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(共30张PPT)
第1节 传统发酵技术
★ ★ ★腐乳、泡菜、果酒、果醋制作原理？制作流程？注意事项？
第2节 一、微生物的基本培养技术
1.培养基：成分（必备营养组成、特殊需求并举例）？
2.纯培养的定义？ P11 接种方法（获得单菌落的方法 ）？ P12
3.微生物的纯培养包括哪些步骤？ 配制培养基→灭菌→倒平板 →接种→分离→培养 等
①平板冷凝后，倒置目的？
③在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
第2节 二、微生物的选择培养和计数
4.从土壤分离尿素分解菌的原理？P18最后一段基础知识
5.稀释涂布平板法：①计数原理--P18第二段2、3行
②统计的菌落往往比活菌实际数目低，原因？
第一章 发酵工程 核心背诵
①酒精发酵的温度 醋酸发酵的温度
②泡菜制作中盐水煮沸的原因？
泡菜坛装八成满的原因？
加少许陈泡菜水的目的？
用水密封泡菜坛的目的？
③果酒发酵罐发酵液不可装满，要留出1/3的原因？
a.杀灭盐水中的微生物 b.去除水中的溶解氧
a.防止其他微生物发酵产生CO2而导致发酵液溢出坛外
b.防止因装太满使盐水未完全淹没菜料而导致菜料腐烂变质
增加乳酸菌的含量，使其在短时间内形成菌种优势
保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境
①酵母菌可通过有氧呼吸大量繁殖 ②防止发酵液溢出
18-30℃
30～35℃
区分概念(理解即可)
发酵：指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。
（1）传统发酵技术：直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术一般称为传统发酵技术。P5
（2）发酵工程：利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面（章首页P1）
发酵形式：混合菌种的固体或半固体发酵
菌种来源：原材料中（野生型酵母菌、乳酸菌）、空气中（醋酸菌、毛霉）
前一次发酵物中 （陈泡菜水、老面）
一、发酵菌种比较
二、发酵原理
P5
需氧型
水果果皮表面附着的野生酵母菌
空气中的毛霉孢子
整理在课本
背诵落实
原理：特别关注乳酸发酵产物没有CO2，但是泡菜发酵初期有气泡（co2）产生（酵母菌等杂菌进行细胞呼吸产生CO2）；
果酒制作有气泡产生（定时排气） 果醋制作的两种情况P7;（排气？）
分裂方式 ？ 原核（乳酸菌、醋酸菌——二分裂） 真核（酵母菌、毛霉——有丝分裂、减数分裂）
1.泡菜制作流程：4步
配制盐水
用清水和食盐配制质量百分比为5%-20%的盐水→盐水煮沸→冷却待用
原料处理、蔬菜装坛
新鲜蔬菜洗净→切条块、混匀→晾干；
装至半坛→加调味料→
继续加菜至八成满
调味；抑制其他微生物生长
a.杀灭盐水中的微生物
b.去除水中的溶解氧
⑩装八成满原因：
a.防止其他微生物发酵产生CO2而导致发酵液溢出坛外(发酵初期，酵母菌、大肠杆菌等较为活跃，发酵产物中有较多CO2)
b.防止因装太满使盐水未完全淹没菜料而导致菜料腐烂变质
加盐水
封坛发酵
将冷却好的盐水缓缓倒入坛中，
