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微生物的培养技术及应用
微生物的基本培养技术
本节聚焦：
1.什么是培养基？如何配置？
2.什么是无菌技术？
无细胞结构
原核细胞
真核细胞
微生物
真菌:酵母菌、毛霉等；
原生生物:草履虫、变形虫等
微生物：难以用肉眼观察的微小生物的统称。
病毒:SARS、新冠病毒、HIV、等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：链霉菌等
研究和应用微生物的前提
实验室培养微生物条件
一、培养基的配制
阅读教材9页-10页相关内容，回答以下问题：
1.培养基的概念？培养基的种类？培养基的作用？
2.培养基的成分？各成分的作用？
3.培养基能直接培养病毒吗？
1.概念
2.类型及用途
液体培养基：
表面生长
（需氧型）
均匀混浊生长（兼性厌养型）
沉淀生长
（厌养型）
半固体培养基：
(是否运动)
无动力
有动力(弥散)
固体培养基：菌落
几种菌落及其形态
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分 天然培养基
合成培养基
用途
鉴别培养基
培养基的种类
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产，扩大培养
观察微生物的运动
微生物分离、鉴定、活菌计数、保存菌种
含化学成分不明确天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
富集、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
3.培养基的成分
（1）基本成分：
碳源、氮源、水、无机盐
①碳源：
无机碳源：
CO2、NaHCO3
有机碳源：
葡萄糖、蛋白质、牛肉膏等
②氮源：
无机氮源：
NH3、N2、铵盐等
有机氮源：
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
作用：①构成生物体细胞的物质和一些代谢产物
②有些是异养生物的能源物质
作用：合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等物质所必需的
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000mL 水
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
（2）在主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长的条件有哪些？例子？
二、无菌技术
阅读教材10页-11页相关内容，回答以下问题：
1.获得纯净的微生物培养物的关键是什么？
2.消毒和灭菌的概念？它们的区别？
3.常用的消毒和灭菌方法有哪些？
4.各种方法适用的对象？
1.获得纯净的微生物培养物的关键是______________。
防止杂菌污染
2.无菌技术主要包括 。
消毒和灭菌
①消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
②灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3.具体操作：
①实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒
②培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
③实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触
④为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。
3.消毒和灭菌的概念
①消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
②灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。
②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min 或 80-90℃下煮30s-1min。
③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。
④紫外线消毒法：
用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。
4.常用的消毒方法
实例：牛奶 优点？
①湿热灭菌：
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸汽灭菌效果最好，100 kPa、121℃下维持15-30 min，常用于培养基、无菌水等的灭菌。
②干热灭菌：
160-170℃下加热2-3h。常用于玻璃器皿（吸管、培养皿等）和金属器具（耐高温的和需要保持干燥的物品）。
③灼烧灭菌：
常用于接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其它金属用具，试管口、瓶口等的灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧。
5.常用的灭菌方法
思考：无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？
避免操作者被微生物感染
三、微生物的纯培养
阅读教材11页-13页相关内容，回答以下问题：
1.培养物、纯培养物、纯培养的概念？
2.菌落、单菌落的概念？获得单菌落的方法？
3.酵母菌纯培养的方法步骤？
4.倒平板的步骤和注意事项？
5.平板划线法的步骤和注意事项？
1.培养物、纯培养物、纯培养的概念
2.菌落、单菌落的概念
3.获得单菌落的方法
平板划线法和稀释涂布平板法
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
4.酵母菌纯培养的方法步骤
（1）制备培养基
①配制培养基
②灭菌
培养基？
培养皿？
③倒平板
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养，观察是否有菌落形成，以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
（2）接种和分离酵母菌
连续划线法
分区划线法
平板划线法的具体操作：
1.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。
2.在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞
3.试管口通过火焰
4.在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
5.试管口通过火焰，并塞上棉塞
6.在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。
7.灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。
1
2
3
4
5
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
蘸取菌液
冷却
冷却
冷却
平板划线法注意事项:
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次
②划线首尾不能相接
③每次划线前接种环进行灭菌
④划线后,培养皿倒置培养
接种环灼烧次数
=区域数+1
（3）培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24-48h.
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
思考·讨论
项目 目的
蘸取菌液前灼烧
每次划线前灼烧
划线操作结束后灼烧
避免接种环上可能存在的微生物污染菌种
杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端
及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者
2.在第二次划线以及以后的操作时，为什么要从上一次划线的末端开始划线？
3.为什么最后一次的划线不能与第一次的划线相连？
思考·讨论
使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分离得到单菌落。
最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连，则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。
1.培养基的概念、种类、作用及营养成分
2.获得纯净培养物的关键？消毒和灭菌的概念、方法及作用对象。
3.培养物、纯培养物、菌落和单菌落的概念？获得单菌落的方法？
4.酵母菌纯培养的方法步骤？
5.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
6.平板划线法的操作步骤（熟读）
7.划线第一步以及每次划线之前和操作结束后都要灼烧接种环的目的分别是？
8.在第二次划线以及以后的操作时，为什么要从上一次划线的末端开始划线？
9.为什么最后一次的划线不能与第一次的划线相连？
10.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
背 诵

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