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(共19张PPT)
第2节 基因工程的基本操作程序
抗虫棉的培育过程
2.基因表达载体的构建
1.目的基因的筛选与获取
3.将目的基因导入受体细胞
4.目的基因的 检测与鉴定
Bt基因
Ti质粒
重组DNA分子
将目的基因插入染色体DNA中
从社会中来
基因工程的基本操作程序：
获：目的基因的筛选与获取
构：基因表达载体的构建
导：将目的基因导入受体细胞
检：目的基因的检测和鉴定
（核心）
一、基因工程的基本操作程序
受体生物 植物 动物 微生物
导入方法
三、将目的基因导入受体细胞
1. 将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法。（用于双子叶植物）
三、将目的基因导入受体细胞
1. 将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法。（用于双子叶植物）
（1）农杆菌的特点：
农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。
当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的DNA上。
三、将目的基因导入受体细胞
（2）农杆菌转化步骤：
四、将目的基因导入受体细胞
2.花粉管通道法
在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。
3.将目的基因导入动物细胞
方法：显微注射法
提纯含目的基因表达载体
受精卵
显微注射
移植到输卵管或子宫
受精卵发育
新性状动物
（2）操作:
显微注射技术
4.将目的基因导入微生物细胞
（1）微生物作受体细胞原因：
（2）常用法：
Ca2+处理
常用菌：
大肠杆菌
（增加细胞壁的透性，与细胞膜无关）
（3）过程：
Ca2+处理大肠杆菌
感受态细胞
表达载体与感受态细胞混合
感受态细胞吸收DNA
繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。
Ca2+
感受态细胞
吸收
受体生物 植物 动物 微生物
受体细胞
导入方法
受精卵
体细胞
受精卵
细胞/个体
农杆菌转化法
基因枪法
花粉管通道法
显微注
射技术
用Ca2+处理感受态细胞
三、将目的基因导入受体细胞（小结）
按前面三个步骤进行了操作，是否可以确定目的基因进入了受体细胞并能维持稳定？是否可以确定目的基因一定能够进行表达？是否可以确定得到了新的性状？
不一定！
如何判断？
检测—
鉴定——
③检测目的基因是否翻译成蛋白质
抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
②检测目的基因是否转录出了mRNA
①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插
入了目的基因
四、目的基因的检测与鉴定
——检查是否成功
目的基因的检测与鉴定
某种特定性状
生物大分子具有特异性
----分子水平的检测
特定基因控制特定性状,如抗虫、抗旱等
----性状水平的检测
1、检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因
① 首先取出转基因生物的基因组DNA；
（1）方法:
DNA分子杂交
（2）过程:
② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针；
③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明目的
基因已插入染色体DNA中。
（一）检测
15N
15N
变性
变性
2、检测目的基因是否转录出了mRNA
①方法:
分子杂交
②过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,
表明目的基因转录出了mRNA。
3、检测目的基因是否翻译成蛋白质—抗原-抗体杂交
蛋白质
脱分化
提取
苏云金杆菌
Bt毒素蛋白
抗体
出现
杂交带
鉴定——
抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。
五、目的基因的检测与鉴定（小结）
3.2 基因工程的基本操作程序（四个步骤）
目的基因的筛选与获取
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测与鉴定
有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。
使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用。
载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。
才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。
前提
核心
关键
保证

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