盐水没过全部菜料→盖好坛盖
向坛盖边缘的水槽中注满水→
发酵过程中经常向水槽中补充水
根据室内温度控制发酵时间
抑菌、无氧环境
防止高温杀死菜料表面的乳酸菌
增加乳酸菌的含量， 使其在短时间内形成菌种优势
保证坛内乳酸菌发酵所需的无氧环境
⑨选用新鲜蔬菜的原因
⑩调味料、香辛料作用：
新鲜蔬菜亚硝酸盐含量少，营养物质丰富
外界溶液浓度高，使蔬菜渗透失水
⑧向坛盖边缘的水槽中注满水目的:
⑩腌制过程会出现溶液量增多现象，原因？
过高：乳酸菌渗透失水，抑制乳酸菌生长繁殖，发酵延迟
过低：杂菌易繁殖；亚硝酸盐含量增加
调味、抑菌
酵母菌等杂菌进行细胞呼吸产生CO2
白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厌氧菌，泡菜液营养丰富，表面O2含量丰富，适合酵母菌繁殖。
食盐过多（、温度过低）抑制了乳酸菌的发酵。
不是，①发酵时间过长，可能产生其他有害物质； ②发酵时间过长，乳酸含量过高，口味不佳。
乳酸菌渗透失水，抑制乳酸菌生长繁殖，发酵延迟
杂菌易繁殖；亚硝酸盐含量增加
背诵落实
泡菜发酵初期，泡菜坛的水槽间歇性冒出气泡，原因？
泡菜坛内白膜的形成原因？
制出的泡菜“咸而不酸”，最可能原因？P8-2
泡菜发酵时间是否越长越好？
4.腌制中乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐含量的变化
发酵时期 乳酸菌 乳酸 亚硝酸盐
发酵前期
发酵中期
发酵后期
变化曲线
增加
(蔬菜中的硝酸盐 ------→ 亚硝酸盐)
达到最多后开始下降
原因：①缺氧和酸性环境抑制硝酸盐还原菌
生长，使亚硝酸盐产生量降低
②部分亚硝酸盐被分解
下降至保持相对稳定
（硝酸盐还原菌被完全抑制）
少
（坛内有O2，乳酸菌活动受抑制。大肠杆菌、酵母菌等进行有氧呼吸，消耗O2，为乳酸菌提供无氧环境，乳酸菌开始繁殖，产生乳酸）
乳酸菌最多；乳酸积累增多，PH下降
（由于前期乳酸的积累、无氧环境的形成，乳酸菌逐渐占据优势，乳酸积累增多，其他微生物受到抑制）
乳酸菌数量下降；乳酸含量继续增加
（乳酸增加，PH下降，当达到一定程度时，抑制了乳酸菌的活性，发酵速度逐渐变缓甚至停止）
硝酸盐还原菌
泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有哪些？P6 腌制方法、腌制时间长短、温度高低等
量的变化：菌种的（先增后稳定（占优势）、减少（营养物质、PH下降、代谢物积累 等））、
杂菌的（先增后减，不占优势）、
产物的、
亚硝酸盐的
1.制作流程
器具消毒
冲洗葡萄
榨汁装瓶
酒精发酵
果酒检测
打开瓶盖，盖上纱布
醋酸发酵
果醋检测
2、果酒、果醋制作流程
避免洗去果皮表面附着的野生酵母菌
④要留有大约1/3的空间，盖好瓶盖
①将发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精清洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用 →目的？
留有大约1/3的空间目的：
①酵母菌可通过有氧呼吸大量繁殖
②防止发酵液溢出
⑧从发酵瓶口取样来对发酵的情况进行检测
⑨发酵温度为30～35℃，时间为7～8d。→此时酵母菌是否会继续发酵？
⑩发酵完成后，在发酵液的液面上会出现一层菌膜，这是醋酸菌膜
