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(共23张PPT)
目标：1.概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求，进行酵母菌的纯培养。2.明微生物选择培养的原理。3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。微生物的基本培养技术①要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；
②要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。
培养微生物的要求
——培养基
——无菌技术
一、培养基的配制
划分标准 培养基种类 特点 用途
培养基中加入某种化学物 培养、分离出特定微生物
质,以抑制不需要微生物的 (如培养酵母菌和霉菌
用途 选择培养基 时,可在培养基中加入青素;
生长,促进所需要的微生物 培养金黄色葡萄
的生长 球菌时,可在培养基中
加入高浓度的食盐)
根据微生物的代谢特点,在 鉴别不同种类的微生物
,如可用伊红一美蓝培养
用途 鉴别培养基 培养基中加入某种指示剂 基鉴别饮用水或乳制品
中是否有大肠杆菌(若有 ,
或化学药品 菌落呈深紫色,并带有
金属光泽)
自养微生物
异养微生物
培养基的成分
基本成分
碳源
氮源
水
无机盐
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-
有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等
无机氮源：NH4＋、NO3-
有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
一、培养基的配制
培养基的成分
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000mL 水
1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
一、培养基的配制
在主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长的条件有：对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
例如， 培养乳酸杆菌需添加维生素；
培养霉菌需调至酸性；
培养细菌需调至中性或弱碱性；
培养厌氧微生物需提供无氧环境。
二、无菌技术
1.获得纯净的微生物培养物的关键是______________。
防止杂菌污染
2.无菌技术的目的:
①防止实验室的培养物被其他外来微生物污染
②有效避免操作者被微生物感染
消毒的方法：
1.煮沸消毒法:
100℃煮沸5-6min
2.巴氏消毒法：
70-75 ℃下煮30min或80 ℃ 下煮15min
3.化学药剂消毒法:
用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源
4.紫外线消毒
灭菌的方法：
1.灼烧灭菌
2.干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。
3.高压蒸汽灭菌：
100kPa、121 ℃下维持15-30min.
针对不耐高温的液体
接种室、超净工作台
培养皿.吸管等玻璃器皿耐高温、需保持干燥
接种环等金属工具
实验操作者的双手
培养基
家庭餐具等生活用品消毒
a.煮沸消毒法
b.巴氏消毒法
c.化学药剂
d.紫外线
e.灼烧灭菌
f.干热灭菌
g.高压蒸汽灭菌
b
d
e
c
a
g
f
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
日常生活用品
100 ℃煮沸5～6 min
巴氏消毒法
不耐高温的液体
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
化学药剂
生物活体、水源等
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线
紫外线照射30 min
灼烧灭菌
接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h
湿热灭菌
培养基、培养皿等,生产和实验室常用
高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min
消毒与灭菌
接种室、接种箱，超净工作台
三、微生物的纯培养
配制培养基、灭菌、接种、分离和培养
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
①配制培养基
②灭菌
③倒平板
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
1.制备培养基
培养基：用高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌
培养皿：在干热灭菌箱内干热灭菌
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用这个平板培养微生物。
防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
分散或稀释
生长繁殖
“平板划线法”实验操作
2.接种和分离酵母菌
划3个平板（重复实验）1个不接种（空白对照）
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
1
2
3
4
5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.
②划线首尾不能相接
③每次划线前接种环进行灭菌
④划线后,培养皿倒置培养
平板划线法注意事项:
（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
杀死接种环上原有微生物
灼烧时期 目的
取菌种前
每次划线前
接种结束后
问题探讨
⑵在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
⑶在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
问题探讨
课后练习
课本，P14，拓展-1和拓展-2
1.培养基的概念？培养基的作用？根据物理状态分类？各类的作用？
2.培养基的一般成分？在此基础上还需要满足什么需求？
3.自养微生物、异养微生物的的碳源及能源分别是什么？
4.获得纯净的微生物培养物的关键是？无菌技术的目的？
5.什么是消毒、灭菌？常用的消毒和灭菌方法有哪些？操作对象分别是？
6.培养物、纯培养物的概念？纯培养步骤？
7.菌落、单菌落的概念？获得单菌落的常用方法？
8.倒平板的过程？冷凝的平板怎么放置？为什么？
9.平板划线法的概念及过程？第一灼烧接种环的目的？每次划线前？划线结束？接种环冷却的目的？
10. 第二次后的划线从上一次的哪里开始？为什么？
11.培养时怎样设置对照？目的？怎样放置平板？在什么设备里培养？标记的位置？
基础知识梳理

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