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(共51张PPT)
目标：1.概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求，进行酵母菌的纯培养。2.明微生物选择培养的原理。3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。微生物的选择培养和计数一、选择培养基
1.实验室中微生物的筛选原理：
人为提供______________ _的条件（包括_____、_____和_____等），同时_______________________
有利于目的菌生长
抑制或阻止其他微生物的生长
温度
营养
pH
结果：培养一定时间后，该菌数量上升
培养基中加氨苄青霉素
培养基应有菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰
加入青霉素：
不加氮源：
不加含碳有机物：
——分离出酵母菌、霉菌等真菌
(青霉素能杀死细菌、放线菌)
——分离出固氮菌
——分离出自养型微生物
补充资料1-几种选择培养基举例
选择培养的三种方法：
（1）利用添加某种化学物质进行选择培养
（2）利用营养缺陷进行选择培养
（3）利用改变培养条件进行选择培养
二、微生物的选择培养
2.实验的具体操作：
2）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌
1）制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基
1.稀释涂布平板法
是将菌液进行充分稀释，然后将菌液涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
6支试管，分别加入9ml无菌水
1ml
102
1ml
103
1ml
104
1ml
105
1ml
106
1ml
107
3）样品等比稀释：
稀释10倍菌液
101
土壤10g
1.将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中
滴
2.取少量稀释液（0.1ml ），滴加到培养基表面
灼
3.将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。
涂
4.用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀
浸
取样涂布平板：
放入37℃恒温箱中培养1～2d
5）培养与观察
稀释
103倍
稀释104倍
稀释
105倍
空白
对照
恒温培养箱
思考题
方法
纯化原理
接种工具
单菌落的获得
用途
接种效果图
相同点 通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散
将菌液进行一系列的等比稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落
接种环
涂布器
从最后划线的区域挑取
稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落
分离纯化菌种，获得单菌落
①分离纯化菌种，获得单菌落
②用于计数
①都能分离纯化菌种②都是在固体培养基上进行的
平板划线法
稀释涂布平板法
接种环和涂布器
稀释涂布法和平板划线
稀释涂布法和平板划线
三、微生物的数量测定：
阅读课本18页，完成以下问题：
1.常用微生物数量测定的方法有哪些？
2.活菌计数法常用的接种方式？原理？选择菌落数多少的平板计数？
结果统计的是活菌数还是死菌数？统计菌落数与实际值得关系？为什么？
3.显微镜直接计数法直接计数法的优点？材料用具？结果统计的是活菌数还是死菌数？
1.活菌计数法 (间接计数法)
2.显微镜直接计数法
三、微生物的数量测定：
稀释103倍
稀释104倍
稀释105倍
空白对照
稀释涂布平板法
计数原则:
（1）选择菌落数为_______的平板计数**；
（2）____稀释度下，应____对___个平板进行
重复计数，然后求出______；
结果分析:
（1）统计的菌落数往往比活菌的实际数目____；
原因*：___________________________________
___________________________________
（2）统计结果一般用_______而不是用活菌数来表示；
30-300
同一
至少
3
平均值
少
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
菌落数
显微镜直接计数
优点 ________
缺点：
（1）统计结果一般是__________________，不能区分死菌与活菌
快速直观
活菌数和死菌数的总和
（2）个体小的细菌在显微镜下难以观察
样品稀释涂布平板
微生物的培养与观察
土壤取样
制备培养基
菌落计数
设置重复
设置对照
每个稀释度至少涂布三个平板
*检测培养基是否污染
未接种的培养基
探究与实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
制备培养基 *以尿素为唯一氮源
培养基成分 KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
样品的稀释与涂布平板
思考题
每个稀释度至少涂几个平板？
整个实验还要设置2个平板，是哪两个？目的？
不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基；
以验证培养基中是否含有杂菌；
微生物的培养与观察
①培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。
*细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d
②观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
*防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
结果分析
现象 分析
未涂布培养基上无菌落生长
未涂布培养基上有菌落生长
牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目
培养基未被杂菌污染
培养基被杂菌污染
选择培养基具有选择作用
②样品稀释操作成功的标志是什么？
③得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？
在某一稀释倍数下得到2个或2个以上菌落数在30-300的平板
不一定，还需要进一步的鉴定
①说出以下现象对应的结果分析
思维导图
微生物的选择培养和计数
选择
原理
方法
活细胞计数法
计数
方法
显微镜直接计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
实验
课后练习
课本，P20，概念检测-2和拓展-2
典例讲解-1
下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是
A筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值
【答案】A
变式训练-1
物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_________。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_______。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明___________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明___________。
（1）W
（2）乙 乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W
（3）将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源
（4）①缓冲液 ②缓冲液不能降解W 酶E与天然酶降解W的能力相近
变式训练-2
回答下列与酵母菌有关的问题:
( 1 )分离培养酵母菌通常使用(填“牛肉膏蛋白胨”"MS"或“麦芽汁琼脂”)培养基, 该培养基应采用灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养- -段时间后会观察到菌落,菌落的含义是_
( 2 )酵母菌液体培养时,若通入氧气,可促进(填“菌体快速增殖".”乙醇产生”或"乳酸产生”);若进行厌氧培养,可促进___( 填“菌体快速增殖"、“乙醇产生"或“乳酸产生" b
( 3)制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因是_
【答案】麦芽汁琼脂 高压蒸汽 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 菌体快速增殖 乙醇产生 酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软
典例讲解-2