a.嗅味、品尝
b.重铬酸钾
c.镜检酵母菌数量
a.观察液面白色菌膜;嗅味、品尝
b.检测醋酸发酵前后PH
c.镜检醋酸菌数量
防止发酵液被污染
不会。随醋酸发酵进行，发酵液PH、发酵温度均不利于酵母菌生长繁殖，酵母菌活性很低
盖好瓶盖目的：
①创造无氧环境，酒精发酵
②防止好氧微生物污染
拧松目的：排出CO2，防止发酵瓶爆裂
选取的葡萄怎样处理：先清水冲洗1-2次，再去除枝梗和腐烂的籽粒，沥干
先冲洗、后去除枝梗的目的：避免除去枝梗引起葡萄破损而被杂菌污染
背诵落实
充气口：
排气口：
出料口：
取样检测、放出发酵液
2.考察重点——果酒、果醋的发酵装置改良 P8-3
作用：酒精发酵时，排出CO2。
排气口要通过曲颈管与瓶身连接目的？
防止空气中杂菌的污染。
改进：充气口塞入棉花或安装其他过滤装置，防止杂菌污染
密封：泡菜——密封，无氧环境
果酒——密封但要排气、
果醋——通气
①泡菜坛：要有很好的气密性；盖上坛盖，并用水密封泡菜坛。
②盐水煮沸后冷却待用；
③盐水没过全部菜料
发酵容器（泡菜坛、发酵瓶）处理：清洗干净→煮沸消毒；70%酒精消毒→晾干
原料处理： 新鲜葡萄先清洗1-2次→再去枝梗和腐烂籽粒→沥干
装置空间：蔬菜装坛（八成满 ）
榨汁装瓶（留1/3）
密封：泡菜——密封，无氧环境
果酒——密封但要排气
果醋——通气
不需要严格灭菌,原因：产物（乳酸、酒精、醋酸）、PH(酸性)、食盐、缺氧等条件，抑制杂菌生长
米酒制作时，米饭中接种的酵母菌太少导致米酒变质的原因？
制作米酒，米饭中挖一小洞的原因？有利于透气，保证酵母菌在开始生长时有足够氧气，大量增殖
接种的酵母菌太少，造成酵母菌起始密度过低，不能迅速增殖形成生长优势，从而导致杂菌污染
泡菜、果酒、果醋
比较分析
一、微生物的基本培养技术
1.研究和应用微生物的前提及发酵工程的重要基础？ 实验室培养微生物的条件？P9第一段
2.培养基：定义？分类？成分（必备营养组成、特殊需求）？
3.①获得纯净的微生物培养物的关键？（无菌技术的目的或关键）
②无菌技术包括哪两个方面？
③消毒：定义？常用方法？应用范围？
④灭菌：定义？常用方法？应用范围？
4.纯培养物的定义？纯培养的定义？ P11 菌落的定义？P12 接种方法（获得单菌落的方法 ）？ P12
5.微生物的纯培养包括哪些步骤？P11及P12-13 配制培养基→灭菌→倒平板 →接种→分离→培养 等
①培养基、培养皿的灭菌方法 ？ 培养基调PH在哪一步之前进行？
②倒平板：温度？锥形瓶瓶口通过火焰的目的？培养皿只打开一条缝的目的？平板冷凝后，倒置目的？
③平板划线法的原理P13第一段？ 接种环灼烧次数？ 每次灼烧的目的？
在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
④接种后的平板培养时如何放置？培养条件？同时培养一个未接种的平板作用？
第2节 微生物的培养技术及其应用 （蓝色的重点背） P9-21
二、微生物的选择培养和计数
1.①水生栖热菌的筛选原理（为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来）？
②选择培养的原理（实验室微生物筛选的原理）？ ③选择培养基的定义？P16
2.分解尿素的细菌之所以能分解尿素的原因？ P16
3.稀释涂布平板法—操作步骤：梯度稀释→涂布平板P17图1-7.
