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(共23张PPT)
二 微生物的选择培养和计数
科学实例
寻找耐高温的DNA聚合酶
被广泛用于体外扩增DNA片段的
聚合酶链式反应（PCR）
思路：
耐高温的酶
耐高温生物体
高温环境
（eg热泉、火山口等）
寻找
寻找
美国黄石公园热泉
启示：
根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
（eg耐寒微生物、石油分解菌、尿素分解菌、纤维素分解菌等）
实验室筛选的原理：
人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。
科学实例
选择培养基
选择培养基
鉴别培养基
伊红-美蓝指示剂
刚果红指示剂
选择培养基配方的设计
CO(NH2)2
脲酶
+ H2O
+ CO2
2NH3
讨论：
1.在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。
2.除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。
如何确定选择培养基有选择作用？
实验思路：
设置基础培养基（eg牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数均多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。
微生物的选择培养
土壤取样
注意：
①一般要铲去表层土，取距地面3～8cm的土壤层；
②取土样的工具和纸袋在使用前都需要灭菌。
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
9 mL 无菌水
90mL无菌水
10g
梯度稀释菌液
101
102
103
104
105
106
107
滴加菌液
涂布器灭菌
注意：
①将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；
②不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。
培养与观察
待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。
注意：实验前最好将培养皿做好标记，
eg组别、日期、稀释度等
稀释涂布平板法
微生物的数量测定
1.稀释涂布平板法
——活菌计数法
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(1)原理
(2)统计原则
① 一般选择菌落数为30～300的平板计数。
② 在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
(3)计算
1.稀释涂布平板法
——活菌计数法
请计算：4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为 。
1.1×108
(4)结果分析
统计的菌落数＜＜活菌的实际数目
原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
1.稀释涂布平板法
——活菌计数法
2.显微镜直接计数法
利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
(1)原理
对细菌等较小的细胞进行观察和计数
较厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。
2.显微镜直接计数法
(2)优点
快速、直观
(3)缺点
①统计结果一般是活菌数和死菌数的总和
偏大
②不适于对运动细菌的计数
归纳拓展《导》P77
探究·实践
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
5.进一步探究
CO(NH2)2
脲酶
+ H2O
+ CO2
2NH3
呈碱性，遇酚红指示剂呈红色
方法：在培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌周围会形成红色圈。
刚果红指示剂
纤维素
+ 刚果红
红色复合物
纤维素酶
纤维二糖、葡萄糖等
方法：在培养基中加入刚果红指示剂，纤维素分解菌周围有透明圈。
不与刚果红反应
即不形成红色复合物

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