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(共17张PPT)
动物细胞融合技术与单克隆抗体
细胞工程
回顾植物体细胞杂交技术
运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同种植之间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。
01
动物细胞融合技术
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞就有原来两个细胞的遗传遗传信息。
细胞质膜有一定的流动性
1.概念
2.原理
01
动物细胞融合技术
方法
物理方法：电融合法、离心法
化学方法：聚乙二醇（PEG）法
与植物原生质体融合的基本原理相同
生物方法：灭活病毒诱导法
动物细胞融合特有的诱导方法
病毒不灭活可以吗？为什么？
01
动物细胞融合技术
过程
动物细胞融合技术
动物细胞培养
细胞质膜有一定的流动性
原理
细胞增殖
细胞融合完成的标志：细胞核融合
杂交细胞
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞融合前的处理方法
诱导细胞融合的方法
细胞融合成功的标志
主要用途
意义
细胞膜具有一定的流动性
植物细胞的全能性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞
电融合法、离心法；
PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法
电融合法、离心法
PEG融合法
灭活病毒诱导法
再生出细胞壁
细胞核的融合
获得完整的杂种植株
主要用于制造单克隆抗体
打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种
突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能
细胞膜具有一定的流动性
01
动物细胞融合技术
02
单克隆抗体制备
抗体由什么细胞产生？
抗体的化学本质是什么？
抗体与抗原作用的特点？
抗体主要分布在哪里？
02
传统抗体的生产方法
产量低、纯度低、特异性差
缺陷？
大量单一抗体
克隆单一的浆细胞
动物会接触多种天然抗原，体内相应产生的特异性抗体种类可以达到百万种以上，但每一个浆细胞只分泌一种特异性抗体。
单克隆抗体制备
反复注射到小鼠体内
获得多种浆细胞
某种抗原
分离出多种抗体
改进？
02
一个浆细胞
浆细胞群
抗体
克隆
产生
×
浆细胞不具有无限增殖的能力
单 克隆 抗体
克隆：从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体，在动物细胞水平指动物细胞培养。
如何解决？
单克隆抗体制备
02
设计方案
浆细胞
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
单克隆抗体
英国米尔斯坦 德国科勒
动物细胞融合
既能迅速大量增殖，又能产生抗体
单克隆抗体制备
动物细胞培养
用抗原注射小鼠
从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞培养
浆细胞
骨髓瘤细胞
小鼠的脾脏中获取
杂交瘤细胞
融合
筛选1
诱导融合后，培养液中存在哪几种细胞？
未融合的B淋巴细胞
未融合的骨髓瘤细胞
B—B 杂交细胞
瘤—瘤 杂交细胞
B—瘤 杂交瘤细胞
足够数量的产特定抗体的杂交瘤细胞
筛选2
继续培养
单克隆抗体
体外培养
注射到小鼠腹腔中
02
单克隆抗体制备
02
筛选1：
置于HAT 培养基上培养
1.该培养基从功能分类上属于什么培养基？
2.能在其中存活并增殖的细胞是？
DNA复制中所需的核苷酸有两个合成途径：全合成途径和补救合成途径。正常细胞内两种途径都具备。
氨基喋呤(A)可以抑制全合成途径；
补救合成途径需两种酶：胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(HPRT)，其次还需要次黄嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)作为原料。正常细胞有这两种酶，而用于细胞融合的骨髓瘤细胞有遗传缺陷，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷(TK－)或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT－)缺陷。
获得杂交瘤细胞
单克隆抗体制备
选择
02
克隆化培养与抗体检测（筛选2）：
筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞
将杂交瘤细胞进行稀释，每个培养孔只有一个杂交瘤细胞，这样每个孔培养得到的抗体就是单抗。
培养一段时间
取上清进行抗体检测
继续培养
足够数量的产特定抗体的杂交瘤细胞
体外培养
（从细胞培养液中获取）
注射到小鼠腹腔内
（从小鼠腹水中获取）
单克隆抗体制备
多次筛选
细胞培养板
检测用的抗原？
抗体检测检测原理
抗原和抗体能够特异性结合
02
单克隆抗体制备
项目 腹腔培养 体外培养
优点
缺点
易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低
规模小，产量少
可大规模培养，大量生产
需要人为控制培养条件
成本相对较高
单克隆抗体特点？
特异性强
灵敏度高
可大量制备
03
单克隆抗体的应用
用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”。
资料:使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞，但在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害。抗体-药物偶联物(ADC)，将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。
1.诊断试剂（最广泛的用途）
2.运载药物
3.作为药物治疗疾病
4.导向手术
动物细胞融合
动物细胞培养
给小鼠注射特定的抗原蛋白
浆细胞（免疫）
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
单克隆抗体
能分泌所需抗体
的杂交瘤细胞
筛选1：选择培养基
筛选2：抗原-抗体杂交法
诱导融合
克隆化培养与抗体检验
体外培养或小鼠腹腔内增殖
特异性强
灵敏度高
可大量制备
既能大量繁殖又能产生专一抗体
注射抗原的目的？
诱导融合的方法？
两次筛选的目的？
大量增殖细胞获得单抗的方法？
杂交瘤细胞的特点？
单克隆抗体制备包括哪两个阶段？
原理？
单克隆抗体的优点？
03
单克隆抗体的应用
获得能产生相应抗体的浆细胞
1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述,错误的是( )
A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性
B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合
C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞
D.前者主要是为了获得细胞产品,后者主要是为了获得杂种植株
C
2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原,制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是( )
A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒
B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体
C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合,经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞
D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内,从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体
A

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