4.稀释涂布平板法：
①计数原理--P18 第二段2、3行。
②注意事项 P18 第三段
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低，原因？
④计算公式
5.显微镜直接计数法：原理？缺点？
6.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
①原理？P18最后一段基础知识
②实验流程？
③如何设计对照？
④如何对尿素分解菌进一步鉴定？
⑤拓展应用：课后题P20-2 纤维素分解菌的分离、计数 过程。
第2节 微生物的培养技术及其应用 （蓝色的重点背） P9-21
①目的？
1.2.1 微生物的基本培养技术
1.2.2 微生物的选择培养和计数
实验室培养微生物的条件：
①为微生物提供合适的营养和环境条件
②确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来
1.2 微生物的培养技术及应用
1.P9培养基的配制（概念、分类、营养成分)
2.P10无菌技术（消毒、灭菌）
3.P11微生物的纯培养
4.P17微生物的选择培养
5.P18微生物的数量测定
②方法？
在平板上得到由单个细胞繁殖形成的单菌落。
（但培养基不一定有选择作用)
平板划线法、稀释涂布平板法
（选择培养基上纯培养获得单菌落）
从社会中来
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶.自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。→这需要应用无菌技术和微生物的培养技术
·是否一定要加入“碳源”或“氮源”？
·P18培养基中K2H2PO4、NaH2PO4 的作用？
·培养基中葡萄糖的作用？
①提供无机营养 ②作为缓冲剂，调节PH ③调节渗透压
自养型微生物利用CO2，固氮菌利用N2
①为细胞生命活动提供能量②为其他有机物的合成提供原料
在液体的选择培养基中培养（选择培养、扩大培养）的目的？
一、培养基
概念 分类：
根据 的需求？
成分：
2.按功能 分类：
完全培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 P10牛肉膏、蛋白胨分别提供什么营养？
选择培养基：P16
鉴别培养基：
（鉴别不同微生物）
概念：允许特定种类的微生物生长，
同时抑制或阻止（不是杀死）其他
种类微生物生长
（分离出一种或一类微生物）
①以尿素为唯一氮源的培养基P18：分离尿素分解菌
②添加某种抗生素的培养基：分离筛选某抗生素抗性菌株
③以纤维素为唯一碳源的培养基P20：分离纤维素分解菌
④不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌
⑤不加含碳有机物的培养基：分离自养型微生物
①鉴别纤维素分解菌：纤维素为唯一碳源的选择培养基+刚果红染色
②鉴别大肠杆菌P30：伊红-亚甲蓝琼脂培养基
③鉴别醋酸菌：制备醋酸菌初筛平板时，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳
酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的？
使培养基不透明，从而使醋酸菌菌落周围出现透明圈
P20筛选出…菌并富集培养
对物质的降解能力检测指标？
（选择培养基？液体培养？）
挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落
摇床、振荡、搅拌的目的？
增加培养液中O2含量，有利于充分利用营养物质
研究和应用微生物的前提？发酵工程的重要基础？P9
获得纯净的微生物培养物的关键？P10（无菌技术的目的或关键）
防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物
防止杂菌污染
二、
无菌技术
培养基、培养液灭菌：高压蒸汽灭菌
土壤取样、配制培养基无需在酒精灯火焰附近。
离体的植物组织？P36
判断：利用高压蒸汽灭菌法灭菌原理是通过压力杀死微生物
使用前
制备培养基
倒平板 注意事项：
1.倒平板时为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
2.培养皿是完全打开吗？目的？
将培养基倒入培养皿时，为使平板表面平整如何操作？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
三、微生物（酵母菌）的纯培养
灭菌之前
1.概念：培养物、纯培养物、纯培养
2.微生物的纯培养 步骤：
配制培养基→灭菌→倒平板 →接种→分离→培养 等
灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基
①防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
②避免培养基中水分过快挥发
不能 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生
将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 防止杂菌污染
左三圈、右三圈晃动培养皿
思考：若要调节培养基的pH，应在何时进行？
