资源简介

(共48张PPT)
第36课 微生物的培养技术及应用
考点一 微生物的基本培养技术
考点一 微生物的选择培养和计数
阅读教材P9-11，自主梳理下列问题对应的知识点（4分钟）读薄教材
1.在实验室培养微生物，需要？P9
2.培养基的作用？实验室最常用的培养基？P9
3.从物理性质方面，培养基分为？（二者区别）P9 从功能上分为？
4.培养基的一般成分包括？P10 牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏提供的主要营养是？蛋白胨提供的主要营养是？
5.培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。如：在培养乳酸菌、霉菌、细菌时，分别需要？P10
6.获得纯净的微生物培养物的关键是？消毒的概念、灭菌的概念 P10
7.消毒和灭菌工作主要包括哪两个方面？P10
8.做好消毒和灭菌工作后，要注意？为避免微生物污染，接下来的许多操作都应该在哪里进行？P10
9.常用的消毒方法及处理对象？常用的灭菌方法及处理对象？P10
考点一 微生物的基本培养技术 P333
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
用途
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产
观察微生物的运动
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
天然培养基
合成培养基
固体培养基
液体培养基
半固体培养基
选择培养基
鉴别培养基
1.培养基的分类
教材P9
a.基本成分：
碳源、氮源、水、无机盐
①碳源：
无机碳源：
CO2、CO32-、HCO3-
有机碳源：
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等
自养微生物
异养微生物
②氮源：
无机氮源：
NH4＋、NO3-、NH3等
有机氮源：
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
③无机盐：
Ca、K 、Mg为大量元素
Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素
2.培养基的营养成分
教材P10
还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求、
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
举例说明：
培养乳酸菌需要添加维生素
培养霉菌时需将PH调至酸性，培养细菌时将PH调至中性或微碱性
培养厌氧微生物时需要提供无氧条件
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
教材P10
比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围
消毒 较为温和的______ 或生物等方法 仅杀死物体表面或内部一部分微生物 煮沸消毒法 日常用品
__________ 不耐高温的液体
______________ 操作空间、操作者的衣物和手等
紫外线消毒法 接种室、接种箱或超净工作台
物理、
化学
巴氏消毒法
化学药物消毒法
灭菌 强烈的理化方法 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 __________ 培养基、容器等
__________ 玻璃器皿、
金属用具等
___________ 接种工具等
湿热灭菌法
干热灭菌法
灼烧灭菌法
(3)常用的灭菌、消毒方法比较
3.无菌技术
(1)目的：获得　　　　　　。
(2)关键：　　　　　　。
纯净的培养物
防止杂菌污染
教材P10-P11
（2023·山东卷）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ）
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
D
(2019·江苏)下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是( 　)
A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
A
（2018·全国Ⅱ卷）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_______(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能__________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_______________。
可以
营养物质损失少
破坏DNA的结构
消毒液
氯气
冷空气未排尽
培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是(　 　)
①化学消毒法　 ②灼烧灭菌　 ③干热灭菌　
④紫外线消毒法　⑤湿热灭菌　⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥　　　　 B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤
A
问题：1.无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？
2.使用后的培养基应如何处理
还能有效避免操作者被微生物感染
灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
1
2
3
4
5
考向1| 培养基的成分与功能的分析
1．下列有关培养基的叙述，正确的是(　 　)
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基中都只含有碳源、氮源、水和无机盐
C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基表面生长，可形成肉眼可见的单个细菌繁殖而来的菌落
A
1
2
3
4
5
2．已知某种细菌以CO2为唯一碳源，下列相关叙述正确的是(　 　)
A．可推测该细菌的代谢类型为自养需氧型
B．无机盐是该细菌不可缺少的营养物质
C．培养过程中碳源同时充当该细菌的能源物质
D．培养该细菌的培养基中不需要添加氮源
B
1
2
3
4
5
考向2| 无菌技术的辨析
3．(2021·北京卷)人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作错误的是(　 　)
A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌
B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样
C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布
D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断
C
1
2
3
4
5
4．(2022·湖北卷改编)灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　 　)
A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．为防止蛋白质变性，不能用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D．可用高压蒸汽灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
