资源简介

(共60张PPT)
高等教育出版社
农业生物技术
项目5 植物脱毒技术
项目目录
项目导入
任务5.1 植物脱毒苗的培育
任务5.2 脱毒苗的病毒检测
任务5.3 脱毒苗的繁殖和保存
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项目导入
某果农最近发现果树病害越来越严重，他尝试喷洒多种药物，但发现无任何效果，且一株发病，导致整个果园的其他植株也染病。经过咨询，他了解到果树感染了病毒病，万分着急的他找到你，希望你能够帮他解决这个问题。
任务5.1 植物脱毒苗的培育
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
1.了解脱毒苗的概念及意义。
2.了解脱毒的原理。
3.掌握茎尖脱毒技术。
4.了解热处理脱毒技术。
1.能使用茎尖脱毒技术对常见植物病毒病进行脱毒。
2.具备获取教材外知识的能力。
任务目标
一、植物脱毒的意义
二、植物脱毒的方法
任务准备
一、植物脱毒的意义
植物病毒病是由植物病毒侵染引起的植物病害，植物病毒感染植物后，会打乱植物细胞的正常代谢活动，使植物的生长和发育遭到破坏，从而导致植物生活力降低、抗逆性减弱、产量和品质下降。
菊花花叶病
柑橘黄龙病
二、植物脱毒的方法
（一）热处理脱毒
1.原理
利用病毒耐热性差的特点，将植物组织置于高于正常温度的环境中，组织内部的病毒受热以后部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。
二、植物脱毒的方法
（一）热处理脱毒
2.方法
温汤浸渍处理
热空气处理
二、植物脱毒的方法
（一）热处理脱毒
3.优点与局限性
优点：对设备要求不高，技术简单，短时间可除去病毒。
局限性：热处理不能脱除所有病毒。
二、植物脱毒的方法
（二）茎尖培养脱毒
1.原理
病毒在感染植株上的分布是不均匀的，即老叶片及成熟的组织和器官中病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点（约0.1～1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。
二、植物脱毒的方法
（二）茎尖培养脱毒
2.过程
二、植物脱毒的方法
（二）茎尖培养脱毒
3.影响茎尖培养的因素
茎尖大小
培养条件
外植体的生理状态
二、植物脱毒的方法
（三）其他脱毒方法
愈伤组织培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒、珠心胚培养脱毒、花药培养脱毒、抗病毒药剂处理脱毒等。
马铃薯茎尖剥离与培养技能实训
一、目的与要求
二、仪器用具与试剂
三、方法与步骤
四、评价与考核
任务实施
掌握马铃薯茎尖剥离的方法，掌握茎尖诱导培养的方法。
一、目的与要求
。
1、仪器用具
2、试剂
3、植物材料
二、仪器用具与试剂
。
1、材料的选择和预处理
选择具有原品种典型特征、病毒危害较轻的健壮植株，采集外植体。根据需要将植株盆栽后进行热处理（这样可以切取较大的茎尖培养）。
三、方法与步骤
。
2、外植体的表面消毒
选取1.5～2cm的顶芽或侧芽为外植体，先用自来水冲洗半小时，用75%的酒精消毒30s，再用2%次氯酸钠溶液处理15min，取出后用无菌水清洗3次，用无菌滤纸吸去多余水分备用。
三、方法与步骤
3、茎尖剥离
在超净工作台上，用解剖针轻轻剥掉幼叶和叶原基，用解剖刀将微茎尖切下来，然后接到培养基中。
三、方法与步骤
4、茎尖培养
用小刀片切下茎尖放入培养基。培养条件为25℃，光照16h，光照强度为2000lx。
三、方法与步骤
马铃薯茎尖剥离与培养技能实训评价与考核标准参照表5-2执行。
四、评价与考核
1.如何进行马铃薯茎段的消毒？
2.简述马铃薯茎尖剥离的具体操作流程。
任务反思
任务5.2 脱毒苗的病毒检测
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
1.了解病毒的指示植物检测法。
2.了解病毒的血清学检测法。
3.了解病毒的电子显微镜检测法。
1.能利用指示植物进行病毒的检测。
2.能利用电子显微镜检测法进行病毒检测。
任务目标
一、直观检测法
二、指示植物检测法
三、血清学检测法
四、电子显微镜检测法
五、分子生物学检测法
任务准备
一、直观检测法
对于非潜隐性病毒，可以直接观察植株茎叶有无这一病毒可见的症状特征，这是一种最简便的方法，然而对于潜隐性病毒就需要更敏感的测定方法。
二、指示植物检测法
（一）检测方法
汁液涂抹法
嫁接法
汁液涂抹法的操作步骤
二、指示植物检测法
（二）对指示植物的要求
