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(共78张PPT)
农业生物技术
项目6 代表性植物组织培养技术
项目目录
项目导入
任务6.1 蝴蝶兰的组织培养技术
任务6.2 马铃薯的脱毒与快繁技术
任务6.3 菠萝的组织培养技术
任务6.4 美国红栌的组织培养技术
项目目录
项目导入
植物组织培养研究领域的形成，不仅丰富了生物科学的基础理论，还表现出了巨大的实际应用价值，广泛运用在植物组培快繁和脱毒苗培育等方面，在观赏花卉、园林树木、果树、蔬菜及药用植物等生产上发挥了极大的作用，产生了良好的经济效益。目前市场上利用组培技术培养的植物有哪些呢？
任务6.1 蝴蝶兰的组织培养技术
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
1.掌握蝴蝶兰接种和培养的特点。
2.掌握蝴蝶兰的组培快繁技术。
1.能对蝴蝶兰的花梗腋芽和花梗节间进行接种和培养。
2.能独立地进行蝴蝶兰的组织培养。
任务目标
一、外植体的选择
二、外植体的处理、接种与初代培养
三、增殖与继代培养
四、壮苗与生根培养
五、驯化与移栽
任务准备
一、外植体的选择
蝴蝶兰用花梗腋芽或花梗节间作外植体，容易诱导，且外植体表面灭菌成功率高，是最合适的外植体取样部位。
二、外植体的处理、接种与初代培养
（一）花梗腋芽的培养
（二）花梗节间的培养
三、增殖与继代培养
原球茎的增殖培养基以MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.1mg/L的增殖效果最好。
花梗腋芽诱导出丛生芽后，接种于继代培养基1/3MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1～10mg/L（pH5.6左右），培养温度26±2℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d。
四、壮苗与生根培养
壮苗培养基：MS(KC)+NAA 0.1mg/L+10%香蕉汁。
当小苗高达3～4cm时，转接到1/2MS+IBA 0.5mg/L的培养基上进行生根培养，约3个月转移一次新鲜的培养基，生根率可达100%。
五、驯化与移栽
先将组培苗带瓶移出培养室，放置于温室中炼苗，15d后打开瓶盖，每天早、中、晚各喷水一次，保证足够的湿度。
用镊子将小苗轻轻夹出培养瓶，洗净根部培养基。
以水草包裹蝴蝶兰根部，将其定植于穴盘中。
蝴蝶兰无菌苗培养技能实训
一、目的与要求
二、器具与试剂、材料
三、方法与步骤
四、观察结果与分析
五、评价与考核
任务实施
通过学习蝴蝶兰无菌苗培养技术，掌握类似外植体的消毒与诱导培养技术。
一、目的与要求
。
1、器具
2、试剂
3、材料
二、仪器用具与试剂
。
1、材料准备
选取优质蝴蝶兰的花梗作为外植体进行组织培养。
三、方法与步骤
。
2、培养基的配制与灭菌
初代培养基：MS+6-BA3mg/L+NAA2.5mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂，pH 5.6。
三、方法与步骤
3、外植体的灭菌与接种
（1）将花梗剪下，用解剖刀切成2-4cm的切段，每段至少留取一个花梗腋芽，用自来水清洗干净。
（2）酒精浸泡8秒后，放入0.1%升汞溶液中消毒13min，取出后再次放入无菌水清冲洗3次，最后取出放入经消毒灭菌好的培养皿上，用解剖刀将顶端和底部接触到消毒液的伤口切掉，立即放进花梗苗诱导培养基中。
三、方法与步骤
4、培养
接种结束后，把瓶苗放入培养室中培养，培养温度为 25±2℃、光照强度1500 Lx、光照时间 12h/d。
三、方法与步骤
