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(共49张PPT)
第3章 基因工程
3.1 重组DNA技术的基本工具
学习目标
重组DNA技术所需的三种基本工具及作用
基因工程载体需要具备的条件
从社会中来
我国是棉花的生产和消费大国。棉花在种植过程中，常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最为常见。
普通棉花
如何能培育出自身就能抵抗虫害 的棉花新品种呢？
转基因抗虫棉
将苏云金杆菌中的Bt抗虫蛋白基因 转入普通棉花
重组DNA技术
基因工程：按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术
操作环境
操作原理
操作对象
操作水平
结果
意义
生物体外
基因
DNA分子水平
赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品
基因重组
【概念剖析】
课本P67、70
定向改造生物的性状；克服远缘杂交不亲和障碍
小鼠
萤火虫
发光基因
重组DNA技术
小鼠
萤火虫
发光基因
拼接的基础
1.DNA的基本组成单位相同（四种脱氧核苷酸）
2.都遵循碱基互补配对原则
3.DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
表达的基础
1.基因是控制生物性状的结构与功能单位
2.遗传信息的传递都遵循中心法则
3.生物界几乎共用一套遗传密码
1.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来
2.为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？
重组DNA技术基本工具
课本P70
DNA双螺旋的直径只有2nm，对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”
工具
限制性内切核酸酶(限制酶)：
DNA连接酶：
分子手术刀
分子缝合针
分子运输车
载体：
准确切割DNA分子
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
课本P71、72
限制性内切核酸酶：切割DNA分子的工具，简称限制酶
1.来源：
2.种类：
主要从原核生物中分离纯化出来
迄今分离的限制酶有数千种
（EcoR I 和Sma I限制酶）
Hind I
Hind II
Hind III
命名：
用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如，一种限制酶是从大肠杆菌( Escherichia coli)的R型菌株分离来的，就用字母EcoR表示；如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶，则进一步表示成EcoR I 。
例如：流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)d株中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
课本P71
3.作用：
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开
“两个特定”
EcoR I 限制酶只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开
Sma I 限制酶只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开
限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？
专一性
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
课本P71
限制酶所识别的序列有什么特点？
EcoRⅠ
SamⅠ
TaqⅠ
5’…T-C-G-A…3’
3’…A-G-C-T…5’
特点1：大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成；少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成
特点2：中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列
从5’→3’正向读与另一条链从5’→3’反向读的碱基顺序完全一致
注意：限制酶识别过程具有方向性
都是从5’→3’开始读
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
课本P71
4.切割结果:
形成黏性末端或平末端
A
A
G
T
T
C
C
T
T
A
A
G
C
T
T
A
A
G
G
A
A
T
T
C
限制酶在切断DNA时，可在切口处带有几个伸出的核苷酸，他们之间碱基正好互补配对，因此称这些片段为黏性末端
EcoR Ⅰ 限制酶能特异性识别_________序列，并在识别序列中轴线两侧切割___和___之间的____________。切割后产生__________。
GAATTC
G
A
磷酸二酯键
黏性末端
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
课本P71
4.切割结果:
形成黏性末端或平末端
C
C
C
G
G
G
G
G
G
C
C
C
限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端
C
C
C
G
G
G
G
G
G
C
C
C
Sma I 限制酶只能识别_________序列，在中轴线处切开，切割___和___之间的____________，切割后产生________。
CCCGGG
C
G
磷酸二酯键
平末端
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
【思考】请写出下列限制酶切割形成的黏性末端，思考同种限制酶切割产生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割产生的黏性末端是否一定不同？
黏性末端：
-G AATTC-
同种限制酶切割产生的黏性末端相同，不同限制酶可能会形成相同的黏性末端
-CTTAA G-
-A AGCTT-
-TTCGA A-
-A GATCT-
-TCTAG A-
-G GATCC-
-CCTAG G-
同尾酶(P75)
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
【思考】请判断：以下黏性末端是由______种限制酶作用产生的。
3
做题技巧：注意观察识别序列和切割位点
①找到切割位点
②补全序列
练习
下图所示的黏性末端属于同一种限制酶切割产生的是（ ）
C
A①② B①③ C②④ D③④
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
【思考】结合下图，推断限制酶切一次可断开几个磷酸二酯键？产生多少游离的磷酸基团？产生几个黏性末端？消耗几分子水？
限制酶切一次可断开 个磷酸二酯键，产生 个游离的磷酸基团，产生 个黏性末端，消耗 分子水
2
2
2
2
