资源简介

(共11张PPT)
项目四 蛋白质的性能与控制
任务一 牛乳中酪蛋白的分离
任务要求
１.掌握等电点法沉淀、 纯化蛋白质的操作技术。
２. 熟悉牛乳中酪蛋白的分离纯化。
知识储备
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白， 含量约为35ｇ／Ｌ。 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物， 等电点为4.7。 利用等电点时蛋白质溶解度最低的原理， 将牛乳的ｐＨ调至4.7时， 酪蛋白就沉淀出来。 用乙醇洗涤沉淀物， 除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
1.任务分组
学生依据任务工作要求和任务具体内容， 并结合自身兴趣爱好和对任务了解的基本情况自由组合， ２～３ 人为一组， 开展任务实施。
任务实施
２.材料准备
（１） 材料 鲜牛乳。
（２） 仪器 大容量离心机（50ｍＬ）、 离心管 （100ｍＬ）、 量筒 （50ｍＬ）、 恒温水浴锅、 抽滤装置、 精密 ｐＨ 试纸或酸度计、 电炉、 温度计、 烧杯 （250ｍＬ）、 电子天平。
（３） 试剂
①99.7％乙醚，100ｍＬ；
②无水乙醇，200ｍＬ；
③0.10ｍｏｌ ／ Ｌ ＮａＯＨ；
２.材料准备
④0.20ｍｏｌ ／ Ｌ ＣＨ３ＣＯＯＨ；
⑤0.20ｍｏｌ ／ Ｌ ｐＨ4.7的醋酸钠缓冲液，1000ｍＬ；
Ａ 液 （0.20ｍｏｌ／Ｌ的醋酸钠溶液）： 称取 ＮａＡｃ·３Ｈ２Ｏ 27.22ｇ 定容至1000ｍＬ。
Ｂ 液 （0.20ｍｏｌ／Ｌ ＣＨ３ＣＯＯＨ 溶液）： 称取优级纯醋酸 （ 含量大于99.8％）12.00ｇ 定容至 １０００ｍＬ。
取 Ａ 液590ｍＬ， Ｂ 液 ４１０ｍＬ， 混合即得 ｐＨ ４.７ 的醋酸－醋酸钠溶液缓冲液 １０００ｍＬ。
⑥９９.７％ 乙醚， １００ｍＬ。
3.实施步骤
原料→酪蛋白粗提→酪蛋白纯化→脱色→含量计算
4.实施要点
（１） 酪蛋白的粗提
①将 50ｍＬ 鲜牛乳至250ｍＬ 烧杯中， 在水浴中加热至40℃ ， 在搅拌下慢慢加入预热至40℃ 、 ｐＨ4.7的醋酸－醋酸钠缓冲液50ｍＬ， 用精密 ｐＨ 试纸或酸度计检查并用0.20ｍｏｌ ／ Ｌ醋酸溶液或0.10ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠溶液调整 ｐＨ 至 ４.７。
②将上述悬浮液静置冷却至室温。 悬浮液出现大量沉淀后， 转移至离心管中， 在3500ｒ／ ｍｉｎ 下离心 １０ｍｉｎ。 弃去上清液， 所得沉淀为酪蛋白的粗制品。
4.实施要点
（２） 酪蛋白的纯化
①用 ４０ｍＬ 蒸馏水洗涤、 搅起沉淀， 反复 ３ 次， 离心 １０ｍｉｎ （３０００ｒ／ ｍｉｎ）， 弃去上清液。
②在沉淀中加入 ３０ｍＬ ９５％乙醇， 搅拌沉淀至呈悬浊液， 全部转移至布氏漏斗中抽滤。 用乙醇－乙醚混合液洗涤沉淀两次。 最后用乙醚洗涤沉淀两次， 抽干。
③将沉淀摊开在表面皿上， 风干， 得酪蛋白纯品。
5.数据记录
思考题
１.提高酪蛋白得率有哪些措施？
２.用乙醇洗涤沉淀为何要充分搅起呈悬浊液状态？

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