定期观察瓶苗的生长情况，并统计其污染率和成活率。
四、结果观察与分析
蝴蝶兰无菌苗培养技能实训评价与考核标准参照表6-2执行。
五、评价与考核
1.如何降低蝴蝶兰组织培养过程中出现的褐化现象？
2.简述蝴蝶兰组织培养的操作流程。
任务反思
任务6.2 马铃薯的脱毒与快繁技术
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
1.了解马铃薯快繁各培养阶段适宜的培养基。
2.掌握马铃薯脱毒的方法。
3.了解无病毒苗的鉴定方法。
4.掌握马铃薯快速繁殖技术。
1.能熟练配制马铃薯各培养阶段的培养基。
2.能熟练、准确进行马铃薯的脱毒。
3.能正确进行马铃薯的组培快繁。
任务目标
一、脱毒技术
二、快速繁殖技术
三、微型薯生产技术
四、壮苗与生根培养
五、驯化与移栽
任务准备
一、脱毒技术
（一）获取外植体材料
采6～8cm的顶芽或腋芽
当腋芽长至1～2cm时，切取腋生枝作为外植体。
一、脱毒技术
（二）外植体消毒灭菌与接种
75%酒精迅速浸润组织
2%次氯酸钠溶液浸泡5～10min
无菌水冲洗2～3次。
剥去幼叶和叶原基，露出圆滑的半球形生长点，用解剖刀仔细切取带有1～2个叶原基的茎尖，迅速接种到培养基上。
一、脱毒技术
（三）初代培养
茎尖在MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+2%糖（pH5.8）的培养基、温度21～25℃、光强2000～3000lx、光照时间12h/d的条件下，接种后2～3周形成愈伤组织，4～5周出现绿色芽点，3～6月长成2～3cm小芽。
一、脱毒技术
（四）无病毒苗的检测
1.指示植物汁液检测
鉴别寄主的选择
鉴别寄主的准备
接种液制备
接种方法
培养鉴定
一、脱毒技术
（四）无病毒苗的检测
2.指示植物嫁接检测法
嫁接方法有枝条嫁接和块茎嫁接两种。
二、快速繁殖技术
（一）直接移栽利用块茎繁殖
（二）扦插繁殖
（三）组织培养切段繁殖
三、微型薯生产技术
（一）试管生产微型薯
植株长到4～5cm时转入MS+香豆素50～100mg/L+6-BA 3～5mg/L+蔗糖8%+活性炭0.5%的固体培养基上。温度22℃，黑暗条件下即可诱导出微型种薯。
三、微型薯生产技术
（二）温室生产微型薯
将三角瓶内的脱毒苗以单芽茎段或双芽茎段扦插到蛭石中，扦插时用GA 33mg/L+NAA 5mg/L浸泡茎段，在人工调控的温度和光照条件下，经60～90d即可收获。
马铃薯组织培养技能实训
一、目的与要求
二、器具与试剂、材料
三、方法与步骤
四、评价与考核
任务实施
学习脱毒马铃薯种苗的快速繁殖技术，获得批量脱毒种苗。
一、目的与要求
。
1、器具
2、试剂
3、材料
二、仪器用具与试剂
。
1、继代培养
将接种用具、酒精灯、培养基等置于超净工作台上，在无菌条件下，对脱毒马铃薯苗进行单节切段，然后接种于继代培养基中，每瓶中的接种材料可适当多接，材料要均匀分布。
三、方法与步骤
2、生根培养
当继代瓶苗长至6-7个节间，单节切段，接入生根培养基，5d左右生根，幼芽长出10d后能长成带2-3片叶的小苗。
三、方法与步骤
。
3、驯化与移栽
将马铃薯组培苗移至炼苗室，在自然环境下放置7 d，期间逐步将组培瓶瓶盖打开，让组培苗逐渐适应外界环境。用镊子取出组培苗，并用清水将组培苗基部的培养基清洗干净。
清洗过程要小心，避免损伤根系，最后按株距3cm、行距4-5cm进行移栽。
三、方法与步骤
4、管理
移栽后及时喷洒“移栽苗定植水”，加快移栽苗生根，提高成活率。
苗床的水分要做到“不干不浇，浇则浇透”的原则。移栽初期小苗较弱，需要适当遮光。7 d后可适增加光照。
三、方法与步骤
马铃薯组织培养技能实训评价与考核标准参照表6-2执行。
