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第32讲 发酵工程
第十二单元 生物技术与工程
课标要求 1.举例说明日常生活中的哪些食品是运用传统发酵技术生产的
2.阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定生命活动，工业化生产人类所需产品
3.举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值
课标要求 1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提
2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术
3.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物
4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法
5.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法

考点三 微生物的选择培养和计数
一. 选择培养基
1. 选择培养基
(1)概念: 在微生物学中，将允许__________的微生物生长，同时___________其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
特定种类
抑制或阻止
(2)自然界中目的菌株筛选的依据: 根据它对___________的要求, 到相应的环境中去寻找。
(3)实验室中微生物筛选的原理: 人为提供有利于_______生长的条件(包括营养、温度、PH等),同时_____________其他微生物的生长。
生存环境
目的菌
抑制或阻止
加氨苄青霉素
具有抗氨苄青霉素能力的菌落
选择培养基
培养基+氨苄青霉素
培养基
没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰
2.怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌
影印法接种
1.怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？
应该设置完全培养基(如牛肉膏蛋白胨培养基)作为对照，若完全培养基中生长的菌落数均多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性；
2. 选择培养基的类型:
(1)利用改变培养条件进行选择培养。
(2)利用添加某种化学物质进行选择培养。
(3)利用营养缺陷进行选择培养。
70～80℃的高温
分离耐高温的水生栖热菌
加入青霉素
分离酵母菌、霉菌等真菌
加高浓度食盐
金黄色葡萄球菌
不加含碳有机物的碳源的培养基
分离出自养型微生物
不加氮源的培养基
分离出固氮菌
编号 成分 含量
① 粉状硫 10g
② （NH4）2SO4 0.4g
③ K2HPO4 4.0g
④ MgSO4 9.25g
⑤ FeSO4 0.5g
⑥ CaCl2 0.5g
⑦ H2O 100ml
(1)上表培养基可培养的微生物类型是 。
(2)若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入 。(注: 加高浓度食盐可培养金黄色葡萄球菌)
自养型微生物
含碳有机物
【检测】下表是某微生物培养基成分，请据此回答:
(3)若除去成分②，加入(CH2O)，该培养基可用于培养 。
固氮微生物
3.选择培养基配方的设计(以筛选能分解尿素的细菌的培养基为例)
(1)土壤中尿素被分解的原理:
土壤中某些细菌能合成 ，其可以催化尿素分解产生NH3，NH3再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。NH3可以作为细菌生长的 。
脲酶
氮源
【思考】尿素［CO(NH2)2］能作为碳源吗？
CO(NH2)2 + H2O = CO2↑ + 2NH3↑
因为尿素分解菌为异养微生物，无法利用无机碳源(CO2)。
不能
(2)培养基配方:
唯一的氮源
碳源、无机盐、水,以尿素作为_____________。
二.微生物的选择培养
1.稀释涂布平板法
将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
基本操作:
(1)梯度稀释；
(2)涂布平板。
①铲取土样，将样品装入纸袋中。
②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。
1mL
1ⅹ10
90mL无菌水
1ⅹ107
1ⅹ105
1ⅹ106
1ⅹ103
1ⅹ102
1ⅹ104
1mL
1mL
1mL
1mL
9mL无菌水
1mL
②取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
2. 稀释涂布平板法的操作过程
③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。
④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。
⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。
计算公式: 每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。
【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( )
A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
B
三. 微生物的数量测定
1.间接计数法 —— 稀释涂布平板法
(1)原理: 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)计数原则:
①一般选择菌落数为30～300的平板进行计数；
②在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值。
③适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
用稀释涂布平板法计数微生物时,为了使结果接近真实值,应设置三个或以上的平板,计算菌落平均数。另外,要求选择菌落数在30~300的平板进行计数。解题时注意以下情况:
(1)只得到1个菌落数在30~300的平板是错误的,原因是不符合实验的重复原则,易受到偶然因素的影响。
(2)得到3个或3个以上菌落数在30~300的平板,也不一定正确。
①不同平板间差异较大,如得到3个平板,菌落数分别为230、34、240,虽然菌落数均在“30~300”之间,但是“34”与“230”“240”差距太大,所以应找出原因,重新实验。
②不同平板之间差异不大,是符合要求的,用其平均值作为估算的最终结果。
