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分光光度法
CONTENTS
目 录
基本部件
吸光度的测量原理
01
02
分光光度计的类型
03
01
基本部件
一般由光源、单色器（分光系统）、吸收池、检测系统和信号显示系统等五部分组成。
（一）光源
常用的光源为6-12伏低压钨丝灯，电源由温器供给，为了保持光源强度的稳定，以获得准确的测定果，电压必须稳定。
（二）单色器（分光系统）
单色器的作用从光源发出的复合光中分出所需要的单色光。
单色器通常由由入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦镜和出射缝组成。
光源
单色器
吸收池
检测系统
信号显示系统
（三）吸收池（比色皿）
比色皿是用透明无色的光学玻璃制作的。大多数比色皿为长方形，也有圆柱形的。一般厚度为0.5、1、2和3厘米。
（四）检测系统(又叫光电转化器)
在光度计中，常用的是硒光电池。晒光电池和眼睛相似，对于各种不同波长的光线，灵敏度是不同的。对于波长为500-600nm的光线最灵敏。而对紫外线，红外线则不能应用。
光电管和光电倍增管用于较精密的分光光度计中。具有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。
（五）信号显示系统
早期使用的是检流计、微安表、电位计、数字电压表、自动记录仪等。
现代的分光光度计广泛采用数字电压表、函数记录仪、示波器及数据处理台等。
测量光电流的检流计常用悬镜式检流计(也称作直流复射式检流计)，其灵敏度可达10-9安培／格。为了保护检统计，使用中要防止震动或大电流通过。检流计标尺上有两种刻度，等刻度的是表示百分透光率(T％)，对数刻度表示吸光度(A)。
根据透光率T，如果把入射光强度IO当作IO光强单位，透过光强度当作100光强单位中的一部分，这一数值为百分透光度，亦称为百分透光率。
分光光度计的主要部件
光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm)
紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)
单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。
棱镜:玻璃350～3200nm, 石英185～4000nm
光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便
常用光源
光源 波长范围(nm) 适用于
氢灯 185~375 紫外
氘灯 185~400 紫外
钨灯 320~2500 可见，近红外
卤钨灯 250~2000 紫外，可见，近红外
氙灯 180~1000 紫外、可见（荧光）
能斯特灯 1000~3500 红外
空心阴极灯 特有 原子光谱
激光光源 特有 各种谱学手段
吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。
可见光区：光学玻璃池
紫外区：石英池
检测器：利用光电效应，将光能转换成
电流讯号。
光电池，光电管，光电倍增管
指示器：
低档仪器：刻度显示
中高档仪器：数字显示，自动扫描记录
棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同
单色器
入射狭缝
准直透镜
棱镜
聚焦透镜
出射狭缝
白光
红
紫
λ1
λ2
800
600
500
400
光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。
M1
M2
出射狭缝
光屏
透镜
平面透射光栅
光栅衍射示意图
原理：
利用光通过光栅时
发生衍射和干涉现象而分光.
检测器
Se
Au，Ag
半导体
h
硒光电池
Ag、Au
光电管
红敏管 625-1000 nm
蓝敏管 200-625 nm
Ni环（片）
碱金属
光敏阴极
h
02
吸光度的测量原理
分光光度计实际上测得的是光电流或电压，通过转换器将测得的电流或电压转换为对应的吸光度A。测定时，只要将待测物质推入光路，即可直接读出吸光度值。
测定步骤：
1．调节检测器零点，即仪器的机械零点。
2．应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点。
3. 待测组分吸光度的测定。
02
分光光度计的类型
可见分光光度计、紫外-可见分光光度计和红外分光光度计。
721、722、751型。
751型分光光度计是一种波长范围较宽(200-1000nm)、精密度较高的分光光度计。由光源(钨丝灯或氢灯)发出的光线由反射镜反射，使光线经狭缝的下半部，经准光镜进入单色器棱镜色散底，由准光镜将光聚焦于狭缝上半部而射出，经液槽照射于光电管上。由此可见，仪器用同一狭缝作入光和出光狭缝，它们始终具有相同的宽度。
棱镜和透镜均由石英材料作成，反光镜和准光镜表面镀铝。所以全部系统保证紫外光谱通过。波长200-320nm范围用氢灯作光源，波长320-1000nm范围用钨丝灯作光源波长200-625nm用蓝敏光电管(GD-5)测量进射光强度，波长625-1000nm用红放光电管(GD-6)测量透射光强度。吸光度和透光度刻在读数电位差计转盘上，而电流计起示零作用。

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