在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________ (填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬间消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是________。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过_____（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是________。
变式训练-1
将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：
（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制细菌的生长，加入了链霉素的培养基属于__________培养基。通常用_______________灭菌法对培养基进行灭菌。
（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有____________、____________（答出两点即可）。将微生物接种到培养基上，最常用的方法有________________、________________。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是____________，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是________________________________________。
（4）纯化的菌种可接种到试管的固体斜面培养基上在合适的温度下培养，当菌落长成后将试管放入_________℃的冰箱中临时保藏。若菌种需要长期保存，可以采用____________的方法在冷冻箱中保存。
【答案】选择高压蒸汽碳源无机盐平板划线法稀释涂布平板法碘液淀粉遇碘液呈现蓝色，产淀粉酶菌落周围淀粉被水解，形成透明圈4甘油管藏
变式训练-2
某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：
（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________________________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________________________（答出两点即可）。
（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择____________________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________。
（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2 HPO4，其作用有________________________（答出两点即可）。
【答案】脲酶 分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2来合成有机物 为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料 尿素 其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用 为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定
已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：
（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用______________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。
（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。从功能上划分该培养基属于_______培养基。
（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用_______________法进行计数。
（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________ ℃设计后续实验。
【答案】（1）苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）1分 萃取法2分
（2）油脂 选择性 （每空2分，共4分）
（3）血细胞计数板 稀释涂布平板（每空2分，共4分，其他合理答案也给分）
（4）45
知识总结
1.实验室微生物筛选的原理？
2.选择培养基的概念？
3.一些细菌能利用尿素的原因？尿素不能作为分解尿素的细菌的碳源的原因？
配制什么培养基将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？
4.培养基中KH2PO4和Na2HPO4作用？
5.微生物的数量测定的方法？
6.活菌计数法常用的接种方式？原理？选择菌落数多少的平板计数？
结果统计的是活菌数还是死菌数？为什么统计值比实际值小？
7.直接计数法的优点？材料用具？结果统计的是活菌数还是死菌数？
8.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数探究与实践：如何设置重复？
两种对照的目的分别是？如何操作？
基础知识梳理
1.培养基的概念？培养基的作用？根据物理状态分类？各类的作用？
2.培养基的一般成分？在此基础上还需要满足什么需求？
3.自养微生物、异养微生物的的碳源及能源分别是什么？
4.获得纯净的微生物培养物的关键是？无菌技术的目的？
5.什么是消毒、灭菌？常用的消毒和灭菌方法有哪些？操作对象分别是？
6.培养物、纯培养物的概念？纯培养步骤？
7.菌落、单菌落的概念？获得单菌落的常用方法？
8.倒平板的过程？冷凝的平板怎么放置？为什么？
9.平板划线法的概念及过程？第一灼烧接种环的目的？每次划线前？划线结束？接种环冷却的目的？
10. 第二次后的划线从上一次的哪里开始？为什么？
11.培养时怎样设置对照？目的？怎样放置平板？在什么设备里培养？标记的位置？
温故知新提问
思考
1.对照实验如何设计？
2.稀释涂布法和血细胞计数板的误差？
3.单菌落数目的可信区间（30-300）？
4.消毒和灭菌的区别？
5.选择培养基和鉴定培养基的区别？
6.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
7.稀释涂布法和平板划线的区别？
8.菌落过多怎么办？
9.选择培养基如何配置？
选择培养基配方的设计
1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？
在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，
只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖
脲酶
CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3
培养基一 牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基二 KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
1.从物理性质来讲，两者属于____培养基，判断依据是__ ________；
2.两种培养基共有的培养基成分有：_______________；
培养基一的主要碳源为_______，主要氮源为_______；
培养基二的碳源为_______，氮源为_______；
3.从用途上来讲，培养基二属于_____培养基，目的是为了获__ _____；
4.培养基二中KH2PO4和Na2HPO4作用 ；
固体
添加了凝固剂琼脂
选择
能分解尿素的微生物
碳源、氮源、无机盐、水
牛肉膏
蛋白胨
葡萄糖
尿素
除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同
讨论：2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？
提供无机盐
作为缓冲物质调节pH
培养基一 牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基二 KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
思考讨论
如何设计对照实验证明该选择培养基能筛选出分解尿素的细菌？
应该设置基础培养基（常用牛肉膏蛋白胨培养基）作为对照，若基础培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性；
培养基二 KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml

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