资源简介

(共30张PPT)
1.2 微生物的培养技术及应用（第1课时）
教学目标
1.概述培养基的营养构成和种类
2.概述无菌技术的原理和方法，掌握无菌操作
3.通过配制培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基，初步掌握配制培养基的基本技能
4.概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法
5.概述测定微生物数量的稀释涂布平板法和显微镜计数法
新课导入
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。
由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致胃肠不适的事例屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。
那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
首先酸奶制作所用的容器要进行消毒晾干后使用，避免酸奶制作过程中混入杂菌；其次，准备好菌种，最好是纯的乳酸菌菌种；再有就是接种时要在无菌条件下操作，所用搅拌器要经过消毒灭菌等。
需要应用无菌技术 和 微生物的培养技术。
酸奶
防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在实验室培养微生物，一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件;另一方面要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。
2.培养基的配制
3.无菌技术
4.微生物的纯培养
1.微生物
微生物的基本
培育技术
一 微生物的基本培育技术
你知道微生物是什么吗？
微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉及食品、医药、工农业、环保、体育等诸多领域。在我国教科书中，将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、螺旋体。
一 微生物的基本培育技术
1.微生物：难以用肉眼观察的微小生物的统称。
无细胞结构
原核细胞
真核细胞
微生物的类群
病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
细菌：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；
放线菌：链霉菌等
真菌：酵母菌、毛霉等；
原生生物：草履虫、变形虫等
相关信息
一 微生物的基本培育技术
【自主探究】请结合教材P9-10面，思考这些问题的答案。
1.培养基的用途有哪些？
2.培养基的必备营养成分有哪些？
3.配制培养基时，如何满足不同微生物的特殊需求？举例说明。
4.培养基的种类有哪些？
2.培养基的配制
一 微生物的基本培育技术
菌落：分散的微生物在适宜的周体培养辈表或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
毛霉
2.培养基的配制
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
一 微生物的基本培育技术
【任务一】
结合提供的资料和教材中“表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析培养微生物的培养基的种类和营养构成。
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000mL 水
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
（1）培养基:
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基，用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
培养皿
培养基
（2）培养基的分类
液体培养基
固体培养基
：不含凝固剂、呈液体状态的培养基。
：含有凝固剂、呈液体状态的培养基。
加入凝固剂（琼脂）
①物理性质
液体培养基
固体培养基
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
选择培养基
鉴别培养基
：根据某种微生物的特殊营养要求配置。
：加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂。
②功能
选择
分离
鉴定
（2）培养基的分类
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
天然培养基
合成培养基
：含化学成分不明确的天然物质
：用已知的化学物质配制
③成分来源
工业生产
分类鉴定
（2）培养基的分类
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
(3)基本成分：
碳源、氮源、水、无机盐
①碳源
无机碳源：
有机碳源：
CO2、CO32-、HCO3-
牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、石油等
自养
异养
②氮源
无机氮源：
有机氮源：
NH4＋、NO3-、硝酸盐、铵盐
牛肉膏、蛋白胨、尿素等
③水
④无机盐
⑤其他要求：
PH、O2、特殊物质
（生长因子、氨基酸、维生素、碱基等）
一 微生物的基本培育技术
2.培养基的配制
几种微生物的营养和能量来源分析
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌 CO2 NH4＋、NO3-等 光能
硝化细菌 CO2 NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖类等有机物 N2 有机物
大肠杆菌 糖类、蛋白质 等有机物 蛋白质等 有机物
用无碳培养基可以筛选培养什么微生物？
用无氮培养基可以筛选培养什么微生物？
自养微生物
固氮微生物
一 微生物的基本培育技术
3.无菌技术
【任务二】
结合教材中有关无菌技术的内容，说出消毒和灭菌的原理、主要方法和所需要的设备，比较两者对微生物作用效果的差异。
比较项目 理化性质的作用强度 能否杀死所有微生物 能否杀死芽孢和孢子
消毒
灭菌
较为温和
比较强烈
能
能
否
否
一 微生物的基本培育技术
(1)消毒
用温和的理化因素仅杀死物体内外“部分”微生物（不包括芽孢和孢子）。方法有：
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。
②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min 或 80-90℃下煮30s-1min。
③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。
④紫外线消毒法：
用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台
3.无菌技术
一 微生物的基本培育技术
(2)灭菌
用强烈的理化因素杀死物体内外“所有”微生物（包括芽孢和孢子）。
【芽孢】有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。
芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。
【孢子】细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。
3.无菌技术
一 微生物的基本培育技术
①湿热灭菌:
实验室常用高压蒸汽灭菌锅，在压力100kPa、温度121 ℃条件下，维持15-30min
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌
原理：
对象：
优点：
高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性
操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。
培养基等
使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
【强调】
3.无菌技术
一 微生物的基本培育技术
(2)灭菌
干热灭菌箱内，在160-170 ℃的热空气中维持下2-3h达到灭菌目的
②干热灭菌:
原理：
使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等
对象：
耐高温，需保持干燥的物品
玻璃器皿 （如试管、培养皿、吸管、注射器）
金属器具 （如针头、 镊子、剪刀等）
3.无菌技术
一 微生物的基本培育技术
(2)灭菌
③灼烧灭菌:
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
效果：
原理：
对象：
最彻底
使微生物燃烧
接种工具如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具，接种过程中的试管口或瓶口等容易被污染的部位
3.无菌技术
一 微生物的基本培育技术
(2)灭菌
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
日常生活用品
100 ℃煮沸5～6 min
巴氏消毒法
不耐高温的液体
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
化学药剂
生物活体、水源等
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线
紫外线照射30 min
灼烧灭菌
接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h
湿热灭菌
培养基、培养皿等,生产和实验室常用
高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min
接种室、接种箱，超净工作台
小结：消毒与灭菌
培养基的类型
培养基的营养物质
消毒
灭菌
微生物的实验室培养
培养基
无菌技术
按物理性质划分
按组成成分划分
按功能划分
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素(如乳酸杆菌)、碱基等
煮沸消毒
巴氏消毒
紫外线消毒
化学药剂消毒
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
小结
1.一下物品所采用的灭菌或消毒方法依次是
培养基
培养皿
接种环
实验操作者的双手
实验室
牛奶
湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
干热灭菌
灼烧灭菌
化学药剂消毒（酒精）
紫外线消毒
巴氏消毒法
即时训练
2.无菌技术的具体内容
（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和 。
（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。
（3）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 接触。
（4）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 并在 附近进行。
消毒
灭菌
周围的物品
酒精灯火焰
超净工作台上
即时训练
即时训练
3．下列对灭菌和消毒的理解不正确的是（ ）
A．灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子
B．消毒是指杀死物体表面或内部的部分微生物
C．消毒和灭菌都是采用物理方法杀灭微生物
D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等
C
即时训练
4．如图显示的是微生物实验过程中的一个操作，则在此操作中（ ）
A．酒精灯用于熔化培养基
B．培养基倒入培养皿后需再灭菌
C．培养皿和培养基均已灭菌
D．培养皿和三角烧瓶无需与酒精灯火焰有接触
C
学而时习之

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