由此可见,并不是只要得到3个或3个以上“菌落数在30~300的平板”即可,而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30~300的平板”且无较大差异,说明实验操作合格,才能按照计算公式进行计算。
稀释涂布平板法计数微生物的注意事项
②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
(3)稀释涂布平板法结果分析:
①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少；
原因: 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
2.直接计数法——显微镜直接计数
(1)原理: 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
(2)缺点:
统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和，不能区分死菌与活菌。
细菌计数板计数法
血细胞计数板计数法
显微镜直接计数
(缺点)
四.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.实验目的
(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。
(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。
2.实验原理
绝大多数微生物都能利用
葡萄糖，但是只有能合成脲酶
的微生物才能分解尿素，利用
以尿素作为唯一氮源的选择培
养基，可以从土壤中分离出分
离尿素的细菌。
CO(NH2)2+H2O
脲酶
2NH3+CO2
组分 含量
KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
H2O 定容至1000mL
以尿素为唯一氮源
一般以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组
3.实验步骤
(1)土壤取样
①取样地点要求: 酸碱度接近中性的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长。
②取样过程: 铲去表层土（一般3cm左右）。细菌绝大部分分布在距地表3～8cm的土壤层。
③注意事项:
取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。
(2)样品的稀释与涂布平板
不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。
在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，应选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。
【提醒】设置对照和重复
(1)对照
目的: 排除非测试因素对实验结果的影响。
方法:
空白对照: 确定培养基制作是否合格。
条件对照: 用完全培养基与选择培养基对照,说明选择培养基 具有选择作用。
(2)重复
目的: 排除偶然因素对实验结果的影响。
方法: 同一稀释度涂布至少3个平板。
　　
　　
　
　
3组接种的以尿素作为唯一氮源的选择培养基(实验组, 三个重复组)
用于分离并计数能分解尿素的细菌
第5组接种的牛肉膏蛋白胨培养基(完全培养基)
与实验组对照，用于判断选择培养基是否具有选择作用
第4组不涂布稀释液的以尿素作为唯一氮源的选择培养基
与实验组对照，用于验证培养基是否灭菌彻底
第6组不涂布稀释液的牛肉膏蛋白胨培养基(完全培养基)
与第5组对照，用于验证培养基是否灭菌彻底
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》实验分组
　　
　　
　
　
实验结果: 前3组实验组分离得到 ；第5组得到 ；
第4、6组正常情况下 。
注意事项: 本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
标记标在皿底
单种菌落
多种菌落
无菌落
(4)微生物的培养与观察
①培养条件: 不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。
②观察: 每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的种类和数目或防止因培养时间太长导致菌落粘连影响计数。
放入37℃恒温箱中培养1～2d
(4)微生物的培养与观察
稀释
103倍
稀释104倍
稀释
105倍
空白
对照
恒温培养箱
拓展——分解尿素细菌的进一步鉴定
1.原理
细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。
2.方法
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红：
(1)液体培养基可以直接看液体的变色情况；
(2)固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。
平板划线法 稀释涂布平板法
纯化原理
接种工具
单菌落的获得
用途
接种效果图
相同点 通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落
接种环
涂布器
从最后划线的区域挑取
稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落
分离纯化菌种，获得单菌落
①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数
①都能分离纯化菌种；②都是在固体培养基上进行的
两种纯培养方法的比较
1.纤维素分解菌的筛选与鉴定方法:
2.纤维素分解菌的筛选方法的原理:
【拓展】纤维素分解菌的筛选
这种方法通过颜色反应直接对微生物进行筛选与鉴定。
刚果红染色法
我们就可以通过观察是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
挑取产生明显透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。
C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量
D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
【检测】(2021 山东卷)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是( )
半固体培养基
A.乙菌的运动能力比甲菌强
B.为不影响菌的运动需选用液体培养基
B
由图可知，甲菌和乙菌的试管中均有黑色沉淀，即均产生了硫化氢，虽然甲菌产生的沉淀颜色更深，但乙菌发生了扩散，沉淀分布不集中，不能直接仅凭颜色深浅比较出两种菌产生硫化氢的量
【检测】某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。
