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紫外可见
分光光度法
紫外可见
分光光度法
CONTENTS
目
录
1. 认识紫外可见分光光度法
2. 紫外可见分光光度法基本原理
3. 紫外可见分光光度计结构
4. 定量分析实例
紫外可见分光
光度计结构
知识目标
1. 掌握紫外-可见分光光度计的基本构造与作用。
2. 熟悉紫外可见分光光度计的类型。
3. 了解紫外可见分光光度计的维护和保养。
能力目标
1. 够按照紫外-可见分光光度计说明书或操作规程完成仪器的操作、维护与保养工作。
思政目标
1. 详述紫外-可见分光光度计中的关键部件，正视我国目前在技术层面上的差距，并让学生自己思考回答可能存在的突破口。
分光光度计的工作原理和测定样品含量的原理
分光光度计的基本构造
光源、单色器、吸收池、检测器和信号处理及显示器五部分组成。
分光光度计的工作原理和测定样品含量的原理
分光光度计的工作原理
随着色谱技术的发展，色谱对象已不再局限于有色物质，但色谱这一名词仍沿用下来。光源发出的复合光，经过单色器转变为单色光；待测的吸光物质溶液放在吸收池中，当强度为I0的单色光通过时，一部分光被吸收，光强发生变化，强度为It的透射光照射到检测器上，把接收到的光信号转换成电信号，而由电流检测计检测，或经A/D转换由计算机对采集的信号进行处理并显示。
分光光度计的工作原理和测定样品含量的原理
样品含量测定的原理
依据是光的吸收定律。在入射光波长一定和溶液厚度不变的情况下，溶液的吸光度与待测物质的浓度成正比，由此可由工作曲线法，确定被测物质含量。
紫外-可见分光光度计
在紫外及可见光区（200～760nm）测定溶液吸光度的分析仪器称为紫外-可见分光光度计。
仪器的基本构造与作用
辐射光源
辐射光源的作用是提供激发能。
钨灯和卤钨灯
使用的波长范围在320～2500nm。
氢灯和氘灯
可在160～375nm范围内产生连续光源。
氢灯和氘灯
提供足够强的连续光谱，稳定性良好、使用寿长命。
紫外-可见分光光度计
单色器
单色器的作用使光源发出的连续光变成所需波长的单色光
光栅单色器
棱镜单色器
分为棱镜和光栅。由入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦透镜和出射狭缝构成。
紫外-可见分光光度计
吸收池（比色皿）
吸收池是用来盛放被测试样。
石英吸收池和玻璃吸收池。
石英吸收池
紫外-可见光区
玻璃吸收池
可见光区
吸收池厚度在0.1～10cm之间，常用的吸收池厚度为1cm。
在分析测定中，吸收池要挑选配对使用。
紫外-可见分光光度计
吸收池（比色皿）
在放置吸收池时，应注意使其透光面垂直于光束方向。
A
使用吸收池时，应先用溶剂洗涤吸收池，然后再用被测试样溶液润洗3次，注入溶液的高度为吸收池的2/3～4/5处。
B
拿取吸收池时，应拿吸收池毛玻璃的两面。
C
紫外-可见分光光度计
检测器
检测器作用光信号转变成电信号。
光电池。
A
光电管或光电倍增管。
B
光导摄像管或光电二极管阵列作检测器，具有快速扫描功能。
C
紫外-可见分光光度计
信号处理及显示系统
作用是放大电信号，并以适当方式显示或记录下来。
检流计、数字显示仪、微型计算机等。
A
现在大多数的分光光度计配有微处理机，可对分光光度计进行操作控制和数据处理。
B
紫外-可见分光光度计
单光束分光光度计（a）
双光束紫外-可见分光光度计（b）
双波长紫外-可见分光光度计（c）
紫外-可见分光光度计的类型
紫外-可见分光光度计
仪器工作环境的要求
室内温度宜保持在16～28℃
相对湿度宜控制在45％～65％
仪器的维护和保养
工作电源 220土10％V
配备电源稳压器
不使用时不要开光源灯
防止色散元件受潮发霉
正确使用吸收池
仪器常开机去湿
小结
本节主要介绍紫外-可见分光光度计的基本构造与作用。这是药物分析最常用的仪器之一。

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