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(共18张PPT)
动物细胞培养
动物细胞融合
生产单克隆抗体
动物细胞核移植
动物细胞工程常用技术
　　其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础.
2.2 动物细胞工程
一.动物细胞培养概念：
1.材料：
2.过程：
3.目的：
4.原理：
形成组织、细胞（不能形成个体）
细胞增殖
动物的组织
动物的组织→分散成单个细胞→放入培养基→细胞生长和增殖
二.动物细胞培养过程：
阅读课本44--46页第一自然段，约3分钟
1.应该选择动物的 组织，原因是 。
A.胚胎 B.幼龄动物 C.性成熟动物 D.老龄动物
2.为什么要将动物组织分散成单个细胞？
3.方法是 .
(1)胰蛋白酶的作用是 。
（2）能否用胃蛋白酶，如若不能，则是因为动物细胞培养的PH为 。
A.2.0 B.7.2--7.4 C.5.0--6.1 D.10.2-11.0
分解蛋白质，使组织分散成单个细胞
A、B
B
①能保证细胞所需的营养供应。
②能保证细胞内有害代谢产物的及时排出。
增殖能力强，分化程度低
（3）细胞膜的主要成份是 ，胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？在使用时应注意什么问题？
4.制成细胞悬液：将分散的细胞进行 。
5.原代培养：将 放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。
(1)用到的培养基是 （固体或液体）培养基。
培养基的成分有 。
蛋白质和磷脂
注意控制时间
稀释
细胞悬液
液体
营养物质，PH等
（2）贴壁生长：①要求培养瓶内表面 。
②细胞分裂方式是 。
光滑、无毒，易于贴附
有丝分裂
（3）接触抑制：
①概念：
②细胞分裂 。
③原因是细胞膜上有
（物质），
具有黏着性。
④正常细胞原代培养时，出现接触抑制，此时正常细胞会长成 层。
⑤如若癌细胞原代培养时， （是或否）会出现接触抑制现象，此时癌细胞会长成 层。
停止
糖蛋白
一
否
多
6.传代培养：
(1)先用胰蛋白酶等处理 的细胞，再分瓶继续培养。
（2） 代左右时，细胞增殖缓慢，甚至停止。
（3）部分细胞 发生变化，少部分细胞获得不死性，能无限增殖。这些细胞的遗传物质 ，称为细胞系。
贴满瓶壁
10--50
核型
改变
原代培养的细胞一般传至10代左右，细胞生长停滞，大部分衰老死亡，少数细胞能存活并继续传至40-50代，这种传代细胞为细胞株。
细胞株传至50代后会再次出现停滞，不能再传代，但部分细胞的遗传物质发生了改变，带有癌变特点，可在培养条件下无限制地传下去，这种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别：
细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。
用于核移植时的供体细胞一般选择10代内的细胞。因为传至10—50代时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。
原代培养的特点：
① ，
② 。
归纳
过程
取 的组织、器官
细胞悬浮液
酶
贴满瓶壁的细胞
单个细胞
加入 液
动物胚胎或幼龄动物
胰蛋白
培养
接触抑制
原代 培养(分装前)
1-10代细胞
贴壁生长
原代细胞
培养
加 液
40—50代细胞(细胞株)
未
无限传代（细胞系）
已
培养
胰蛋白
酶
练习：分层P86: 5题。
传代
短期和临时性的保存可以采用一般的低温，如哺乳动物的细胞在4℃左右可存活几十天甚至几个月。
长期的保存方法目前一般采用超低温冻存法，即将细胞和保护剂放入-196 ℃的液氮中进行保存。
三.冷冻和复苏：
2.复苏：
1.冷冻保存：
随时取出迅速放入37℃温水中解冻
保存主要措施：降低温度
目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。
1. 的环境：
（1）培养液和所有培养用具进行 处理。
（2）抗生素的作用是 。
（3）应 ，以便清除代谢废物。
2.营养：（1）无机物：无机盐、 。
（2)有机物： 。
注：培养基中添加动物血清的原因是：
四.动物细胞培养的条件
阅读课本46页，约2分钟
血清中含有多种维持细胞正常代谢和生长的物质，如蛋白质、氨基酸和未知的促生长因子。
无菌、无毒
灭菌
避免杂菌污染
定期更换培养液
微量元素
糖、氨基酸、促生长因子、动物血清
四.动物细胞培养的条件
3.温度和PH ：
温度：36.5±0.5℃ （一般）
PH:7.2-7.4
4.气体环境:
95％的O2 作用是 。
5％的CO2作用是 。
参与细胞代谢
维持培养液的PH
练习：《非常学案》P31: 1题。
1.利用动物细胞的大规模培养来生产生物制品。
2.检测 ，判断某种物质的毒性。
3.动物细胞是基因工程技术中常用的 。
4.用于 等方面的研究。
五.动物细胞培养技术的应用：
阅读课本46--47页第一自然段，约2分钟
有毒物质
受体细胞
生理、病理、药理
练习：《非常学案》P32: 3题。
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是
A．细胞系 B．细胞株
C．原代细胞 D．传代细胞
2、动物细胞工程技术的基础是 　
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　
C.胚胎移植 D.动物细胞培养
A
D
3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞
A.容易产生各种变异
B.具有更强的全能性
C.取材十分方便 　　
D.分裂增殖的能力强
D
4、为使培养的动物组织细胞分散开，以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取的动物组织进行处理时应首先选用下列物质中的（ ）
A．胃蛋白酶 B．胰蛋白酶
C．盐酸 　　D．胰脂肪酶
B
5、关于动物细胞培养的叙述错误的是（ ）
A．用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B．将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C．在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液
D．动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡
D

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