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
【思考】若某链状DNA分子中含有两个BamHⅠ的识别序列，该DNA分子将被切成____个片段，共断裂____个磷酸二酯键，形成几个_____黏性末端。
3
4
4
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
课本P71右上方、P74二、1
【思考】根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？
原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原体的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效,以保证自身的安全。
【思考】原核生物中的限制酶为什么不切割本身的DNA分子？
原核细胞DNA中不存在该限制酶的识别序列或能被识别的序列已被修饰。即含某种限制酶的细菌的DNA分子不具备这种限制酶的识别序列，或者甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。
C
G
G
C
C
G
T
A
T
A
A
T
A
T
G
C
G
C
G
C
T
A
A
T
C
G
T
A
T
A
A
T
A
T
G
C
T
A
T
A
EcoR I
EcoR I
C
G
G
C
C
G
T
T
A
A
A
A
T
T
G
C
G
C
G
C
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G
T
T
A
A
A
A
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G
C
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A
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G
G
C
C
G
T
T
A
A
A
A
T
T
G
C
T
A
T
A
DNA连接酶——“分子缝合针”
课本P72
2.种类：
种类 E.coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶
来源
功能特性
相同点 大肠杆菌
T4噬菌体
只能连接黏性末端
既可以连接黏性末端
都能连接黏性末端，恢复的都是磷酸二酯键
不能连接平末端
又可以连接平末端
（但连接平末端的效率相对较低）
1.作用：
将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
*基因工程中通常形成黏性末端
DNA连接酶——“分子缝合针”
3.限制性内切核酸酶和DNA连接酶的关系
大本P72
限制性内切核酸酶 DNA连接酶
作用
重组DNA技术中的应用
两者关系 使特定部位的磷酸二酯键断开
在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键
用于提取目的基因和切割载体
用于目的基因和载体的连接
均作用于磷酸二酯键(但效果相反)
DNA连接酶——“分子缝合针”
DNA连接酶 DNA聚合酶
相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板
作用对象
都能催化形成磷酸二酯键
都是蛋白质
不需要
只能将单个核苷酸连接到已有的脱氧核苷酸链(DNA片段)的3’-OH上，形成磷酸二酯键
在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
需要DNA一条链为模板
4.比较DNA连接酶和DNA聚合酶
大本P51、72
【判断】在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶（ ）
×
DNA连接酶——“分子缝合针”
【问题】请判断：DNA片段经限制酶处理后产生的相同黏性末端，再经过DNA连接酶处理后，形成的新的识别序列，能否再被所用的限制酶识别。
(1)若两个相同黏性末端都是由同种限制酶（EcoRⅠ）切割后所得， （填“能”或“不能”）再被所用的限制酶识别（如图）。
能
(2)若两个相同黏性末端是由不同限制酶切割所得，形成的新的识别序列 （填“能”或“不能”）再被所用的限制酶识别（如图）。
不能
-ACTAGA-
-TGATCT-
新序列：
②两种同尾酶切割的DNA片段连接后，原来的酶切位点将不存在，不能再被原来的限制酶识别。
总结：
①若切割产生的黏性末端相同，就可以用DNA连接酶连接起来。
-TGATCT-
-ACTAGA-
【多选】如图表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相关的酶作用位点。下列叙述错误的是(　 　)
A.经酶切形成甲需要脱去2分子水
B.甲、乙片段可形成重组DNA分子，但甲、丙不能
C.DNA连接酶的作用位点在乙图中b处
D.切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
练习
AC
断裂磷酸二酯键是水解过程，需要消耗水，而非脱去水
DNA连接酶催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成磷酸二酯键
练习
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。回答下列问题：
限制酶 BamH I Hind Ⅲ EcoR I Sma I
识别序列及切割位点
(1)DNA序列经过上表中几种限制酶识别切割后，可以获得_______种黏性末端的DNA片段；用限制酶__________切割某种特殊序列的DNA片段可获得平末端的DNA片段。
3
Sma Ⅰ
(2)质粒和外源DNA构建重组质粒时，需要用到DNA连接酶，可以将双链DNA片段的平末端“缝合”的连接酶是__________________。
T4 DNA连接酶
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
将外源基因送入受体细胞，相当于一种运输工具，比喻为“分子运输车”
1.种类：
质粒、噬菌体和动植物病毒等
种类 用途 不同点
质粒、噬菌体
植物病毒 动物病毒 将外源基因导入大肠杆菌等受体细胞
将外源基因导入植物细胞
将外源基因导入动物细胞
来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别
课本P72
2.最常用的载体——质粒
(1)本质：是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子
(2)作用：
①作为运输工具，将外源基因送入受体细胞
②携带外源基因在受体细胞内大量复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
课本P72
(3)在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的；这些质粒上常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选
问题：①质粒有几个游离的磷酸基团？
②对质粒用限制酶切割两次会得到几个产物(片段)？
0
2
