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紫外-可见分光光度法的定性分析
学习内容
Learning content
定性分析的理论依据
1
定性鉴别分析方法
2
纯度检查方法
3
定性的理论依据
不同的物质其吸收光谱及其特征值不同。
吸收光谱的特征值包括：
吸收光谱形状，吸收峰（谷）的数目，各吸收峰（谷）所在的波长、强度和对应的吸光系数等。
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
一、定性分析的理论依据
吸
光
度
波长λ/nm
A
B
不同物质的吸收光谱图
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
如图，物质A与物质B的吸收光谱及特征值不同，就属于不同的物质。
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
通过比较吸收光谱形状及其特征值可以进行：
杂质检查
定性鉴别
结构分析
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 波长λ/nm
定性分析的应用范围：
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
将待测试样与标准品配成浓度相同或相近的溶液。
在相同条件下分别测定试样与标准品的吸收光谱。
然后比对两吸收曲线是否一致。
1. 比吸收光谱曲线的一致性
1
2
3
二、定性分析的分法
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
1.测定吸收曲线
2.比对吸收光谱曲线
吸光度
1.00.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 700 波长/nm
样品
样品的吸收光谱图
【示例】维生素B2的鉴别
两吸收曲线基本一致，即可初步判断是同一物质。
3.判断
吸光度
1.00.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 700 波长/nm
标准品
维生素B2标准品的吸收光谱图
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
【示例】维生素B2的鉴别
吸光度
1.00.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 700 波长/nm
吸光度
1.00.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 700 波长/nm
样品
标准品
样品的吸收光谱图
（1）测定吸收曲线
（2）比对吸收光谱曲线
（3）判断
两吸收曲线基本一致，即可初步判断是同一物质。
维生素B2标准品与样品的吸收光谱比较图
维生素B2标准品的吸收光谱图
吸光度
1.00.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 700 波长/nm
标准品
吸光度
1.00.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300 400 500 600 700 波长/nm
样品
两吸收曲线基本一致，即可初步判断是同一物质。
样品的吸收曲线图
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
【示例】维生素B2的鉴别
样品
（1）测定吸收曲线
（2）比对吸收光谱曲线
（3）判断
维生素B2标准品与样品的吸收光谱比较图
维生素B2标准品的吸收光谱图
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
吸光度
波长λ/nm
λmax
将测得的样品λmax和 值与文献收载的规定值比较即可鉴别。
定性鉴别的主要特征数据包括：
最大吸收波长
最大吸收波长处的吸光系数
2. 对比吸收光谱特征数据的一致性
最小吸收波长
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
M=298.43
λmax=240±1nm
= 571
M=386.53
λmax=240±1nm
= 408
因此，对比吸收光谱特征数据时，必须同时比对最大吸收波长和最大吸收波长处的吸光系数是否一致。
黄体酮
炔诺酮
λmax相同，但 不同
不同的物质可能具有相同的λmax，但因分子量不同，则其λmax处的吸光系数必定不同，如黄体酮和炔诺酮的鉴别。
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
不同的物质可能具有相同的光谱特征数据，但因结构不同，吸收曲线必定不一样。
吸光度
B
220 260 300 340 波长λ（nm）
醋酸可的松
λmax=240nm ，
吸收光谱曲线形状存在明显差异
λmax=240nm，
220 260 300 340 波长λ（nm）
吸光度
醋酸氢化可的松
光谱特征数据几乎完全相同
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
如维生素B12的鉴别
《中国药典》(2015版)规定：
维生素B12的λmax =278nm、361nm和550nm，
且A361/A278=1.70～1.88；
A361/A550=3.15～3.45。
278.22nm
361.72nm
550.33nm
维生素B12的吸收光谱图
吸光度
300 400 500 600 波长（nm）
对于有多个吸收峰的化合物，比较各吸收峰处对应的吸光度（或吸光系数）比值可用于鉴别。
3. 对比吸度比值的一致性
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
甲氧苄啶标准品吸收光谱
吸光度
300 400 波长λ/nm
吸光度
300 400 波长λ/nm
药品甲氧苄啶吸收光谱
三、纯度检查
如，药品甲氧苄啶的纯度检查
药品与杂质只要存在紫外吸收的差异，药品中存在的杂质会使药品的吸收曲线变形，即可进行纯度或杂质检查。
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
1. 杂质判断
■ 若药品与杂质的吸收峰位不重叠，则药品中的杂质会使药品的吸收曲线变形。
如苯中杂质苯酚的检查：
苯在256nm处有强吸收，而苯酚在此处无吸收，却在328nm处有强吸收。故从光谱曲线中可以看出苯中是否存在杂质苯酚。
样品与标准品的吸收光谱曲线
吸光度
样品苯的吸收光谱
苯标准品吸收光谱
300 400 波长λ/nm
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
■ 若药品与杂质的吸收峰位重叠，杂质的存在会使吸收峰处的吸光系数改变。
峰位处的吸光系数值变小
图1. 杂质吸收强于化合物
吸光系数
300 400 波长λ/nm
药品图谱
标准品图谱
图2. 杂质吸收弱于化合物
300 400 波长λ/nm
吸光系数
药品图谱
标准品图谱
峰位处的吸光系数值变大
《中国药典》（2015年版）规定：取每1ml含2mg的供试品溶液，于1cm吸收池在310nm处测定吸光度不得超过0.05。
如：肾上腺素中杂质肾上腺酮的检查
吸光度
300 400 波长λ/nm
肾上腺素
肾上腺素酮
肾上腺素与肾上腺素酮的吸收光谱
药物中杂质存在的最大允许量即杂质限量。可利用杂质的紫外吸收性质进行杂质限量检查。
特征：310nm处杂质肾上腺酮有最大吸收，而药物肾上腺素几乎没有吸收。
紫外—可见分光光度法的定性分析方法
2. 杂质限量检查
思考
紫外-可见吸收光谱的特征值包括哪些参数？在定性分析中有何应用？
谢谢聆听！

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