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标准曲线法
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学习内容
xuexineirong
定量分析的理论依据
标准曲线法
标准曲线法
在入射光的波长、强度、溶液的温度等不变的情况下，溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比，即：
一、定量分析的理论依据
● 理论依据：朗伯-比尔定律
A = K c L
A = K c
如果测定时进一步保持溶液的厚度L不变，则待测溶液的吸光度A与浓度C呈正比例关系，即：
吸光度
A
浓度c
A-c 关系曲线
K为吸光系数（是常数）
标准曲线法
二、定量分析方法
（一）单组分定量分析的条件
单组分进行定量分析
多组分进行定量分析
单组分样品的定量分析
UV法
标准曲线法
只测定试样中的一种成分。
测量波长下，试样中其他组分对被测组分不干扰。
系列标
准溶液
标准溶液
的浓度
C0(空白)
0
1
C1
2
C2
3
C3
4
C4
5
C5
编号
标准曲线法
（二）单组分样品定量分析的方法----
标准曲线法
(1)以待测组分的纯品配制系列浓度的标准溶液（包括不含被测组分的空白试液）。
标准溶液
的浓度
标准溶液
吸光度
C0(空白)
A0 (空白)
C1
A1
C2
A2
C3
A3
C4
A4
C5
A5
（2）以不含被测组分的空白试液为参比，测定各标准溶液的吸光度。
标准曲线法
吸光度
A5
A4
A3
A2
A1
A 0
c0 c1 c2 c3 c4 c5 浓度
·
·
·
·
·
·
标准溶液的A--C关系曲线
回归方程: A=kc+b
（3）绘制吸光度-浓度关系曲线，拟合回归方程。
标准曲线法
（4）在相同条件下测定试样溶液的吸光度Ax，将测得的吸光度Ax代入到回归方程，即可求出待测组分的浓度。
吸光度
A5
A4
A3
A2
A1
A 0
c0 c1 c2 c3 c4 c5 浓度
·
·
·
·
·
·
标准溶液的A--C关系曲线
回归方程: A=kc+b
标准曲线法
编号 1 2 3 4 5 6 7
浓度c（mg/25ml） 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 Cx
吸光度（A） 0.000 0.240 0.491 0.712 0.950 1.156 0.845
【应用示例】维生素B12 的含量测定
取标准溶液和样品溶液盛于1cm吸收池中，在361nm波长处测定吸光度，结果见下表：
标准曲线法
精密取0.200mg/ml的VB12标准液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到1-6号系列标准溶液。
另取维生素B12 供试品3.0mg置于25ml量瓶中，同法稀释至刻度得到7号待测样品液。
②进行线性拟合，得到回归方程：
A=0.0105+1.162C（r=0.9996）
维生素B12的A-c工作曲线
①以测得的标准溶液的吸光度与浓度绘制A-C工作曲线（见下图）。
C = 0.718mg/25ml
④计算维生素B12的百分含量：
③将测得的样品溶液的吸光度值代入回归方程，计算样品溶液维生素B12 的浓度：
标准曲线法
解：
谢谢聆听！

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