一段时间以后，发现胰核糖核酸酶活性得以恢复。下列叙述错误的是(　　)
A．胰核糖核酸酶空间结构的形成与肽链的盘曲、折叠方式等有关
B．这个实验说明环境因素能影响蛋白质的空间结构而影响其功能
C．用强酸强碱等处理胰核糖核酸酶也能导致其蛋白质结构的改变
D．巯基乙醇和尿素处理破坏了胰核糖核酸酶中的肽键导致其变性
解析：选D　胰核糖核酸酶是蛋白质，其空间结构的形成与肽链的盘曲、折叠方式等有关，A正确；分析题意，该实验说明环境因素能影响蛋白质的空间结构而影响其功能，B正确；由于胰核糖核酸酶的化学本质是蛋白质，因此受到强酸强碱的处理时，空间结构会发生改变而导致酶变性失活，C正确；根据题意，巯基乙醇和尿素处理破坏了胰核糖核酸酶的空间结构导致其变性，D错误。
8．下列关于生物体内一些重要生理作用的叙述，正确的是(　　)
A．酶都具有高效性，并且只能在细胞内发挥作用
B．任何条件下，每摩尔葡萄糖分解生成ATP的量是恒定的
C．当种子从休眠进入萌发状态后，自由水/结合水比值下降
D．同一种酶在不同的温度条件下，其催化效率可能是相同的
解析：选D　酶可在细胞内或细胞外发挥作用，A错误；有氧和无氧条件下，每摩尔葡萄糖分解生成ATP的量不同，B错误；当种子从休眠进入萌发状态后，自由水/结合水比值升高，C错误；同一种酶分别在最适温度前和最适温度后可能具有相同的催化效率，D正确。
9.
如图是研究淀粉酶浓度与其催化效率关系的曲线。下列叙述错误的是(　　)
A．本研究的自变量是淀粉酶浓度和反应时间
B．实验中应注意保持各组反应在相同且适宜温度下进行
C．曲线c对应酶浓度比曲线a对应酶浓度低
D．引起曲线上M、P点差异的主要原因是各组反应中加入的淀粉总量不同
解析：选D　结合题意分析曲线图可知，本研究的自变量是淀粉酶浓度和反应时间，A正确；实验中应注意保持各组反应在相同且适宜温度下进行，以保证无关变量相同且适宜，B正确；酶浓度越高，酶促反应速率越快，反应需要的时间越短，因此曲线c对应酶浓度比曲线a对应酶浓度低，C正确；引起曲线上M、P点差异的主要原因是各组反应中加入的淀粉酶浓度不同，D错误。
10．研究人员从胡萝卜中提取过氧化物酶(POD)所做的实验结果如图所示，有关分析正确的是(　　)
A．处理时间从15 min增加到80 min,40 ℃下POD活性减小最显著
B．处理时间60 min内，在所有的温度下POD活性都显著下降
C．该实验的因变量是POD活性，自变量有温度、时间和底物浓度
D．H2O2浓度过高会抑制POD的活性，与温度对POD活性的影响完全相同
解析：选C　分析图甲曲线图，处理时间从15 min增加到80 min,45 ℃下POD活性减小最显著，A错误；处理时间60 min内，在25 ℃下POD活性下降不明显，B错误；分析图甲和图乙曲线，该实验的因变量是POD活性，自变量有温度、时间和底物浓度，C正确；高温会改变酶的空间结构使酶永久失活不能恢复，反应物浓度不会改变酶的空间结构，D错误。
二、非选择题
11．利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。请完善实验方案，并回答相关问题：
实验目的：比较三种微生物所产生的纤维素酶的活性。
实验原理：纤维素酶催化纤维素分解为葡萄糖，用葡萄糖的产生速率表示酶活性大小；用呈色反应表示葡萄糖的生成量。
实验材料：三种微生物(A～C)培养物的纤维素酶提取液，提取液中酶蛋白浓度相同。
实验步骤：
①取四支试管，分别编号。
②在下表各列的一个适当位置，填写相应试剂的体积量，并按表内要求完成相关操作。
试剂/mL 1 2 3 4
蒸馏水 1.4 1.4 1.4
pH7.5的缓冲液 0.2 0.2 0.2
纤维素悬浮液 0.3 0.3 0.3
微生物A提取液 0.1
微生物B提取液
微生物C提取液 0.1
总体积 2.0 2.0 2.0 2.0
③将上述四支试管放入37 ℃的水浴，保温1小时。
④在上述四支试管中分别加入________试剂，摇匀后，进行______________处理。
⑤观察比较实验组的三支试管与对照组试管的颜色及其深浅。
实验结果：
提取物来源 微生物A提取物 微生物B提取物 微生物C提取物
颜色深浅程度 ＋ ＋＋＋ ＋＋
分析讨论：
(1)该实验中的对照组是________号试管。
(2)实验组试管均呈现的颜色是____________，但深浅不同。
(3)上述结果表明：不同来源的纤维素酶，虽然酶蛋白浓度相同，但活性不同。若不考虑酶的最适pH和最适温度的差异，其可能原因是_______________________________
______________________________。
(4)你认为上述三种微生物中，最具有应用开发价值的是
