资源简介

(共21张PPT)
细菌菌落总数的测定
能力目标
生活饮用水水质检测
细菌菌落总数的测定
任务9
知识目标
素质目标
（1）细菌总数、菌落；（2）细菌总数与水质的关系；（3）水中细菌总数的测定原理、平板菌落计数法。
教学目标
（1）水样采集；（2）培养基的配制和灭菌技术，无菌操作，细菌的接种；（3）细菌的培养、菌落的观察、计数
1）整洁、有序、规范；（2）多实践、巧动手，严格执行无菌操作；（3）培养实事求是、严谨认真的科学态度；善于观察、分析问题
教学内容
细菌菌落总数测定的原理
2
平板菌落计数法
3
注意事项与思考题
4
细菌及菌落总数
1
细菌及菌落总数
1
水中细菌数量的多少是衡量水质的重要指标之一，细菌数量的变化可以间接地反应水体污染程度。
1.1 水中的细菌
霍乱弧菌(×2000)
水中细菌总数反映水体被有机物污染的程度。细菌数量越多，则水中有机质含量越高，水体污染越严重。
细菌的数量和大肠菌群数是生活饮用水监测的重要生物指标。
菌落(colony)：在固体培养基上，一个母细菌不断繁殖，形成一堆肉眼可见、有一定形态构造特征的细菌集合。
1.2 菌落总数
单个细菌难以直接计数，但细菌在固体培养基上生长，形成具有各种颜色和不同外观的菌落，却易观察，易计数。
在水质卫生学检验中，细菌总数是指1mL水样在牛肉膏蛋白胨培养基中经37℃、24h培养后，所生长出的细菌菌落总数。
教学内容
细菌菌落总数测定原理
2
平板菌落计数法
3
注意事项与思考题
4
细菌及菌落总数
1
细菌菌落总数测定原理
2
细菌种类多，其生理特性也各不同。实际测定中，通常选用一种适合大多数细菌生长的培养基进行培养，以生长的菌落总数表示水体受有机物污染的程度。
将1mL水样接种在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，经37℃、24 h培养，计数所生长出的菌落总数。
2.1 水中细菌菌落总数的测定原理
根据《生活饮用水卫生标准（GB5749-2006）》规定，1mL自来水中细菌总数不得超过100个（≤100 CFU/mL）。
细菌的间接计数——平板菌落计数法；
一般用1mL水样中的菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示水样中细菌的数量。 （单位：CFU/ml）
2.2 细菌菌落总数的测定方法
教学内容
细菌菌落总数测定原理
2
细菌菌落总数的测定
3
注意事项与思考题
4
细菌及菌落总数
1
平板菌落计数法
3
3.1 材料和仪器准备
（1）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
（2）试剂：无菌水
（3）器皿：三角瓶、带塞玻璃瓶、培养皿、移液管，试管等
称量
溶化
调pH
分装
包扎
灭菌
1）自来水水样：先将水龙头用火焰烧灼3min灭菌，放掉管中积水5min，再用无菌容器接水样后，立刻送检。
2）地表水水样：将无菌的具塞玻璃瓶瓶口向下，浸入距水面10～15cm深处，翻转瓶子，拔掉玻璃塞，水样流入瓶中后，将瓶塞塞好，再从水中取出后，立刻送检。
3.2 水样的采集
3.3 生活饮用水细菌菌落总数的测定
冷却至50℃的培养基
37℃、24h
各取1mL
水样
水样
12～15ml
冷却 倒置
计数
3.4 河水、池水等的菌落总数的测定
1 ml
10-2
10-3
1 ml
10-1
水样
1 ml
9 ml
无菌水
9 ml
无菌水
9 ml
无菌水
1. 水样稀释
稀释倍数视水污染程度而定，选择在平板上能长出30～300个菌落的稀释倍数为宜。
冷却至50℃的培养基
各取1mL
水样
12～15ml
2. 滴加稀释水样
各取1mL
水样
各取1mL
水样
1 ml
10-3
1 ml
10-1
10-2
3.4 河水、池水等的菌落总数的测定
倒置于培养箱中，37℃培养24h。
10-1
10-2
10-3
用菌落计数器计数
3.5 计数方法及结果分析
细菌菌落总数通常是取同一浓度的平行试验的平均值，再乘以稀释倍数，得到1 mL水样中细菌菌落总数。
稀释倍数水样 10-1 10-2 10-3
平板1
平板2
平板3
菌落总数（CFU/ml）
主要内容
生活饮用水微生物标准
2
平板菌落计数法
3
细菌总数及菌落
1
注意事项及思考题
4
4.1 注意事项
各稀释度菌液移入培养皿时，要对号入座，切莫混淆；
每支移液管只能接触同一种浓度的菌液；
菌液加入培养皿后要尽快倒入培养液，并立即摇匀。
4.2 思考题
要获得本试验成功，那几步最为关键？为什么？
平板菌落计数法的优缺点是什么？
仔细观察你的平板，长在平板表面和内层的菌落有什么不同？

展开更多......

收起↑