D
1
2
3
4
5
考向3| 微生物的纯化方法及过程的分析
5．下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　 　)
A．①步骤使用的培养基是已经调节过pH并灭菌的培养基
B．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
C．③到④的过程中，接种环共灼烧了5次
D．④步骤操作时，不能将第1次和第5次的划线相连
C
操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的填写下表：
项目 第一次操作 每次划线之前 划线结束
目的 __________ 杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于 ___________________，使每次划线菌种数目减少
_________________________
杀死接种环上原有的微生物
上次划线的末端
杀死接种环上残存的菌种，避免微生物污染环境和感染操作者
真题再现：(2019·全国卷Ⅲ，37)回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是__________________________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是_______________________________________________。
蛋白胨
不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同
能够
硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源
自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中铵盐的浓度，对水体有一定的净化作用。请回答下列问题：
（1）培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供______________，
培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于________培养基。
氮源
选择
（2023 广东）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（ ）
A．a点时取样、尿素氮源培养基
B．b点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
D
(2017·全国卷Ⅰ，37)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：
(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是______________________________________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是
(答出两点即可)。
(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________________________________________。
(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________________________________________________(答出两点即可)。
脲酶
分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物
尿素
为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料
其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用
为细菌生长提供无机盐离子，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH的稳定
实验：酵母菌的纯培养
明确概念：纯培养物、纯培养P11 单菌落P12
①分离微生物的方法？P12 分离过程中要用到哪些工具？
②调节pH在灭菌前还是灭菌后？如何对培养基和培养皿进行灭菌？P12
③倒平板时，温度冷却至？P12在哪里进行操作？倒平板的具体步骤是？
最后一步平板倒置的目的是？
④利用平板划线法分离酵母菌的原理？P13
⑤接种前、第2-5次划线前、划线结束后都需要灼烧接种环的目的分别是？
⑥最后如何培养酵母菌？如何验证实验中有无杂菌污染？ P13
阅读教材P11-13，自主梳理下列问题对应的知识点（4分钟）
(1)概念:
(2)过程: 、灭菌、接种、 和培养等步骤。
(3)常用方法: 法和 法。
平板划线
稀释涂布平板
配制培养基
分离
固体培养基
一定形态结构
单一个体
菌落形状、大小、隆起程度和颜色
1.实例——酵母菌的纯培养
微生物群
分散
单个细胞
单个菌落
繁殖
目的：检验培养过程是否有杂菌污染
方法 平板划线法 稀释涂布平板法
纯化原理
接种工具
单菌落的获得
用途
接种效果图
相同点
通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散
将菌液进行一系列的等比稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落。
接种环
涂布器
从最后划线区挑取
稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落
分离纯化菌种，获得单菌落
①分离纯化菌种，获得单菌落
②用于计数
①都能分离纯化菌种 ②都在固体培养基上进行的
平板划线法 vs 稀释涂布平板法
（2022·广东·21）研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学号”考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。 P340
回答下列问题：(1)研究者先制备富集培养基，然后采
用_______________法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，
28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培
养物，为了获得纯种培养物，除了稀释涂布平板法，
还可采用___________法。据图分析，拟杆菌新菌株在
以________________为碳源时生长状况最好。
(2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是 。（答一点即可）
(3)藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是________________ 。
(4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有________________。
高压蒸汽灭菌
平板划线
纤维素
某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存
拟杆菌作为分解者，将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物，归还到无机环境中，有利于碳循环的顺利进行
耐低温