________________________________________________________________________。
(5)从解决能源问题的角度，开发这种纤维素酶的意义在于________________________________________________________________________。
解析：从表中可以看出，实验者是用4号试管作为对照。在实验步骤中，要达到每支试管中溶液总体积均为2.0 mL，比较各组中的变量关系，就会发现1、2、3号试管的区别是酶的种类不同，4号试管不加酶，而加入等量的蒸馏水，其他因素均相同。故在1号试管中应补充等量的缓冲液，2号试管中应补充等量的微生物B提取物，3号试管中补充与其他试管等量的纤维素悬浮液，4号试管中应补充的蒸馏水量＝1.4＋0.1＝1.5 mL。欲检测四支试管的实验产物的量，可用班氏试剂或斐林试剂进行热水浴处理，出现的现象是红黄色或砖红色，含糖量越多，颜色越深。若不考虑酶的最适pH和最适温度的差异，在酶浓度也相同时，酶活性的差异是酶本身的差异，即组成酶的氨基酸种类、数目或序列不同或其空间结构不同。三种微生物中，产物含糖量最大的说明其酶的活性最强，即微生物B最有开发的价值。开发此酶可以解决农产品秸秆转化问题，为利用农产品的废弃物来生产饲料或酒精等开辟新机遇。
答案：②
试剂/mL 1 2 3 4
蒸馏水 1.5
pH7.5的缓冲液 0.2
纤维素悬浮液 0.3
微生物B提取液 0.1
④斐林　加热　(1)4　(2)红黄色或砖红色　(3)不同酶的氨基酸种类、数目或序列不同(不同酶的空间结构不同)
(4)微生物B　(5)纤维素被分解产生的葡萄糖可用作制取酒精的原料；用纤维素代替化石燃料
12．解读下面与酶有关的曲线，回答下列问题：
(1)酶的作用机理可以用甲图中______段来表示。如果将酶催化改为无机催化剂催化该反应，则B在纵轴上将________(填“上移”或“下移”)。
(2)乙图中160 min时，生成物的量不再增加的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)联系所学内容，分析丙图曲线：
①对于曲线ABC，若x轴表示pH，则曲线上B点的生物学意义是________________________________________________________________________。
②对于曲线ABD，若x轴表示反应物浓度，则y轴可表示________。制约曲线BD增加的原因是_________________________________________________________________。
(4)若该酶是胃蛋白酶，其作用的底物是________。若胃蛋白酶浓度和其他条件不变，反应液pH由10逐渐降低到2，则酶催化反应的速率将________，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)在无酶催化时，必须提供A值的活化能，反应才能顺利进行；有酶催化时，必须提供B值的活化能，因此降低的活化能用AB段表示。无机催化剂也能降低化学反应的活化能，只是没有酶显著，因此B点上移。(2)乙图反映生成物的量随反应时间变化的曲线，当曲线达到最大值时，意味着反应物被消耗尽了。(3)丙图中，若x轴表示pH，则曲线ABC表示不同pH对酶活性的影响，曲线最高点表示在最适pH下酶的催化效率最高；若x轴表示反应物浓度，则曲线ABD表示底物浓度对酶促反应速率的影响，当底物浓度增大到一定值后，酶促反应速率不再增加，此时受到酶浓度的制约。(4)胃蛋白酶的最适pH在2左右，在pH为10时，胃蛋白酶的活性丧失，即使pH再降低到2，酶的活性也不会恢复。
答案：(1)AB　上移　(2)底物已被完全消耗掉　(3)①在最适pH下，酶的催化效率最高　②酶促反应速率　受酶浓度的限制　(4)蛋白质　不变　胃蛋白酶的最适pH在2左右，pH为10时胃蛋白酶已经失活，再改变pH，酶的活性不变
13．某课外活动小组用淀粉酶探究pH对酶活性的影响，得到如图所示的实验结果。请回答相关问题：
(1)酶活性是指__________________，该实验的自变量是________，以________________作为检测因变量的指标。
