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色谱分析基础知识
色谱法的创始人是俄国植物学家茨维特。
1931年德国库恩等人将茨维特的实验方法应用于叶红素和叶黄素的研究，被授予诺贝尔化学奖。20世纪30~40年代相继出现了薄层色谱法和纸色谱法。
1952年马丁和詹姆斯建立了以气体作为流动相的气相色谱法，奠定了现代色谱法的基础。1958年高莱开创了毛细管柱气相色谱法。至20世纪60年代末，气相色谱法达到鼎盛时期。
1.色谱法的产生与发展
色谱分析基础知识
20世纪60年代末出现了高效液相色谱法（HPLC），为难挥发、热不稳定的高分子试样的分析提供了有力手段。
20世纪80年代出现了超临界流体色谱法和毛细管电泳技术。
20世纪90年代，出现同时集合HPLC和毛细管电泳的优点的毛细管电色谱。
1.色谱法的产生与发展
色谱分析基础知识
（1）按流动相与固定相的物态分类　
气相色谱法 液相色谱法 超临界流体色谱法
（2）按操作形式分类　
柱色谱法 平面色谱法
（3）按色谱过程的分离机制分类
吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法
分子排阻色谱法
2.色谱法的分类
色谱分析基础知识
色谱法的各种分类方法并非是绝对的、孤立的，而是相互渗透、兼容的。
2.色谱法的分类
色谱分析基础知识
胡萝卜素
叶黄质
叶绿素b
叶绿素a
物质对光的选择性吸收
3.色谱法的基本原理
色谱分析基础知识
混合试样
差速迁移
分离
两相
分离系统
作用能力不同
累积放大
3.色谱法的基本原理
固定相
色谱柱
色谱
流动相
依据物质的物理或者物理化学性质不同而进行分离分析的方法。
色谱分析基础知识
3.色谱法的基本原理
混合试样
流动相
色谱柱
固定相
色谱分析基础知识
记录了各个组分流出色谱柱的情况，又叫色谱流出曲线。
4.色谱图及色谱常用术语
色谱图
混合物样品（A+B）→色谱柱中分离→检测器→记录下来。组分从色谱柱流出时，各个组分在检测器上所产生的信号随时间变化，所形成的曲线叫色谱图。
色谱分析基础知识
操作条件下，仅有流动相通过没有待测组分通过检测器所产生的信号曲线正常情况 基线是一条与横轴平行的平稳直线物质对光的选择性吸收基线4.色谱图及色谱常用术语色谱分析基础知识记录了各个组分流出色谱柱的情况，又叫色谱流出曲线。4.色谱图及色谱常用术语色谱流出曲线色谱分析基础知识异常情况：基线噪声 基线漂移
s
t
0
s
t
0
物质对光的选择性吸收
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
当试样组分进入检测器，仪器响应值偏离基线，信号强度随检测器中试样组分的浓度变化，直至组分全部离开检测器所绘制的曲线。
色谱流出曲线突起的部分
色谱峰
物质对光的选择性吸收
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
正常情况 左右对称正态分布曲线
异常情况 前延峰 拖尾峰
前延峰
拖尾峰
物质对光的选择性吸收
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
对称因子计算示意图
对称因子 衡量色谱峰对称性
用 fs 表示
（0.95-1.05）
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
峰高（定量依据） ：色谱峰最高点至基线的垂直距离
用h 表示
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
峰面积 （定量依据） ：组分的流出曲线与基线包围的面积，用 A 表示
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
标准偏差 0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半
半峰宽 峰高一半处的宽度
W1/2 = 2.355 　
峰宽 色谱峰两侧拐点上的切线与峰底相交两点间的距离
W = 4 W = 1.699W1/2
区域宽度
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
用时间表示保留值
保留时间(t R) 从进样到出现待测组分信号极大值所需要的时间
死时间（ t M ） 从进样开始到惰性组分出现峰极大值所需的时间
调整保留时间（ t R） 组分的保留时间与死时间之差　　　　　 t R = t R- t M
物质对光的选择性吸收
保留值
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
用体积表示保留值
保留体积(vR) 从进样到出现待测组分信号极大值所需要的流动相体积
死时间（vM） 从进样开始到惰性组分出现峰极大值所需的流动相体积
调整保留体积（v R） 组分的保留体积与死体积之差　　　　　 v 'R =vR-vM
物质对光的选择性吸收
保留值
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
相对保留值 一定实验条件下组分1与组分2的调整保留值之比
相对保留值只与色谱柱柱温和固定相性质有关
物质对光的选择性吸收
保留值
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
越大，分离效果越好； =1，不能分离
用作衡量固定相选择性指标
物质对光的选择性吸收
选择因子
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
两相邻组分色谱峰的保留时间之差与两组分色谱峰峰宽和的一半的比值，又称为分辨率
物质对光的选择性吸收
分离度
物质对光的选择性吸收
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
R = 0 两峰完全重合
R = 1 基本分离
R = 1. 5 完全分离
物质对光的选择性吸收
分离度
物质对光的选择性吸收
物质对光的选择性吸收
4.色谱图及色谱常用术语
色谱分析基础知识
小结（1）由色谱峰的数目，可判断试样中所含组分的最少个数。（2）根据色谱峰的保留值—进行定性分析。（3）根据色谱峰的h .A —进行定量分析。（4）根据色谱峰的间距及峰的宽度—可评价色谱的柱效及分离情况。色谱分析基础知识

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