3.★作为载体所具备的条件及原因
①有一个至多个限制酶切割位点
供外源基因插入其中
②在受体细胞中稳定存在并能自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制 (能够在受体细胞中复制并稳定保存)
使外源基因在受体细胞中稳定存在并复制，以扩增外源基因的数量
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
课本P72
③具有特殊的标记基因
如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等
便于重组DNA分子的筛选(用于鉴别含有目的基因的受体细胞)
④无毒害作用
避免受体细胞受到损伤
【拓展】标记基因的筛选原理
载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而通常来说受体细胞没有任何抗性，即抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞
标记基因通常有：
①抗生素的抗性基因，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等
②荧光蛋白基因
用限制酶切割时需注意的事项
(1)获取目的基因和切割载体时, 通常使用同种限制酶，目的是：
_____________________________________________________。
但是使用该法缺点是容易发生___________________________________________
_______________，为了避免上述情况发生，可采取的措施是：
____________________________________________。
(2)选择限制酶的注意事项：(结构完整)
①切割目的基因时：能切下目的基因且不破坏目的基因
②切割质粒时：至少保留一个完整的标记基因，便于筛选
为了产生相同的黏性末端，便于目的基因与载体连接
分别使用两种限制酶去切割目的基因和载体
目的基因、载体的自身环化以及目的基因与
载体反向连接
练习
如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线：
用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是
　 （从“EcoRⅠ”、“BamHⅠ/HindⅢ”、“SmaⅠ/HindⅢ”中选择）
BamHⅠ/HindⅢ
若选EcoRⅠ会破坏质粒的复制原点；
若选SmaⅠ/HindⅢ，则构建的重组质粒没有标记基因或复制原点
实验 DNA 的粗提取与鉴定
在一定温度下(沸水浴)，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色
3.DNA 的鉴定
在 NaCl溶液中的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
一 提取DNA的基本思路
2.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2 mol/L的NaCl溶液中
1.DNA不溶于酒精溶液
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质。
二 实验原理
大本P52
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
三 材料用具
1.选材：
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等
【思考】能否选用牛、羊、马、猪等哺乳动物成熟的红细胞做实验材料？
不能，
哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核和线粒体，几乎不含DNA
【思考】能否选用鸡血细胞做实验材料？
能，鸡是鸟类动物
大本P52
二苯胺试剂要现配现用
用棕色瓶保存
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
三 材料用具
2.试剂：
大本P52
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl
析出DNA
溶解DNA
鉴定DNA
课本P117——附录2
研磨液成分 作用
Tris-HCl缓冲液 稳定DNA
EDTA 抑制DNA酶
SDS 使蛋白质变性
· 溶/瓦解细胞膜
· 使蛋白质变性与DNA分离
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
四 实验步骤
大本P52
取材、研磨
过滤或离心取上清液
预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA
NaCl溶液溶解DNA并鉴定
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
四 实验步骤
大本P52
1. 取材、研磨
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨
研磨的目的：
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：
动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破(省去研磨步骤)
方案二
也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。
(2)上清液中除了DNA之外，可能含有那些杂质？
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
四 实验步骤
大本P52
2. 过滤或离心取上清液
→去除滤液中的杂质
方案一
在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
低温抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解
(1)用纱布过滤的方法中，低温放置几分钟的作用？
可能含有核蛋白、多糖等杂质
(1)搅拌时应轻缓、并沿一个方向：
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
四 实验步骤
大本P52
3. 预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA
方案一
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
方案二
或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。
(2)预冷的酒精具有以下优点：①可抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解
②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出
③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P74-75
四 实验步骤
大本P52
4. NaCl溶液溶解DNA并鉴定
