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(共19张PPT)
第2课时
微生物的选择培养和计数
①原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
1.培养基的制备
②配方：
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
探究 实践
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000ml
制备选择培养基（尿素为唯一氮源）
制备牛肉膏蛋白胨培养基
用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，
用以尿素为唯一氮源的培养基做实验组，
用来判断选择培养基是否具有选择作用。
①提供无机盐；
②调节pH。
阅读教材第19页“实验设计”和“操作提示”相关知识，找出实验操作的主要步骤和操作要点
土壤取样
①要求：富含有机质、酸碱度接近______且潮湿的土壤
②取样土层：铲去_________，在距地表3~8cm的土壤层
制备培养基
①实验组：以尿素为唯一氮源的选择培养基
②对照组：
样品的稀释
牛肉膏蛋白胨培养基(普通培养基）
目的：作为对照组用以判断选择培养基是否具有选择作用
涂布平板
2.实验设计流程
中性
表层土
①稀释原因：样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数
②稀释标准：测定土壤中的细菌的数量，一般选用_____________________________倍
稀释液进行平板培养
1×104、1×105和1×106
③初次实验，可以将稀释的范围放宽一点，例如可以将___________________倍稀释液
分别涂布培养，以保证___________________________________________。
1×103~1×107
能从中选择出菌落数为30~300的平板进行计数
测细菌数：一般用104、105、106稀释液
测放线菌：一般用103、104、105稀释液
测真菌数：一般用102、103、104稀释液
涂布平板
每个稀释浓度至少设置4个平板。
1、2、3平板是 ______培养基（_____组，三个重复），4为________________培养基，目的：用以 _____________________________。
思考1：另外，整个实验还要设置2个平板（对照组），是哪两个目的？
（1）另设置2个平板：
①未涂布（未接种)的选择培养基
②未涂布的牛肉膏蛋白胨培养基；
（2）目的：以验证培养基中是否含有杂菌；
与接种的选择培养基形成对照
与接种的牛肉膏蛋白胨培养基形成对照
判断选择培养基是否具有选择作用
选择
实验
牛肉膏蛋白胨
菌落计数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。
稀释度 104 105 106
1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值
每个平板的菌落数
培养与观察
将平板____于________℃的恒温培养箱中培养1~2天。每隔24小时统计一次菌落数目,选取________________时的记录做结果
倒置
30~37
菌落数目稳定
为什么？
防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
(1)无菌操作:
(2)做好标记:
(3)规划时间:
本实验耗时较长，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。
①取土样的用具在使用前都需要 。
②实验操作均应在 _______ 进行。
3.操作提示
灭菌
酒精灯火焰旁
本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的 ______ 等。
稀释度
如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。
4.结果分析与评价
如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。
1. 结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
如果得到了两个或多个菌落数为30-300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。
2. 你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？
3. 你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1.甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。该同学的统计结果
(填“可靠”或“不可靠”)。若不可靠，应如何改进？
2.乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理 (填“合理”或“不合理”)。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应 ，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。
为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。
不可靠
不合理
分析实验过程中可能的影响因素
随堂练习
比如，从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因
3.某同学在三种稀释度下取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下的数据，试计算1 g样品的活菌数。
平板 稀释度　　　 平板1 平板2 平板3
104 320 360 356
105 212 234 287
106 21 23 18
符合要求的稀释度是105（0.1 mL菌液涂布的三个平板上的菌落数在30～300范围内），计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108(个)。
是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红—美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。
到社会中去
测定饮水中大肠杆菌数量的方法
伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌
选择培养基与鉴别培养基的比较
项目 选择培养基 鉴别培养基
原理
用途
举例
图示
加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质
加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应
培养、分离出目标微生物
鉴别目标微生物
培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌
可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑色)
练习与应用
1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌。判断下列相关表述是否正确。
（1）这种培养基是一种选择培养基。( )
（2）利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤。( )
（3）相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。( )
2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是( )
A.菌落中的细菌数目是固定的
B.平板上的一个菌落就是一个细菌
C.通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同
D.平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
一、概念检测
√
√
√
D
练习与应用
二、拓展应用
1.反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。
反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此从中分离能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40% ~ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。
（1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。
可以参考本节“探究·实践”中的设计思路进行设计。
练习与应用
（2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？
纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。
复合
纤维二糖
刚果红
透明圈
刚果红
纤维素
梯度
透明圈
拓展2：分解纤维素的微生物的分离
2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40% ~ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。
练习与应用
（3）有同学说可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。
人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。
课堂小结
微生物的数量测定
选择培养基的作用
微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法
微
生
物
的
选
择
培
养
和
计
数
选择培养基
微生物的选择培养
科学实例
筛选原则
选择培养基的概念及举例
稀释涂布平板法的操作过程
间接计数法 — 稀释涂布平板法
直接计数 —计数板计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
培养基的制备
（1）土壤取样
（2）样品的稀释
（3）稀释涂布平板法接种
（4）微生物的培养与观察
实验设计
感 谢 观 看

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