资源简介

(共20张PPT)
反复
注射
从血清中分离得到
制备抗体的传统方法：
病原体 动物 抗体
(多克隆)
A
C
用乙肝病毒反复注射制备的抗体：
B
乙肝病毒模式图
被猫、狗小动物抓伤要上要及时注射狂犬疫苗和抗狂犬病血清。现有的这些抗血清都是用病毒免疫动物得到。
这种传统方法制备的抗体产量低、纯度低、特异性差
如何得到单一的某种抗体。如效应B3细胞分泌的抗体C？
乙肝病毒模式图
大量培养B3细胞，获得抗体C
（单克隆抗体）
单个B淋巴细胞
细胞群
克隆
化学性质单一、
特异性强的抗体
产生
一个(效应)B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
但是在体外：
科勒 米尔斯坦
1975年，两位科学家创造性地解决了这个问题
1984年两人因此获得诺贝尔生理学﹠医学奖
一个(免疫过的)B细胞
一个骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
(既能大量增殖、又能
产生大量单克隆抗体)
快速阅读课本P52,标注以下几个问题的答案：
1、诱导动物细胞融合的原理和方法？其与诱导植物原生质体有何不同？
2、融合后细胞的细胞核在何时融合？
3、思考：A细胞与B细胞放在在试管中混合，加聚乙二醇诱导融合，融合后获得几种细胞？
1、诱导动物细胞融合的原理和方法？其与诱导植物原生质体有何不同？
原理：细胞膜的流动性
主要用于制备单克隆抗体
获得杂种植株
用 途
物理、化学方法（同左）
灭活的病毒
物理（离心、振荡、电刺激）；化学（聚乙二醇）
诱导的方法
使细胞分散后诱导细胞融合
去除细胞壁后诱导原生质体融合
融合的方法
细胞膜的流动性
细胞膜的流动性、
植物细胞全能性
原 理
动物细胞融合
植物体细胞杂交
比较项目
植物体细胞杂交技术和动物细胞融合的比较：
灭活病毒诱导
2、融合后细胞的细胞核在何时融合？
在进行第一次有丝分裂过程中，核膜解体之后完成融合
3、思考：A细胞与B细胞放在在试管中混合，加聚乙二醇诱导融合，融合后获得几种细胞？
未融合细胞：A、B
融合细胞: A+A、B+B、A+B
快速阅读课本P53-54,标注以下几个问题的答案：
4、单克隆抗体制备？使哪两种细胞融合？如何得到这两种细胞？
5、融合后细胞有5种，如何得到杂交细胞？这种杂交细胞有何特点？
6、选择出来的杂交细胞（杂交瘤细胞），还需什么处理？
7、如果利用杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体？
7、如果利用杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体？
4、单克隆抗体制备？使哪两种细胞融合？如何得到这两种细胞？
骨髓瘤细胞：体外培养的。
B淋巴细胞：抗原免疫过的小鼠的脾脏中获得
5、融合后细胞有5种，如何得到杂交细胞？这种杂交细胞有何特点？
资料：已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断．人B淋巴细胞中有DNA的这两种合成途径，但一般不分裂增殖（不能传代）．鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，但能不断分裂增殖。
如何利用上述特性筛选出杂交瘤细胞？
培养基中加入氨基喋呤，B淋巴细胞不分裂，在培养中死亡，骨髓瘤细胞的D途径被阻断，不能增殖，死亡。留下来的细胞即为杂交瘤细胞。
这种选择培养基，称为HAT培养基。此处为第一次筛选，得到杂交瘤细胞。
6、选择出来的杂交细胞（杂交瘤细胞），还需什么处理？
由于小鼠接触过很多物质，体内会有多种B淋巴细胞。因此要进一步筛选出只分泌特定抗体的杂交瘤细胞。
这是继HAT培养基筛选后的第二次筛选。目的是得到只分泌某种特定抗体的杂交瘤细胞。
(1)(注射到老鼠)体内培养
(2)体外培养
单克隆抗体有什么优点 (必考内容，理解记忆)
P54:特异性强、灵敏度高、可大量制备
7、如果利用杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体？
骨髓瘤细胞
B淋巴细胞
细胞融合、筛选
杂交瘤细胞
细胞培养
筛选，继续培养
足够数量的、能产生特定抗体的细胞群
体外培养
注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
注射抗原
动物细胞融合技术
动物细胞培养技术
小结1
迅速大量增殖，又能产生单一抗体
特异性强、灵敏度高、可大量制备
选择培养基，得到杂交瘤细胞
抗体检测，得到能分泌特定抗体杂交瘤细胞
单克隆抗体应用
1、作为体外诊断试剂
1、作为体外诊断试剂
2、用于治疗疾病和运载药物
抗体
病原体
结合了放射性同位素或者化学药物的单克隆抗体——“生物导弹”
请思考：
此处 抗体 和 化学药物 的作用分别是
A.杀伤病原体
B.导向作用
例题：用a表示骨髓瘤细胞，b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别为（ ）
A. a、aa、ab、bb、b →a、aa、ab →ab培养
B. a、aa、ab、bb、b →ab、bb、b →ab培养
C. a、aa、ab、bb、b →ab →产生特定抗体的ab培养
D. a、aa、ab、bb、b →aa →能无限增殖的aa培养
第一次筛选：用选择性培养基获得杂交瘤细胞。
第二次筛选：通过抗体检测获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。

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