实验组
水浴加热5min，冷却后
对照组
取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min
待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化
蓝色
实验 DNA 的粗提取与鉴定
注意事项
1．以血液（如鸡血细胞）为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固
3．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，且沿一个方向搅拌，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀
2．利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破(省去研磨步骤)
4．提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳
预冷的酒精具有以下优点：①可抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解
②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出
③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂
实验 DNA 的粗提取与鉴定
课本P75
五 结果分析与评价
二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；
如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等
本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质
1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？
2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？
观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多
练习
下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是(　　)
A.新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取
B.植物材料需先研磨破碎细胞
C.DNA只能溶于2 mol/L的NaCl溶液
D.溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂后颜色呈紫色
B
限制酶
DNA连接酶
载体
①有一个至多个限制酶切割位点
②能自我复制或能整合到宿主DNA上，随受体DNA同步复制
③有特殊的标记基因
④对受体细胞无毒害作用
质粒、 噬菌体 、动植物病毒等
作为载体的条件
种类:
磷酸二酯键
来源：
主要来源于原核生物
特点：
作用部位：
具有专一性
结果：
形成黏性末端或平末端
连接部位：磷酸二酯键
种类： E.coliDNA连接酶、T4 DNA连接酶
作用：把两条双链DNA片段拼接起来，形成磷酸二酯键
小结
重组DNA技术的基本工具
练习
一、概念检测
1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是
A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氢键
B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键
C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键
D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端
2.在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是
A.大肠杆菌的质粒
B.切割DNA分子的酶
C.DNA片段的黏性末端
D. 用来识别特定基因的DNA探针
C
A
课本P74
练习
课本P74-75
2.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeI进行切割，B片段分别用限制酶HindⅢ、XbaI、EcoRV和XhoI进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
（1）哪种限制酶切割B片段产生的DNA片段能与限制酶SpeI切割A片段产生的DNA片段相连接 为什么
Xba Ⅰ
因为 Xba I 与 Spe I 切割产生了相同的黏性末端
练习
基因运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由均正确的是 （　 　）
A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因
B.具有多个限制酶切割位点，便于目的基因的表达
C.有某些标记基因，便于目的基因与其结合
D.对受体细胞无害，便于重组DNA的筛选
A
练习
某细菌质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转入成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，如图所示是外源基因插入位置（插入点有a、b、c）示意图，请根据表中提供的细菌生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是 （ 　 　）
插入点 细菌在含氨苄青霉素的培养基上的生长状况 细菌在含四环素的培养基上的生长状况
① 能生长 能生长
② 能生长 不能生长
③ 不能生长 能生长
A．①是c；②是b；③是a B．①是a和b；②是a；③是b
C．①是a和b；②是b；③是a D．①是c；②是a；③是b
A
重组DNA分子
…TATCGTACGATAGGTACTTAA
…ATAGCATGCTATCCATG
AATTCGGCATAC…
GCCGTATG…
…TCCTAG
…AGGATCTTAA
GAGCCATACTTAA
AATTCTCGGTATG
AATTCCATAC…
GGTATG…
GAGCCATACTTAA
AATTCTCGGTATG
5′
3′
5′
3′
5′
3′
5′
3′
课本P73
练习
课本P75
（2）不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义
提示：识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。
例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断；这时可以考虑用合适的同尾酶（目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列）来获取目的基因。

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