应根据不同的病毒选择适合的指示植物；所选指示植物一年四季都容易栽培；能够在较长时期内保持对病毒的敏感性；容易接种；较广的范围内具有同样的反映。
二、指示植物检测法
（三）指示植物检测法的优缺点
优点：条件简单，操作方便，是一种经济有效的检测方法，所以大多数植物检测用指示植物检测法。
缺点：不能测出病毒总的核蛋白浓度，而只能测出病毒的相对感染力。
三、血清学检测法
（一）检测方法
抗原的制备：病毒的接种繁殖→病叶的研磨→病毒的提纯。
抗血清的制备：动物的选择和饲养→抗原的注射→抗血清的采集（采血）→抗血清的分离→抗血清的保藏。
抗血清检测（免疫反应）：有叶绿体凝聚法、块茎沉淀法、环形接口法、酶联免疫法等方法。
三、血清学检测法
（二）抗血清检测法的优缺点
优点：特异性强，灵敏度高；操作简便、安全、快速；无需特殊仪器设备，结果容易判断；可同时检测大量的样品。
缺点：抗血清来源困难，成本高，常规检测应用较少。
四、电子显微镜检测法
病毒颗粒一般小于0.1um的微粒，人的眼睛观察不到，光学显微镜仅观察200nm的微粒，而电子显微镜则将分辨能力增大至0.5nm。
五、分子生物学检测法
核酸杂交技术、聚合酶链式反应、双链RNA技术、环介导等温扩增技术、基因芯片技术。
香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)的检测
一、目的与要求
二、仪器用具与试剂
三、方法与步骤
四、评价与考核
任务实施
了解香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)的检测方法。
一、目的与要求
。
1、仪器用具
2、试剂及引物
3、植物材料
二、仪器用具与试剂
。
1、检测样品选取
取香蕉组培厂的香蕉分化芽，CMV的阳性对照分别是受CMV侵染的心叶烟和香蕉，阴性对照是健康香蕉苗。
三、方法与步骤
。
2、将香蕉分化芽的嫩叶取下0.2g，加2mL碳酸缓冲液（pH9.6）和10g/L的铜试剂磨碎，取100μL加到酶标孔中，同时加入阳性、阴性、空白对照，各重复2次，于4℃冰箱中保湿过夜。
3、用PBST洗板3-5次，孵育4h，洗板；加酶标抗体，孵育4 h；洗板，加入底物溶液，避光显色30 min，于酶标仪上490nm 处测定吸光值（D490 nm）。
三、方法与步骤
香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒的检测评价与考核标准参照表5-3执行。
四、评价与考核
1.简述香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)的检测流程。
2.简述几种病毒检测方法的优缺点。
任务反思
任务5.3 脱毒苗的繁殖和保存
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
了解脱毒苗繁殖和保存的一般方法。
能够进行脱毒苗的组培快繁。
任务目标
一、脱毒苗的繁殖
二、脱毒苗的保存
三、脱毒苗的利用与效果
任务准备
一、脱毒苗的繁殖
脱毒苗的培育是很不容易的，因此一旦培育获得脱毒苗植株，就应尽快繁殖扩大以应用于生产。
二、脱毒苗的保存
（一）隔离保存
（二）试管保存
三、脱毒苗的利用与效果
在应用脱毒苗时，建立无毒原原种、原种繁育圃，经常抽查病毒的感染情况，随时脱毒复壮，及时向生产基地供应无毒种苗。
脱毒苗表现出明显的效果，如草毒可增产20～50％，植株结果多，单果重增加，上等果比例提高。
沙姜脱毒苗的组培快繁技能实训
一、目的与要求
二、仪器用具与试剂
三、方法与步骤
四、评价与考核
任务实施
掌握沙姜脱毒苗的组培快繁技术。
一、目的与要求
。
1、仪器用具
2、试剂
3、植物材料
二、仪器用具与试剂
。
1、试验材料
选取经过鉴定无病毒的植株作为试验材料。
三、方法与步骤
。
2、脱毒苗的继代培养
将诱导出来的芽切成段，接种到增殖培养基上进行增殖扩繁。
三、方法与步骤
。
3、脱毒苗的生根培养
在超净工作台上切取继代培养基中的增殖芽，接种至生根培养基中，诱导脱毒苗生根。
三、方法与步骤
。
4、脱毒苗的驯化与移栽
将组培苗移到温室进行炼苗，期间逐步打开瓶盖，炼苗7d后，将组培苗小心地从瓶中取出，洗净附着在苗根部的培养基，然后移植到消毒好的基质中。
三、方法与步骤
。
沙姜脱毒苗的组培快繁技能实训评价与考核标准参照表5-4执行。
四、评价与考核
1.经过病毒检测的无病毒苗，还可能重新感染病毒，因此在繁殖过程中应注意什么？
2.简述沙姜脱毒苗的快繁流程。
任务反思
谢谢聆听！

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