1.在实验室中进行微生物的筛选的原理？ 2.什么是选择培养基？
3.如何配置选择培养基将土壤中能分解尿素的细菌分离出来？
为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？
4.稀释涂布平板法的具体操作步骤？细菌的最后的培养方法？
5.为什么稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目？
6.为了保证结果准确，一般如何计数？（选30-300的菌落数的平板；至少3个平板重复计数，求平均值）
7.为什么稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少？
8.除此之外，常用的直接利用显微镜进行直接计数的方法？
9.（19页）细菌适宜生长在pH接近 的潮湿土壤中，绝大多数分布在距地表_____土壤层中。因此取样时一般要_____。
10.测定土壤中细菌的数量，一般选用稀释倍数是？细菌一般的培养温度是？
一般，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如？
考点二：微生物的选择培养和计数
阅读教材P16-19，自主梳理下列问题对应的知识点（4分钟）
二.微生物的选择培养和计数
1.选择培养基
常见选择培养基举例：①缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N2的微生物。②含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出真菌。③无有机碳源的培养基可筛选出自养微生物。
2.稀释涂布平板法
二.微生物的选择培养和计数
①系列稀释操作：取1mL菌液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。
2.稀释涂布平板法
二.微生物的选择培养和计数
②涂布平板操作步骤：
3.微生物的数量测定
二.微生物的选择培养和计数
①稀释涂布平板法：
因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
为排除偶然因素对实验结果的干扰，保证实验结果的准确性
3.微生物的数量测定
二.微生物的选择培养和计数
①稀释涂布平板法：
特别提醒关于“选择菌落数在30~300的平板”的两个理解误区
①只得到1个菌落数在30~300的平板:不符合实验的重复原则,易受到偶然因素的影响。
②得到3个或3个以上菌落数在30~300的平板:也不一定正确,如得到3个平板,菌落数分别为230、34、240,虽然菌落数均在30~300之间,但由于34与另外两个平板上的菌落数差异较大,应找出原因并重新实验。
4.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
二.微生物的选择培养和计数
脲酶
尿素
(1)实验原理
4.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
二.微生物的选择培养和计数
(2)操作步骤
30～300
温度
时间
24 h
菌落
1.制备以纤维素作为唯一碳源的选择培养基进行筛选；
2.提示：纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。
3.初步筛选出来的菌种还需要进一步加刚果红进行鉴定。
教材P20拓展应用2：地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈如下图所示）。请回答下列问题。
思考：要从土壤中分离纤维素分解菌，如何设计实验方案？
可以到什么地方去寻找纤维素分解菌？
5.分解纤维素的微生物的分离
纤维素
刚果红
红色
复合物
土壤取样
培养基的制备
样品稀释.涂布平板
培养、观察
富含纤维素的环境。
①树林中多年落叶形成的腐殖土；
②埋有已腐烂的滤纸土壤。
Ⅰ培养基的种类：
液体的选择培养基
（以纤维素为唯一碳源）
Ⅱ目的：筛选出能够分解纤维素的细菌并富集培养。
等比稀释后，将样品涂布到鉴别纤维素菌的培养基上：鉴别培养基（选择培养基+刚果红染液）
高效降解菌株的筛选：挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落。
选择怎样的环境取样（在什么环境中寻找目的菌)？
（2011 新课标卷 T39）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从被原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。
（2019 浙江4月选考 32）（1）通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因是①水果中果胶含量较高，② 。
腐烂水果中含产果胶酶的微生物较多
5.分解纤维素的微生物的分离
1
3
5
2
4
6
考向1| 选择培养基成分与功能的分析
1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(　 　)
A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、蒸馏水
B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水
C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、蒸馏水
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水
A
2
1
3
4
5
6
2．物质W是一种含氮有机物，W在培养基
中达到一定量时培养基表现为不透明。某
小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌，
结果如下图。下列说法错误的是(　　 )

A．透明圈的形成是因为W物质被分解
B．所用的选择培养基应该是以物质W为唯一氮源
C．甲菌落中的细菌可能是利用空气中的氮气作为氮源
D．乙菌落中的细菌都能降解W，不需要进一步纯化
D
3
1
2
4
5
6
考向2| 微生物选择培养方法的辨析
3．(2022·江苏卷)下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是(　 　)
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
D
4．(2022·全国乙卷)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。
碳源 细胞干重/(g·L-1) S产量/(g·L-1)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖废液 2.30 0.18
回答下列问题：
(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有_________________________________________(答出2点即可)。
高压蒸汽灭菌、干热灭菌
(2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______________；用菌株C生产S的最适碳源是____________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要____________________(答出2点即可)等营养物质。
(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是____