判断：指示剂和染料不需要灭菌
目的：获得纯培养物（单菌落）
在平板上得到由单个细胞繁殖形成的单菌落。
1.制备培养基（配制培养基→灭菌→倒平板）
2.接种和分离酵母菌
①接种的平板和一个未接种的平板
同时倒置培养
②培养场所？恒温培养箱
③培养温度？培养时间？P19
接种方法P12：平板划线法P13
稀释涂布平板法P17
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在接种结束后,为何仍需灼烧接种环？
灼烧次数？
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3.在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
4.注意：①全过程均在超净工作台上并在酒精灯火焰附近 P10
②接种（划线）时培养皿只打开一条缝 ③接种后，平板倒置
杀死接种环上原有微生物，避免污染培养物
3.培养酵母菌
避免接种环温度太高，杀死菌种
将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单菌落。
（2）实验组，接种的平板至少要有3个，作用：重复实验
（1）同时培养一个未接种的平板作用：
空白对照，检测培养基是否有杂菌污染
①加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌
②不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌
③不加含碳有机物的培养基：分离自养型微生物
概念：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
稀释涂布平板法
1.2.2微生物的选择培养和计数
1.实例：
寻找 耐高温的DNA聚合酶
2.实验室微生物筛选的原理？
3.选择培养基：
4.计数：
稀释涂布平板法操作：梯度稀释→涂布平板 作用：分离、计数 P18 计数原理？
（间接计数法、活菌计数法）
不是表层土
判断：使用前，在培养皿的皿底做好标记，避免混淆。
二、计数
1.稀释涂布平板法：（间接计数法、活菌计数法）
2.显微镜直接计数：P18
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌
思考：是否一定要进行梯度稀释？
①一般选择菌落数为30 300的平板进行计数
②通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。
③每个稀释度至少取3个平板取其平均值；
④统计的菌落往往比活菌的实际数目低
（原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落）
A．3号试管的稀释倍数为1×103倍
B．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号试管的10倍
C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个
D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低
下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　)
D　解析：3号试管的稀释倍数为1×104倍，A错误；4号试管中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号试管的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号试管的10倍，B错误；5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(168＋175＋167)÷3÷0.1×105×100÷10＝1.7×109个，C错误；稀释涂布平板法培养得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目低，D正确。
23（3）刚果红可以与纤维素、淀粉等多糖形成红色复合物。在CMC-Na（羧甲基纤维素钠）为唯一碳源的固体培养基上，微生物繁殖的速度很慢，加入适量土豆汁后繁殖速度加快。这是由于微生物本身酶系统的影响，一般情况下，微生物会优先利用淀粉，淀粉耗尽才会利用纤维素。从利于筛选纤维素分解菌的角度考虑，添加土豆汁的浓度不宜太__________（填"高"或"低"）。实验结果显示，相对于只能分解淀粉的菌落，纤维素分解菌的菌落周围有更明显的透明圈，原因？


随着淀粉的耗尽，纤维素分解菌还能继续分解利用纤维素，菌落周围形成更明显的透明圈
高效降解菌株（如：纤维素分解菌）
的挑选要求？
挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落
摇床、振荡、搅拌的目的？
增加培养液中O2含量，有利于充分利用营养物质
在液体的选择培养基中培养（选择培养、扩大培养）的目的？筛选出…菌并富集培养
第三节 发酵工程及其应用
发酵工程的基本环节
1.菌种的来源？改良优良菌株的方法？
2.扩大培养的目的？方法？
目的：增加菌体数量，缩短生产周期。
方法：将培养到生长速度最快时期的菌体分开，再进行培养。