(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用　　　　　　　　 的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是　　　。甲、乙培养基均属于
　　　　培养基。
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)
琼脂
选择
(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布100 μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释 倍。
104
(3)在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是 (答出1点即可)。
S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长
(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：_____
_______________________ _________________________________。
取淤泥
加入无菌水进行梯度稀释,涂布(或稀释涂布)到乙培养基上,培养后计数
(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即 。
水、碳源、氮源和无机盐
一. 发酵工程的基本环节
选育菌种
配制培养基
接种
灭菌
扩大培养
在自然界中筛选或通过诱变育种、基因工程育种等方式获得优良菌种
菌种确定后，要选择原料制备培养基。配方往往要反复试验才能确定
工业发酵罐体积大，接入的菌种多，发酵前要对菌种扩大培养
发酵工程使用的菌种多为单一菌种。一旦有杂菌污染，可能导致产量大大降低。培养基和发酵设备均需严格灭菌
考点四 发酵工程及其应用
接种
发酵罐内发酵
中心环节
在发酵过程中，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成。
如谷氨酸的发酵生产: 在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸；在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N -乙酰谷氨酰胺。
电动机
排气管
pH计
冷却水排出口
冷却夹层
发酵液
搅拌叶轮
生物传感器装置
空气入口
放料管
阀门
培养物或营养物质的加入口
观察孔
取样管
温度传感器和控制装置
冷却水进入口
发酵罐示意图
发酵罐示意图:
抽取样本进行检测
带走微生物进行细胞呼吸产生的热量, 若温度过高, 会影响微生物酶的活性。
调节罐压
控制溶解氧
使微生物与营养物质充分接触，以保证微生物的营养供应,加快O2的溶解以及散热
分离、提纯
产物
获得产品
发酵罐内发酵
如果发酵产品是微生物细胞本身，可在发酵结束之后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，即可得到产品。如果产品是代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。
二. 发酵工程的应用
1.发酵工程的特点
(1)生产条件温和: 温度、压力都不高。
(2)原料来源丰富且价格低廉: 微生物种类多,易分离。
(3)___________: 可直接生产某种物质。
(4)废弃物对环境的污染小且容易处理: 废料是各种代谢产物,只要灭菌后,一般对环境不造成污染。
产物专一
(1)在食品工业上的应用
a.生产传统的___________。
①下图为啤酒的工业化生产
发酵产品
释放淀粉酶
糖浆
酒精和
二氧化碳
低温、密闭
2. 发酵工程的应用
②利用黑曲霉发酵生产酱油、利用酿酒酵母生产各种酒类
淀粉酶
失活
终止酶的进一步作用
大多数微
生物
发酵的温度和发酵的时间随啤酒品种和口味要求不同有所差异。
b.生产各种各样的_____________。
c.生产_________。
食品添加剂
酶制剂
(2)在医药工业上的应用
a.青霉素的发现和产业化生产推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。
b.发酵工程逐步扩展到了其他_________、多种氨基酸、_______和免疫调节剂等的生产领域。
(3)在农牧业上的应用
a.生产_____________。
b.生产_____________。
c.生产_____________。
(4)在其他方面的应用
发酵工程正渗透到几乎所有的工农业领域,在助力解决粮食、_______、健康和_______等方面的重大问题上,作出了越来越大的贡献。
抗生素
激素
微生物肥料
微生物农药
微生物饲料
环境
能源
【检测】(2021 广东卷)中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H, 以糖蜜(甘蔗榨糖后的废弃液, 含较多蔗糖)为原料, 在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。回答下列问题
(1)为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为____________，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用___________________的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有______________________________等。（答出两种方法即可）
诱变育种、基因工程育种
唯一碳源
稀释涂布板计数
(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是________(答出两点即可)
(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中____________________可能是高密度培养的限制因素。
(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾(主要含蛋白质、淀粉、油脂等)来生产PHA，说明其能分泌_______________________________。
蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等
盐浓度为60g/L的条件下,其他杂菌因失水过多而死亡；
pH为10的条件下,其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制
氧气(O2或溶解氧)
污水池中污泥样品
初选
振荡培养若干天后
测定各瓶中化合物A的含量
接种
候选菌
接种
选择
接种
接种
固体
培养基
重复多次，直至获得目的菌。
