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第3课时 探究培养液中某种酵母菌种群数量的动态变化
第一节 种群的特征
第一章《种群》
完成实验
酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？
提出问题
作出假设
设计实验
分析结果，得出结论
变量如何控制？
第三课时 探究培养液中酵母菌种群
数量的动态变化
该探究活动中涉及4个科学方法：
（1）数学模型法；
（2）抽样检测法；
（3）显微观察法；
（4）微生物培养法。
关注本实验中的几个关键点：
酵母菌的计数
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数法，也叫做显微镜直接计数法。
优点：直观、快速。
适用于稀释的菌悬液（或孢子悬液），即液体培养基中菌体的计数。
此法计得的是活菌体和死菌体的总和，又称为总菌计数法。
酵母菌的计数
（1）计数工具——血球计数板
实物图
正面图
侧面图
计数室
滴液处
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。
计数时，常采用样方法。
酵母菌的计数
（1）计数工具——血球计数板
放大后的计数池
每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池
每个计数池分为9个大方格
25个中格
16个小格
16个中格
25个小格
25X16 = 400小格
16X25 = 400小格
每个计数室（大方格）共有400小格，总容积为0.1mm3
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抽样检测：
5×16=80个小格
抽样检测：
4×25=100个小格
酵母菌的计数
（2）计算：
每毫升培养液中的酵母菌细胞数是多少？
酵母细胞个数/mL=
所数小方格中细胞总数x400x104x稀释倍数
所数的小方格数
例3 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1 mm3。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 个／mL。
5n×105
例2:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，先 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 个。
例1 :在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此估算10mL培养液中有酵母菌 个。
2x107
2×108
稀释
酵母菌的计数
（3）计数的操作
稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓，可不必稀释。
镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
加样品：在清洁干燥的血球计数板先盖上盖玻片，再用无菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。注意不可有气泡产生。
酵母菌的计数
（3）计数的操作
显微计数：静止5分钟后，先用低倍镜（16×10）找到计数室所在的位置。然后根据血球计数板规格，每个计数室选取5个（或4个）中方格中的菌体进行计数。每个小方格内约有5-10个菌体为宜。对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻两边及顶角计数。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中
计得的值来计算样品的含菌量。
酵母菌的计数
（4）血球计数板的清洗：
使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
（5）注意事项：
a.进行计数前，应先将试管摇匀，目的是使酵母菌在培养液中混合均匀，以减少计数误差。
b.显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应取相邻两边及顶角计数。
c.若一个小方格内酵母菌数量过多，难以数清时，则可将培养液稀释一定倍数后再计数。
d.本实验无对照实验，酵母菌每天的数量变化可形成前后对照。
e.血球计数板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和冲洗的方法清洗。
f.需要做几次重复计数，并记录小方格内酵母菌的数量，便于取平均值，提高实验的准确性。
酵母菌的计数
（6）讨论：计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养：
培养液配制
灭菌
接种
培养
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡萄糖20g，1000 mL水），分装到5个烧杯中（200mL/烧杯）
用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。
接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每个烧杯中加入。（注意：滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）
将烧杯置于28℃的恒温箱中培养
无菌
操作
结果分析
（1）数据记录
以汤麦式血球计数板的数据记录为例。下表为某一次的数据记录表，其中，A表示五个中方格的总菌数；B表示菌液稀释倍数：
各中格的总菌数 A B 二室平均数 菌数/ml
1 2 3 4 5 第一室
第二室 结果分析
（1）数据记录
下表为一周的数据记录表：
时间 次数 1 2 3 4 5 6 7
1
2
3
平均
第 1 天
第 3 天
第 6 天
第 7 天
死亡
结果分析
（2）构建数学模型：
实验再探究
温度、营养物质影响酵母菌的生长吗？某同学按下表完成了有关实验。
试管 编号 培养液/mL 无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度（℃）
A 10 — 0.1 28
B 10 — 0.1 5
C — 10 0.1 28
温度、营养物质对酵母菌生长的影响
试管 编号 培养液/mL 无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度（℃）
A 10 — 0.1 28
B 10 — 0.1 5
C — 10 0.1 28
实验再探究
培养空间、氧气会影响酵母菌的生长吗？
例：为研究酵母菌种群密度的动态变化，某同学按下表所列条件进行了A、B、C和D 共4组实验，用1000mL锥形瓶作为培养器皿，棉塞封口，在25℃下静置培养，其他实验条件均相同，定时用血球计数板计数。根据实验结果绘出的酵母菌种群密度变化曲线图如下。

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