资源简介

(共15张PPT)
转录
翻译
DNA
mRNA
A
C
G
U
G
U
U
U
A
蛋白质
基因的表达：
A
C
G
T
G
T
T
T
A
G
C
C
A
A
T
T
A
A
DNA
RNA
蛋白质
转录
翻译
复制
逆转录
复制
中心法则：
DNA片段
基因1 基因2 基因3
放大
终止子
非编码区
非编码区
编码区
编码区上游
编码区下游
启动子
补充：原核生物的基因结构
转录
RNA聚合酶识别和结合位点
结束转录
mRNA
翻译
蛋白质
5’
3’
5’
5’
第一次循环
第二次循环
3’
5’
第三次循环
3’
3’
思考： PCR技术获取目的基因时至少要经过几次循环才能从DNA分子中分离出目的基因？
作用
1、限制酶的作用：
3、引物的作用：
4、启动子的作用：
5、终止子的作用：
----二苯胺试剂
----琼脂糖凝胶电泳
----PCR、DNA分子杂交
----PCR、分子杂交
----抗原-抗体杂交
鉴定
1、DNA粗提取产物
2、PCR扩增产物
3、染色体DNA是否插入目的基因
4、目的基因是否转录出mRNA
6、转基因生物是否表达遗传特点
5、目的基因是否表达出蛋白质
----抗性接种实验
2、标记基因的作用：
能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链
中特定部位的磷酸二酯键断开。
便于重组DNA分子的筛选
使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸
RNA聚合酶的识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA
使转录在需要的地方停下来
目的
1、PCR扩增仪的温度升高到90℃的目的：
2、PCR扩增仪的温度下降到50℃左右的目的：
3、PCR扩增仪的温度上升到72℃左右的目的：
使双链DNA解聚为单链
使两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
使溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，
根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
基因工程的步骤
1、目的基因的筛选与获取
2、基因表达载体的构建（核心）
3、将目的基因导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴定
----PCR、DNA分子杂交
----PCR、分子杂交
----抗原-抗体杂交
基因工程检测
1、目的基因是否导入受体细胞
3、目的基因是否转录出mRNA
5、转基因生物是否表达遗传特性
4、目的基因是否表达出蛋白质
----抗性接种实验
----利用标记基因
----二苯胺试剂
----琼脂糖凝胶电泳
1、DNA粗提取产物
2、PCR扩增产物
2、目的基因是否插入染色体DNA上
目的基因是否插入染色体DNA上
（PCR、DNA分子杂交）
反向导入目的基因：
正向导入目的基因：
根据目的基因设计引物、探针
根据标记基因设计引物、探针
PCR的应用
1、获取目的基因
2、扩增目的基因
3、检测目的基因是否插入到染色体DNA上
4、检测目的基因是否转录出mRNA
5、检测目的基因是否与启动子相连
6、基因定点突变
7、在目的基因两侧加上限制酶识别序列
关键：合理设计引物
①目的基因的两端；②限制酶识别序列的外侧
在目的基因上
一个引物在启动子，另一个引物在目的基因
改变引物上的碱基（替换、增添、缺失）
在引物的外侧（5’端）加上限制酶识别序列
PCR所用的仪器相同、Taq酶相同、原料相同，只有引物不同。
限制酶、DNA连接酶
逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶
基因表达载体的构建用到的酶： 。
目的基因是否转录出mRNA,用PCR检测时用到的酶： 。
利用Ti质粒将目的基因
导入受体细胞
Ca2+处理法
农杆菌转化法
-----将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌。
-----将含目的基因的T-DNA导入植物细胞、
并整合到该细胞的染色体DNA上。
利用标记基因筛选重组DNA分子的条件
载体含标记基因
受体细胞不含相应的标记基因
延伸方向
从引物的 端开始延伸
从子链的 端向 端延伸
DNA复制与转录
子链的合成方向都是从子链的 端向 端延伸
DNA聚合酶和RNA聚合酶都是从模板链的 端向 端移动
（目的基因转录的模板链的 端必需与启动子相连接）
3 ’
5 ’
3 ’
5 ’
3 ’
5 ’
3 ’
3 ’
启动子、终止子是启动转录和终止转录的DNA序列
起始密码子、终止密码子是启动翻译和终止翻译的RNA序列
区别
导入方法
将目的基因导入植物细胞
将目的基因导入动物细胞
将目的基因导入微生物细胞
农杆菌转化法
花粉管通道法
——显微注射法
——Ca2+处理法
基因表达载体的组成
①目的基因
②标记基因
③启动子
④终止子
⑤复制原点
基因工程的原理：基因重组
PCR的原理：DNA的半保留复制
原理
作为载体的条件
①有一个至多个限制酶切割位点；
②有特殊的标记基因（如：抗性基因和荧光蛋白基因）；
③能自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；
④对受体细胞无害。
PCR的基本条件
①需要提供DNA模板；
②2种引物；
③四种脱氧核苷酸；
④耐高温的DNA聚合酶。

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