(2)如图所示的实验结果与预期不符，于是活动小组又进行________(填“对照”“对比”或“重复”)实验，得到与图中无显著差异的结果。查阅资料后发现，盐酸能催化淀粉水解。因此推测，该实验中淀粉可能是在________和______的作用下分解的。pH为3条件下的酶活性________(填“小于”“等于”或“大于”)pH为9条件下的酶活性，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)在常温、常压下，与盐酸相比，淀粉酶降低反应活化能的作用更显著，判断依据是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)酶活性是指酶对某化学反应的催化效率。该实验是用淀粉酶探究pH对酶活性的影响，因此自变量为pH，可以通过检测1 h后淀粉剩余量来判断不同pH下酶的活性。(2)题图所示的实验结果与预期不符，可以重复以上实验。重复实验后得到的实验结果与题图无显著差异，说明操作没有错误，淀粉可能是在淀粉酶和盐酸的作用下分解的。由图分析可知，pH为3和pH为9的条件下淀粉剩余量相等，说明pH为3条件下的酶活性小于pH为9条件下的酶活性，原因是pH为3条件下，盐酸可以催化淀粉水解，干扰了实验结果。(3)1 h后，pH为7的条件下，仅淀粉酶作用，淀粉剩余量小于pH为1条件下(淀粉酶失活，仅盐酸作用)的淀粉剩余量，说明常温、常压下，与盐酸相比，淀粉酶降低反应活化能的作用更显著。
答案：(1)酶对化学反应的催化效率　pH　1 h后淀粉剩余量　(2)重复　淀粉酶　盐酸　小于　pH为3条件下，盐酸可以催化淀粉水解　(3)1 h后，pH为7的条件下淀粉剩余量小于pH为1条件下淀粉剩余量
14．现有两种淀粉酶A与B，某生物兴趣小组为探究不同温度条件下这两种淀粉酶的活性，设计实验如下：
实验原理：温度等条件可以影响酶的活性；淀粉在淀粉酶的催化作用下产生麦芽糖；用分光光度计测量溶液的吸光度时，物质含量越多，其吸光度越大，因此可测出物质的相对含量。
实验材料：一定浓度的淀粉溶液、相同浓度的淀粉酶A和淀粉酶B溶液、水浴缸、温度计等。
实验过程：如表所示。
步骤 1 2 3 4 5 6 7 8
Ⅰ.设置水浴缸温度(℃) 20 30 40 50 20 30 40 50
Ⅱ.取8支试管各加入淀粉溶液(mL)，分别保温5 min 10 10 10 10 10 10 10 10
Ⅲ.另取8支试管各加入等量淀粉酶溶液，分别保温5 min 酶A 酶A 酶A 酶A 酶B 酶B 酶B 酶B
Ⅳ.将同组两支试管中的淀粉溶液与淀粉酶溶液混合摇匀，保温5 min
实验结果，用分光光度计对各组淀粉含量进行检测，结果如图所示。
(1)该实验的自变量是_________________________________________________，
无关变量有________________________________________________(至少写出2种)。
(2)根据实验结果分析，下列叙述正确的是________。
A．酶A在20 ℃条件时活性较高
B．酶A的活性小于酶B的活性
C．酶B在40 ℃条件时活性较高
D．大于50 ℃条件时，酶A部分失活
(3)此实验用分光光度计检测底物淀粉的剩余量来表示酶的活性，能不能用斐林试剂检测生成物麦芽糖的含量来表示？________，原因是____________________________________
________________________________________________________________________。
(4)若要进一步探究酶B的最适温度，实验设计的主要思路应是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)根据表格可以看出本实验有两个自变量，即酶的种类和温度，溶液的量、反应时间、pH等为无关变量。(2)酶A在20 ℃条件时淀粉含量较多，酶活性相对其他温度时较低，A错误。由图可知，在20～50 ℃范围内，酶A活性在增强，酶B活性先增强后减弱，B错误。在40 ℃条件时酶B催化后淀粉相对含量最低，说明酶B此时活性较高，C正确。在20～50 ℃范围内，酶A活性在增强，不能判断50 ℃以后的趋势，D错误。(3)用斐林试剂检测生成物时，需水浴加热，会对酶的活性产生影响，使实验结果不可靠。(4)若要进一步探究酶B的最适温度，应在30～50 ℃范围内设立梯度较小的分组实验，进行上述实验步骤，然后分析结果得出结论。
答案：(1)温度、酶的种类　溶液的量、反应时间、pH等　(2)C　(3)不能　斐林试剂检测时需水浴加热，会导致反应体系温度发生改变，影响实验结果　(4)在30～50 ℃之间设立较小的温度梯度的分组实验，按上述步骤进行实验，分析结果得出结论

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