_________________________________________________________。
(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：_______________
_________________________________________________________
_________________________________________________________。
(5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其意义是__________(答出1点即可)。
配制等量的一系列不同浓度的制糖废液分别接种等量的菌株C，其他条件相同且适宜，培养一段时间后，测定不同浓度制糖废液中S产量，S产量最高时对应的制糖废液浓度为生产S的最适碳源浓度　
葡萄糖
制糖废液
氮源、无机盐、水
不能合成淀粉酶
减少污染、节省原料、降低生产成本
2
4
5
1
3
6
考向3| 微生物数量测定的方法
5．土壤中有丰富的微生物，若利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化，过程如下图。下列相关叙述错误的是(　 　)
A．若目的是筛选分解尿素[CO(NH2)2]的细菌，则尿素可以作为该菌的氮源和碳源
B．3号试管的稀释倍数为1×104，理论上3号试管的活菌数应是4号试管的10倍
C．4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.1×108个
D．该种方法统计的菌落数比活菌的实际数目少
A
微生物的计数方法比较
计数方法 直接计数法 间接计数法
计数原理
主要用具 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 涂布器
计数依据 细菌个数 培养基上菌落数
优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌
计算公式 每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400×104×稀释倍数 每克样品中的菌株数:(C÷V)×M
　C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数
缺点 不能区分死菌与活菌 当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落
结果 比实际值偏大 比实际值偏小
2
4
5
1
3
6
6．(2023·广东汕头一模)热纤梭菌是一种能高效降解纤维素的嗜热厌氧细菌，可分泌一种多酶复合体将纤维素水解为可溶性糖，在农林废弃物的转化利用中具有应用价值。下图是筛选该菌的过程，相关叙述错误的是(　 　)
A．从牛粪堆的深层取样比从表层取样更加合理
B．甲、丙都是以纤维素为唯一碳源的选择培养基
C．用平板乙统计菌落数可准确反映该菌的真实数量
D．丙中纤维素的残留量可反映该菌降解纤维素的能力
C
(2020，全国Ⅰ卷)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和S,乙的组分为无机盐、水、S和Y。
(1)实验时,盛有水或培养基的摇瓶通常采用____________　　　 的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是　　　。甲、乙培养基均属于________培养基。
琼脂
选择
高压蒸汽灭菌
(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL,若要在每个平板上涂布100 μL稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个,则至少应将摇瓶M中的菌液稀释　　　　倍。
(3)在步骤⑤的筛选过程中,发现当培养基中的S超过某一浓度时,某菌株对S的降解量反而下降,其原因可能是 (答出1点即可)。
S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长　　　　　　　　
104
(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数,请写出主要实验步骤: 。
(5)上述实验中,甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同,但都能为细菌的生长提供4类营养物质,即　　　　　　　　 。
取淤泥加入无菌水中,涂布(或稀释涂布)到乙培养基上,培养后计数　　
水、碳源、氮源和无机盐
(2022 全国卷)某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。
实验所用的培养基成分如下。
培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。
培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。
操作步骤：
①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；
②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。
回答下列问题。
（1）实验所用培养基中作为碳源的成分是 。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成
（答出2种即可）等生物大分子。
石油
DNA、RNA、蛋白质
（2）步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是 。
（3）为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是：
N0 2n
菌株 透明圈大小
平板Ⅰ 平板Ⅱ
A +++ ++
B ++ -
在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录。
根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力。
培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。
培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。
操作步骤：
①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；
②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。
（4）现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是 ，理由是
。
菌株 透明圈大小
平板Ⅰ 平板Ⅱ
A +++ ++
B ++ -
A
A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长
归纳总结：
微生物的鉴别方法
菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别
指示剂鉴别法 如以尿素为氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种微生物后,培养基变红,说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法 如利用刚果红染色法,根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物

展开更多......

收起↑