资源简介

(共17张PPT)
重组DNA技术的基本工具
Basic tools for the recombinant DNA technology
基因工程
目录
01
DNA的粗提取与鉴定
02
习题巩固
DNA的粗提取与鉴定
Rough extraction and identification of DNA
01
一、实验原理
1.提取DNA的原理
利用DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，对它们进行提取。
(1)DNA 酒精，某些蛋白质 酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。
(2)DNA在不同浓度的 中的溶解度不同，它能溶于 的NaCl溶液。
不溶于
溶于
NaCl溶液
2mol/L
2.鉴定DNA的原理
在一定温度下（沸水浴），DNA遇 试剂会呈现 。
二苯胺
蓝色
DNA的粗提取与鉴定
当NaCl浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
二、目的要求：
1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取和鉴定的原理。
2.学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA 进行鉴定。
三、材料用具：
1.材料：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。（注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。）
洋葱
花菜
香蕉
猪肝
鸡血
菠菜
DNA的粗提取与鉴定
2.试剂及作用：
(1)研磨液
(2)体积分数为95%的酒精
(3)2mol/L 的NaCl溶液
(4)二苯胺试剂
(5)蒸馏水
——溶解并提取DNA
——析出DNA
——溶解DNA
——鉴定DNA，要现配现用
——滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L，从而析出DNA
研磨液成分 作用
SDS 使蛋白质变性
EDTA 抑制DNA酶
Tris-HCl缓冲液 稳定DNA
DNA的粗提取与鉴定
（1）通过研磨释放 DNA
称取约30g 洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL 研磨液，充分研磨（可加入少量石英砂助研）。
①研磨的目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
②研磨时间不宜太长：防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量
③有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶：
研磨效果好（有利于充分研磨）
④研磨不宜太用力
四、方法步骤
（2）过滤获取含DNA的上清液
在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500 r / min 的转速下离心5 min ，再取上清液放入烧杯中。
为减少 DNA 的损失，过滤过程一般使用纱布
可能含有核蛋白、多糖等杂质
低温放置几分钟的作用：
①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。
四、方法步骤
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静置2~3 min ，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的 DNA 。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在10000 r / min 的转速下离心5 min ，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA ）晾干。
（3）冷却酒精析出DNA
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子。
四、方法步骤
（4）DNA的鉴定
取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
加入2mol/L氯化钠溶液
不加入丝状物
加入4mL二苯胺试剂
加入2mol/L氯化钠溶液
加入丝状物
加入4mL二苯胺试剂
实验组
对照组
水浴加热
溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关
四、方法步骤
1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？
观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。
2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？
可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。
结果分析与评价
习题巩固
Exercises to consolidate
02
1．下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的原理的叙述，错误的是（ ）A．利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白质能溶于酒精溶液，可将DNA与蛋白质分离B．利用高温能使蛋白质变性，却对DNA没有影响的特性，可将DNA与蛋白质分离C．在用预冷的酒精沉淀DNA时，要用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA断裂D．利用DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，可将提取的丝状物或沉淀物溶解于NaCl溶液中
B
2．下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的原理的叙述，错误的是（ ）A．利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白质能溶于酒精溶液，可将DNA与蛋白质分离B．利用高温能使蛋白质变性，却对DNA没有影响的特性，可将DNA与蛋白质分离C．在用预冷的酒精沉淀DNA时，要用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA断裂D．利用DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，可将提取的丝状物或沉淀物溶解于NaCl溶液中
B
3．下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，正确的是（　　）A．取材时可选用鸡血、洋葱、香蕉等富含DNA的材料进行实验B．将白色丝状物置于2mol/L的NaCl溶液中，离心后弃去上清液C．可将洋葱置于清水中，细胞吸水破裂后将DNA释放出来D．鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中并进行沸水浴
A
4．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）A．羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料B．提取植物细胞的DNA时，需要加入一定量的研磨液C．预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解D．在沸水浴条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色
A
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