资源简介

(共27张PPT)
1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时）
教学目标
1.概述培养基的营养构成和种类
2.概述无菌技术的原理和方法，掌握无菌操作
3.通过配制培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基，初步掌握配制培养基的基本技能
4.概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法
5.概述测定微生物数量的稀释涂布平板法和显微镜计数法
(1)概念：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
(2)方法步骤
配制培养基
灭菌
倒平板
接种和分离
培养
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
3.微生物的纯培养
一 微生物的基本培育技术
不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。
（1）配制培养基
配制培养基：称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
称取去皮的马铃薯200g
切成小块
加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂
用纱布过滤
滤液中加入20g葡萄糖，15~20g琼脂
用蒸馏水定容至1000mL
得到滤液
（1）配制培养基
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
（2）灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa 、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。
将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃ 灭菌2h。
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞
包上牛皮纸，并用皮筋勒紧
压力100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15 ~ 30min
取5 ~ 8套培养皿
培养皿叠成一束
用几层牛皮纸包紧
放入干热灭菌箱内，160 ~ 170℃灭菌2h
（1）配制培养基
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下：
①拔出锥形瓶的棉塞。
②将瓶口迅速通过火焰。
③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20 mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。
④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。
仔细看图：在倒平板的过程中，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
（3）倒平板
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰旁附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
不要完全打开，以免杂菌污染培养基
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以使培养基中的水分较快地蒸发。
琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃会烫手，低于50℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
（3）倒平板
接种：指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。
接种工具：
接种针——用于穿刺接种；
接种环——用于斜面接种或平板划线接种；
玻璃涂布器——用于涂布平板接种；
（4）接种和分离
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
接种的方法：涂布平板法、穿刺接种法、斜面接种法、平板划线法
（4）接种和分离
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
稀释分散
生长繁殖
（4）接种和分离
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
连续划线法
分区划线法
①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。
②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞
③将试管口通过火焰
④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液
⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞
⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。
平板划线法的操作步骤：
一 微生物的基本培育技术
第1次划线
灼烧接种环灭菌
第2次划线
灼烧接种环灭菌
第3次划线
灼烧接种环灭菌
灼烧接种环灭菌
1
2
3
4
5
【平板划线法注意事项】
①接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；
②划线首尾不能相接；
③每次划线前灼烧接种环进行灭菌；
④划线操作结束后，仍需灼烧接种环，培养皿倒置培养。
分区划线法
（4）接种和分离
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
培养：完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入 28℃ 左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养 24 ~ 48h。
（4）培养
4.酵母菌的纯培养
一 微生物的基本培育技术
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
灼烧时期 目的
取菌种前
每次划线前
接种结束后
杀死接种环上原有微生物。
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？
使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，以便获得单个菌落。
一 微生物的基本培育技术
分析评价：
1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
1.在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。
2.提示 如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
3.是否进行了及时细致的观察与记录？
培养12 h与24 h后的酵母菌菌落的大小会有明显不同。（培养时间越长，菌落越大、颜色越深）
一 微生物的基本培育技术
酵母菌的纯培养
2.接种和分离酵母菌
1.制备培养基
3.培养酵母菌
①配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水）
②灭菌
③倒平板（在酒精灯火焰附近操作）
培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅）
培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅）
用接种环在固体培养基上用平板划线法接种
平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱培养
小结
小结
即时练习
一、概念检测
1. 微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。
(1) 培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。( )
(2) 消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。( )
(3) 微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。 ( )
×
×
√
即时练习
2. 日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
即时练习
二、拓展应用
1. 某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入 37℃恒温培养箱中培养24 h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析冋答下列问题。
(1) 这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有______________。
培养皿和培养基。
(2) “将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？
接种。
即时练习
二、拓展应用
1. 某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入 37℃恒温培养箱中培养24 h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析冋答下列问题。
(3) 从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
即时练习
二、拓展应用
2. 某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210 r/min、 230 r/min和 250r/min，培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
(1) 摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？
意味着培养液中O2含量不同。
(2) 从图中数据你可以得出什么结论？其原因是什么？
培养液中O2含量越高,酵母菌种群密度越大。
即时练习
二、拓展应用
2. 某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210 r/min、 230 r/min和 250r/min，培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
(3) 为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定？
这时候已经达到了环境容纳量。
（1）倒平板后，待平板冷凝之后需将其倒置 （　 　）
（2）倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到
皿盖上 （　 　）
（3）若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用 （ 　　）
（4）为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 （ 　 ）
（5）平板划线法中每一次划线后要将接种环灼烧 （　 　）
（6）培养微生物的温度因菌种不同而稍有差异 （　 　）
即时练习
学而时习之

展开更多......

收起↑