资源简介

(共15张PPT)
第2节 基因工程的基本操作程序（第2课时）
本节聚焦
基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？
基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？
复习导入
培育转基因抗虫棉的过程
第一步：目的基因的筛选与获取
第二步：基因表达载体的构建
第三步：将目的基因导入受体细胞
第四步：目的基因的检测与鉴定
根据右图回忆基因工程的操作步骤：
第二步：基因表达载体的构建（核心工作）
使目的基因在受体细胞中稳定存在且遗传给下一代;
使目的基因在受体细胞中能够表达且发挥作用。
1.基因表达载体的作用
2.基因表达载体的组成
质粒
启动子：
限制酶切位点
终止子：
复制原点：
标记基因：
位于基因的上游，紧挨转录起始位点，是RNA聚合酶识别和结合的部位，具有驱动基因转录的作用。
能够在受体细胞中自我复制或整合到受体DNA上
便于重组DNA的筛选
位于基因下游，使转录在所需的地方停止下来
第二步：基因表达载体的构建（核心工作）
3.基因表达载体的构建流程
基因表达载体的构建模式图
同种限制酶或能产生相同末端的限制酶
第三步：将目的基因导入受体细胞
1.我国科学家独创的一种方法-----花粉管通道法（导入植物细胞）
花粉管通道法示意图
①用 将 直接注入 中；②在植物受粉后的一定时间内， ，将DNA溶液滴加在 上，使目的基因借助 进入 。
微量注射器
含目的基因的DNA溶液
子房
剪去柱头
花柱切面
花粉管通道
胚囊
第三步：将目的基因导入受体细胞
2.农杆菌转化法（导入植物细胞常用）
农杆菌转化法示意图
阅读教材P81资料卡，自学完成以下问题：
（1）什么是转化？
（2）农杆菌转化法的特点是什么？
（3）农杆菌转化法的思路是什么？
（4）农杆菌转化法的具体过程是什么？
第三步：将目的基因导入受体细胞
3.显微注射法（导入动物细胞）
受体细胞：
受精卵
提问：为什么常选用受精卵作为受体细胞呢？
①体积大，易操作;
②易表现出全能性。
第三步：将目的基因导入受体细胞
4.Ca2+处理法（导入微生物细胞常用）
Ca2+处理细胞
（2）流程：
感受态细胞
表达载体与感受态细胞混合
感受态细胞吸收重组DNA
（1）受体细胞：
原核生物（大肠杆菌）
可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
目的是：
第四步：目的基因的检测与鉴定
如何才能知道，目的基因进入细胞后，是否稳定维持和表达其遗传物质？
设疑
目的基因的检测与鉴定
1.分子水平的检测
2.个体水平的鉴定
第四步：目的基因的检测与鉴定
1.分子水平的检测
（1）检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因（目的基因）
①技术手段：
通过PCR等技术（如DNA分子杂交）
②过程图解：
第四步：目的基因的检测与鉴定
1.分子水平的检测
（2）检测Bt基因（目的基因）是否转录出了mRNA
①技术手段：
通过PCR等技术（如分子杂交）
②过程图解：
第四步：目的基因的检测与鉴定
1.分子水平的检测
（3）检测Bt基因（目的基因）是否翻译成Bt抗虫蛋白
①技术手段：
抗原--抗体杂交技术
②过程图解：
第四步：目的基因的检测与鉴定
2.个体水平的鉴定
转基因生物 鉴定方法 成功标志
抗虫植物
抗病毒（菌）植物
抗盐植物
抗除草剂植物
获取目的基因产物的转基因生物
通过采摘抗虫棉的叶子饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度。
饲喂害虫
（抗虫接种实验）
病毒（菌）感染
（抗病接种实验）
盐水浇灌
喷洒除草剂
提取细胞产物与天然产品进行功能活性比较
害虫死亡
未出现病斑
正常生长
正常生长
功能、活性正常
知识延伸
总结：
第一步
3.2基因工程的基本操作程序
第二步
目的基因的筛选与获取
第三步
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
第四步
目的基因的检测与鉴定
下列哪一种方法不能用于检测目的基因是否成功导入或表达（ ）
A.在显微镜下直接观察受体细胞中是否含有目的基因
B.通过PCR等技术检测受体细胞的DNA分子上是否含有目的基因
C.提取受体细胞合成的相应蛋白质，利用抗原—抗体特异性反应进行检测
D.抗虫基因导入植物细胞后，检测植物是否具有抗虫特性
巩固练习：
A

展开更多......

收起↑