1.某化工厂为了处理排出污水中的一种有害的、难以降解的有机化合物A, 其研究团队用化合物A、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基, 成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示,请分析回答问题。
(1)在培养基中加人化合物A的目的是_________________________
_______,这种培养基属于______
培养基。
筛选出可以降解化合物A的
微生物
课本P30
选择
污水池中污泥样品
初选
振荡培养若干天后
测定各瓶中化合物A的含量
接种
候选菌
接种
选择
接种
接种
固体
培养基
重复多次，直至获得目的菌。
课本P30
(2)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量____________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量_________
显著降低
增加
(3)若要研究目的菌的生长规律,可挑取单个菌落进行液体培养，再采用________________方法进行计数。请你预测目的菌的种群数量会发生怎样的变化。_______
细菌计数板计数
S型增长
污水池中污泥样品
初选
振荡培养若干天后
测定各瓶中化合物A的含量
接种
候选菌
接种
选择
接种
接种
固体
培养基
重复多次，直至获得目的菌。
课本P30
(4)将目的菌用于环境保护实践时,还有哪些问题需要解决
目的菌能否在自然环境中大量生长繁殖、是否会产生对环境有害的代谢物、降解化合物A后是否会产生二次污染等问题都需要研究清楚后，才能进行实践。
污水池中污泥样品
初选
振荡培养若干天后
测定各瓶中化合物A的含量
接种
候选菌
接种
选择
接种
接种
固体
培养基
重复多次，直至获得目的菌。
课本P30
(5)有人提出,可以通过改造细菌的基因来获得能够降解化合物A的细菌,请分析这种方法是否可行。
可行。
这是基因工程的基本思路。
2.某个高温日,某校三位高中学生相约去吃冰激凌，之后两人都出现腹泻现象，于是他们怀疑冰激凌中的大肠杆菌含量超标。老师建议他们利用学过的有关微生物培养的知识对此冰激凌进行检测。经过一番资料查阅,他们提出了如下实验设计思路。
立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌;配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基(该培养基可用来鉴别大肠杆菌,生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色,并有金属光泽)、灭菌、倒平板;取10 mL刚融化的冰激凌作为原液然后进行梯度稀释,稀释倍数为1×10~1x105;取每个浓度的冰激凌液各0.1mL,用涂布平板法进行接种,每个浓度涂3个平板,一共培养18个平板;在适宜温度下培养48 h,统计菌落数目。
课本P30
(1)请你从下面几个角度对这三位同学的思路进行评议。
①他们只打算对一个冰激凌进行检测,理由是:两个人吃过冰激凌后,都拉肚子了,所以再检测一个就足以说明问题。你同意这样的观点吗 为什么
不同意。只检测一个冰激凌数据太少,不能排除偶然因素的影响。
立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌;配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基(该培养基可用来鉴别大肠杆菌,生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色,并有金属光泽)、灭菌、倒平板;取10 mL刚融化的冰激凌作为原液然后进行梯度稀释,稀释倍数为1×10~1x105;取每个浓度的冰激凌液各0.1mL,用涂布平板法进行接种,每个浓度涂3个平板,一共培养18个平板;在适宜温度下培养48 h,统计菌落数目。
立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌;配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基(该培养基可用来鉴别大肠杆菌,生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色,并有金属光泽)、灭菌、倒平板;取10 mL刚融化的冰激凌作为原液然后进行梯度稀释,稀释倍数为1×10~1x105;取每个浓度的冰激凌液各0.1mL,用涂布平板法进行接种,每个浓度涂3个平板,一共培养18个平板;在适宜温度下培养48 h,统计菌落数目。
②有没有必要对冰激凌原液进行梯度稀释 为什么 【提示:我国卫生部门规定了饮用水标准, 1 mL自来水中细菌总数不可以超过100个(37 ℃培养24 h), 1000 mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个(37℃培养48h)】
没有必要。根据国家的标准，自来水中的大肠杆菌数目应该是非常少的。即使冰激凌中大肠杆菌数目超标了，也不可能很离谱,如果进行梯度稀释,最后培养出来的菌落数可能不在计数要求的范围内,从而导致结果误差大。
立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌;配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基(该培养基可用来鉴别大肠杆菌,生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色,并有金属光泽)、灭菌、倒平板;取10 mL刚融化的冰激凌作为原液然后进行梯度稀释,稀释倍数为1×10~1x105;取每个浓度的冰激凌液各0.1mL,用涂布平板法进行接种,每个浓度涂3个平板,一共培养18个平板;在适宜温度下培养48 h,统计菌落数目。
③他们认为,在用该方法统计菌落数目时不需要设计对照组,所以只准备培养18个平板。你认为在这项检测中是否需要对照组 为什么
需要设置对照组。严格来说,应该设置两组对照组。一组为阴性对照组,不进行涂布或者用无菌水涂布平板；另一组为阳性对照组,涂布大肠杆菌。前者可以说明培养基是否被污染后者可以说明该培养基能否培养出大肠杆菌。
(2)下图所示为4种菌落分布图,一般不能由涂布平板法得到的是______
A
B
C
D
B
(3)在完善实验设计思路后,三位同学进行了实验。培养结果显示,除了深紫色菌落,还有其他菌落存在,这说明了什么 如果以菌落数代表样品中的大肠杆菌数量,则统计结果比实际值是偏多还是偏少 为什么
说明冰激凌中不仅有大肠杆菌,还有其他细菌或真菌等。统计结果比实际值偏少。因为有些菌落可能会重叠,统计时容易将其误认为是一个菌落,并且这种计数方法统计的是活菌的数目。
(4)如果实验结果显示,检测的冰激凌中大肠杆菌含量超标了。接下来他们应该做什么
应该马上去小店告知店主这批冰激凌不能再卖了；还要告知卫生管理部门，以对这批冰激凌的来源进行追踪调查。

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