3.发酵工程的中心环节？
4.在发酵过程中，要随时检测？要及时添加？要严格控制什么发酵条件？环境条件会影响什么？
5.注意：溶解氧通过通气量和搅拌速度进行调节。
6.发酵产品有哪两类？如何分离提纯？
判断：通过发酵工程，可从微生物细胞中提取单细胞蛋白。
22（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是
盐浓度为60g/L，其他杂菌因失水过多而死亡；
pH为10，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制
食品工业
医药工业
生产传统发酵食品
农牧业
其他方面
生产食品添加剂
发酵工程应用
生产酶制剂
采用基因工程的方法，将植物或动物的基因、病原体的某个或某几个抗原基因转移到微生物中，获得具有某种药物生产能力的微生物。
直接对菌种进行改造，再通过发酵技术大量生产所需要的产品。
生产微生物肥料
生产微生物农药
生产微生物饲料
解决资源短缺与环境污染问题
将极端微生物应用于生产实践
利用霉菌发酵生产酱油、利用酿酒酵母生产各种酒类
利用黑曲霉发酵生产柠檬酸、利用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸
利用微生物发酵生产淀粉酶、果胶酶、脂肪酶和氨基肽酶等
利用工程菌发酵生产生长激素释放抑制激素
通过诱变的青霉菌发酵生产青霉素
利用根瘤菌和固氮菌生产的根瘤菌肥、固氮菌肥
利用微生物或其代谢物防治病虫害
利用淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液，通过发酵获得大量微生物菌体（单细胞蛋白）用于饲料生产
利用纤维废料发酵生产酒精、乙烯
利用嗜热菌、嗜盐菌生产洗涤剂
利用纤维废料（如秸秆等）发酵生产酒精、乙烯等能源物质，意义？P27
①解决能源短缺问题 ②解决环境污染问题
黑曲霉发酵生产？（酱油、柠檬酸）
啤酒的工业化流程
思考：
1.利用酵母菌进行酒精发酵为什么要“先通气后密封”？
2.啤酒生产中，发酵是重要环节，发酵后期，如果密封不严，会使啤酒变酸，你知道这是发生了什么变化吗？
3.与传统的手工发酵相比，在下面啤酒的发酵生产过程中，哪些工程手段使啤酒的产量和质量明显提高 讨论1
1.“通气”的目的是使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，“密封”的目的是使酵母菌进行酒精发酵产生酒精。
2.醋酸菌是一种好氧菌，若发酵罐密封不严，酒精就会在醋酸菌的作用下被氧化产生乙醛，最后变为醋酸。
3.菌种的选育、对原材料的处理、发酵过程的控制、产品的消毒等。
P20课后题
1.(1)√;(2)√;(3)√。 2.D。
拓展应用
1.反刍动物瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。因此从中分离能分解尿素的微生物除了需要准备尿素为唯一氮源的选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
2. (2)提示纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。
(3)提示这是人工创建适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。
P28课后题
(1)x;(2)√;(3)√;(4)x。
1(1)可以用基因工程的方法，将血红蛋白基因转入青霉素生产菌来提高菌体对氧的吸收和利用率。
(2)可以对两种酶的基因进行改造或敲除其中中一种酶的基因，从而使青霉素生产菌只生产一种产物。
2. 这一风险是存在的。在生产燃料乙醇时，为了规避这一风险，应该使用陈化粮(如陈化稻谷等)或者非粮食生物材料(如秸秆等)。使用陈化粮生产燃料乙醇，还有利于防止问题粮食流人市场。
P30复习与提高
1(1)筛选出可以降解化合物A的微生物 选择
(2)显著降低 扩增。
(3)细菌计数板计数 S型增长
(4)目的菌用于环境保护实践时，还需解决的问题：
目的菌能否在自然环境中大量生长繁殖、
否产生对环境有害的代谢物、
降解化合物A后是否会产生二次污染等
(5)可行。
P30复习与提高（答案整理）
2.(1)①不同意。 原因：只检测一个冰激凌数据太少，不能排除偶然因素的影响。
②没有必要。
原因：根据国家标准，自来水中的大肠杆菌数目应该是非常少的。即使冰激凌中大肠杆菌数目超标了，也不可能很离谱，如果进行梯度稀释，最后培养出来的菌落数可能不在计数要求的范围内，从而导致结果误差大。
③需要设置对照组。应该设置两组对照组。
一组为阴性对照组，不进行涂布或者用无菌水涂布平板，说明培养基是否被污染;
另一组为阳性对照组，涂布大肠杆菌，说明该培养基能否培养出大肠杆菌。
(2)B。
(3)说明冰激凌中不仅有大肠杆菌，还有其他细菌或真菌等。
统计结果比实际值偏少。
原因：因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落P18；
并且这种计数方法统计的是活菌数。
(4)提示应该马上去小店告知店主这批冰激凌不能再卖了;还要告知食品卫生管理部门,以对这批冰激凌的来源进行追踪调查。其他合理答案也可。

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