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第2章第2节 动物细胞工程
动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.阐明动物细胞融合技术的含义。
2.说出单克隆抗体的制备过程和应用。
单克隆抗体
1.什么是抗体？怎么产生的？主要分布在哪？
概念：
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
产生：
B细胞受抗原刺激后，增殖分化为浆细胞，浆细胞合成并分泌抗体。
分布：
抗体主要分布于血清中,也分布于组织液及外分泌液中
单克隆抗体
2.什么是单克隆抗体？它有什么特点？
单一细胞（B淋巴细胞）产生的
只能识别一种抗原（高度均一）表位的特异性抗体
特点：准确识别抗原
3.传统抗体如何制备？有什么缺陷？
抗原 动物体内
刺激
浆细胞
抗体
抗原不纯
抗体不纯
筛选单一B细胞
不能无限增殖产生大量抗体
缺陷：产量低、纯度低，
且抗体的特异性差、灵敏度低。
3.传统抗体如何制备？有什么缺陷？
单克隆抗体
4.什么细胞具有无限增殖的能力？
肿瘤细胞具有无限增殖的能力，但不能分泌抗体
5.能否培养出一种能分泌抗体且增殖能力强的细胞？
单克隆抗体的制备依赖什么技术？
B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合
依赖的技术：动物细胞融合
动物细胞融合
杂交细胞
动物细胞培养
单克隆抗体
杂交瘤细胞
既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体
骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
1975年，米尔斯坦和柯勒实验
1984年，获诺贝尔生理学或医学奖
单克隆抗体制备原理：
细胞太空婚礼将如期举行
2002年11月29日08:05　 华商报
　　本报综合消息脱离地心引力的浩瀚太空让人寸步难行，但却是孕育生物新品的天然“温床”。下月底，一场筹备了10年的细胞“太空婚礼”，将随“神舟四号”宇宙飞船的发射升空而如期举行，担纲婚礼“司仪”的将是一台设在中科院上海技术物理研究所的远程遥控器。
　　
动物细胞融合
据植生所微重力研究组组长刘承宪研究员解释，
“细胞婚礼”是让两个不同品种的细胞，在电场作用下越靠越近，直至相互穿越，并最终融为一体。当充满液体的融合室中加上直流电场，两个原本相互游离的细胞一下子贴到一起。紧接着，在瞬间高压脉冲的作用下，细胞膜被击出小孔，透过这微小空间，两股细胞质会展开“心灵沟通”。渐渐的，细胞核也开始接触交流起来，20分钟后，两细胞核你中有我、我中有你，一个新生命就此诞生。与普通的转基因植物不同，新生命体内融合了来自“父母”双方的所有基因，研究人员在下一步的选种、育种时就有了更多选择。
动物细胞融合
新闻阅读
动物细胞融合技术
1.概念：
指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术
4.结果：
形成杂交细胞。即融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息
2.原理：
细胞膜的流动性
3.诱导方式
物理法：离心、振动、电激
化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
动物细胞融合
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
↓
细胞膜被病毒颗粒穿通
↓
细胞膜连接
↓
细胞核融合，形成杂交细胞
5.过程：
动物细胞融合技术
6.意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。
7.应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。
动物细胞融合
为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？
不灭活的病毒会感染细胞。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？
5.单克隆抗体制备过程是怎样的？
思考：
1.注射抗原的目的是什么？
2.为什么选择骨髓瘤细胞？
骨髓瘤细胞是B淋巴细胞突变形成的肿瘤细胞，在可以无限地增殖同时，失去了分泌抗体的能力，但它仍保留了许多B淋巴细胞的特性。
诱导产生能产生抗体的浆（B）细胞
3.细胞两两融合后，有几种融合情况？
4.第一次筛选的目的是什么？怎么筛选杂交瘤细胞？
3种，骨-骨，B-B，骨-B
第1次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选出多种杂交瘤细胞。只有骨-B杂交瘤细胞才能存活，但骨-B杂交瘤细胞也是一个系列，而骨-骨和B-B杂交瘤细胞不能存活。
注：B细胞是一个系列（B1、B2、B3.....Bn）
第1次筛选的目的：
方法：
筛选出杂交瘤细胞
用特定的选择培养基培养筛选
5.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？（第2次筛选的目的及方法）
第2次筛选的目的：
专一抗体检测
从杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
方法：
6.筛选出的杂交瘤细胞培养的方法？
选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体内培养或体外培养。
7.单克隆抗体的特点：
化学性质单一、特异强、灵敏度高、可大量制备
1.用作体外诊断试剂:
在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点；同位素标记的单抗，可定位肿瘤、心血管畸形等疾病。
三、单克隆抗体的应用
血型检测试剂
2.运载药物:
作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤
生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体——导向——瞄准装置；药物等——杀伤——弹头）
3.用于治疗疾病:
主要用于癌症治疗。

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