资源简介

(共18张PPT)
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1．提取DNA的原理
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。
2．鉴定DNA的原理
在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。
(1)不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。
二、材料用具
1.选材：
注意：
2.试剂：
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl
——析出DNA
——溶解DNA
——鉴定DNA，要现配现用
(2)以鸡血为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，
防止血液凝固。
三、方法步骤 （视频）
1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
三、方法步骤
加入研磨液后，必须充分研磨，否则细胞核不会充分破碎，释放出的DNA量就会减少。
利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：
动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。
研磨的目的：
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
2．去除滤液中的杂质
方案一 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
方案二 直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液
三、方法步骤
为减少DNA的损失，过滤过程一般使用纱布过滤。
抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖等杂质
②低温放置几分钟的作用：
3.DNA的析出
方案一 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
方案二 将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
三、方法步骤
搅拌时应轻缓、并沿一个方向：
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
1.提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。
预冷的酒精具有以下优点：
①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。
2.实验中出现的丝状物的主要成分是DNA，实际上每一根“丝”都是由许多DNA分子聚集在一起形成的，应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免破坏DNA。
3.DNA的析出
4.DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。将丝状物或沉淀物溶解于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
实验组
水浴加热
对照组
注意事项：①先溶解再加二苯胺
②沸水浴加热目的：加快颜色反应速率
DNA耐高温
例1　若从植物细胞中提取DNA，发现实验效果不好，如看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定时不显示颜色反应等，其可能的原因是
①植物细胞中DNA含量低　②研磨不充分　③过滤不充分　④95%冷酒精的量过大
A.①② B.③④ C.①④ D.②③
√
例2　(2021·天津耀华中学高二期中)下表关于DNA粗提取与鉴定实验的表述，不正确的是
选项 试剂 操作 作用
A 研磨液 与生物材料混合 提取溶解DNA
B 2 mol·L－1 NaCl溶液 与提取出的DNA混合 溶解DNA
C 冷却的酒精 加入到离心后的上清液中 溶解DNA
D 二苯胺试剂 加入到溶解有DNA的NaCl溶液中 鉴定DNA
√
1.DNA粗提取与鉴定实验中所依据的原理是
①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同
②DNA易被甲紫溶液染成紫色
③溶解有DNA的NaCl溶液加入二苯胺试剂沸水浴后会呈现蓝色
④加入体积分数为95%的冷酒精，DNA会从溶液中析出
⑤加入体积分数为70%的冷酒精，DNA会从溶液中析出
A.①②③ B.①③④
C.②③④ D.①③⑤
跟踪训练
1
2
3
4
5
√
6
2.(2021·山东日照高二期中)下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是
A.用蒸馏水使家兔的红细胞涨破，可获取富含DNA的滤液
B.DNA不溶于95%的冷酒精，但可溶于2 mol/L的NaCl溶液
C.新鲜的洋葱和猪肝可作为实验材料提取DNA，而菠菜不能用于提取
　DNA
D.鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中并进行沸水浴
1
2
3
4
5
√
6
3.(2021·山东聊城高二期中)下列与DNA粗提取与鉴定过程有关的叙述中，错误的是
A.将鸡的成熟红细胞置于清水中，红细胞涨破后将DNA释放出来
B.用2 mol/L的氯化钠溶液溶解提取物并离心后，须保留上清液
C.在提取液中加入75%的冷酒精后蛋白质会与DNA分离并析出
D.DNA与二苯胺溶液在沸水浴加热条件下会呈现蓝色
1
2
3
4
5
√
6
4.在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，甲、乙、丙、丁四个小组除表中所列处理方法不同外，其他操作步骤均正确，但实验结果却不同。下列有关叙述不正确的是
1
2
3
4
5
组别 实验 材料 提取核物质时加入的溶液 去除杂质时加入的溶液 DNA鉴定时加
入的试剂
甲 鸡血 蒸馏水 体积分数为95%的酒精(25 ℃) 二苯胺试剂
乙 菜花 蒸馏水 体积分数为95%的酒精(冷却) 双缩脲试剂
丙 猪血 蒸馏水 体积分数为95%的酒精(冷却) 二苯胺试剂
丁 鸡血 蒸馏水 体积分数为95%的酒精(冷却) 二苯胺试剂
6
A.实验材料选择错误的组别是丙
B.沸水浴后试管中溶液颜色变蓝的组别是甲、丁
C.甲组实验现象不明显的原因是25 ℃的酒精对DNA的凝集效果差
D.乙组实验不成功仅因为在鉴定时加入了双缩脲试剂
1
2
3
4
5
√
6
5.(2021·山东潍坊高二期中)多种实验材料都可以用于DNA的粗提取与鉴定，用香蕉也可以取得较好的实验效果，下列操作正确的是
A.向剪碎的香蕉果肉组织中加入蒸馏水，以释放核DNA
B.经研磨后，将研磨液离心5 min，取沉淀物进行下一步操作
C.冷却的体积分数为95%的酒精可以溶解某些蛋白质，得到粗提取的
　DNA
D.将DNA溶于NaCl溶液后，加入现配的二苯胺试剂，混合均匀即可出
　现蓝色
1
2
3
4
5
√
6
1
2
3
4
5
6.实验中对DNA进行鉴定时，做如下操作，分析回答下列问题：
试管 序号 A B
1 加2 mol·L－1的NaCl溶液5 mL 加2 mol·L－1的NaCl溶液5 mL
2 不加 加入提取的DNA丝状物并搅拌
3 加4 mL二苯胺试剂，混匀 加4 mL二苯胺试剂，混匀
4 沸水浴5 min 沸水浴5 min
实验现象
实验结论 (1)根据上图，完成表格空白处的实验内容。
溶液不变蓝色
溶液逐渐变蓝色
DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺试剂会被呈现蓝色
6
(2)对于B试管，完成1、2、3的操作后溶液颜色如何变化？ 。
(3)在沸水浴中加热的目的是 ，同时说明DNA对高温有较强的 。
(4)A试管在实验中的作用是 。
(5)B试管中溶液颜色的变化程度主要与_____________________________
有关。
溶液颜色基本不变
加快颜色反应速率
耐受性
对照
加入试管中的DNA(丝状物)的量
1
2
3
4
5
6

展开更多......

收起↑