四、评价与考核
1.请以小组为单位设计马铃薯的脱毒和快繁方案。
2.通过查阅文献，了解最新的脱毒技术。
任务反思
任务6.3 菠萝的组织培养技术
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
1.掌握菠萝组培快繁的基本知识。
2.掌握菠萝的组培流程。
1.能正确进行菠萝的转段培养。
2.掌握菠萝驯化移栽技术。
任务目标
一、外植体的选择与灭菌
二、直接再生途径
三、愈伤组织、芽的诱导和增殖
四、诱导生根
五、驯化与移栽
任务准备
一、外植体的选择与灭菌
在晴天选取生长健壮，无病虫害的菠萝吸芽或腋芽，从基部剥除衰老叶片后，用自来水将芽冲洗干净，在吸芽生长点上方约5cm处切断所有叶片，将芽和着生在吸芽上的白色叶基放入2% NaClO消毒10min，无菌水冲洗3次，再放入0.1%HgCl消毒8min，无菌水冲洗3次。
二、直接再生途径
将消毒好的外植体纵切成2～3块，接种于MS＋2.0mg/L 6-BA＋2.5mg/L NAA的固体培养基上进行启动培养，培养20～30d后，从叶腋处萌发出不定芽。
将不定芽从基部切下，转接于MS＋2.0mg/L 6-BA＋1.0mg/L NAA培养基上进行继代增殖，继代周期为25～30d，增殖系数约为3。
三、愈伤组织、芽的诱导和增殖
将菠萝吸芽的叶基接种在MS＋3mg/L 6-BA＋2mg/L NAA培养基上，诱导30d后，从切口处产生结瘤状愈伤组织。
将愈伤组织转接于MS＋2.0mg/L 6-BA＋1.0mg/L NAA的分化培养基上，20d后部分愈伤组织的球形节状表面出现小绿点，然后小绿点伸长长大，形成丛生芽。
将丛生芽切成单株，转移到分化培养基上进行继代培养，芽逐渐长高，30d后形成再生植株。
四、诱导生根
切成单株转接至培养基（MS＋2.0mg/L 6-BA＋1.0mg/L NAA）中，培养 25～30d。
当不定芽长至株高2cm左右、有3～5片叶时，将其沿基部切下，接到生根培养基（MS＋1.0mg/L NAA＋0.5mg/L IBA）。
培养15d后小苗基部开始长根30d后，长出10条左右较粗的根，生根率可达90%～100%。
五、驯化与移栽
1.菠萝组培苗驯化
2.清洗幼苗
3.激素处理与晾苗
4.基质准备
5.移栽
6.移栽后管理
菠萝组织培养无菌体系建立技能实训
一、目的与要求
二、器具与试剂、材料
三、方法与步骤
四、结果记录与分析
五、评价与考核
任务实施
学习金菠萝初代培养的基本过程，初步掌握金菠萝外植体的清洗、灭菌、切割、接种等操作技术；掌握超净工作台的使用方法。
一、目的与要求
。
1、器具
2、试剂
3、材料
二、仪器用具与试剂
。
1、接种前的准备
配制MS＋2.0mg/L 6-BA＋2.5mg/L NAA的固体培养基。
对无菌接种室进行熏蒸或喷雾灭菌。
将所需物品置于超净工作台的接种台面；台面消毒。
用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子与鞋子，进入无菌操作室。
三、方法与步骤
2、外植体的灭菌与接种
2% NaClO消毒10min，无菌水冲洗3次，再放入0.1%HgCl消毒8min，无菌水冲洗3次。
将消毒好的外植体纵切成2～3块，接种于MS＋2.0mg/L 6-BA＋2.5mg/L NAA的固体培养基上进行培养。
三、方法与步骤
。
3、培养
培养温度(26±2)℃，光照强度2000-3000Lx。
三、方法与步骤
定期到培养室观察材料的生长状况，及时清理污染苗，并做好记录。若出现污染率，请分析污染的原因。
四、结果记录与分析
菠萝组织培养无菌体系建立技能实训评价与考核标准参照表6-2执行。
五、评价与考核
1.请以小组为单位，设计菠萝的培养方案。
2.如何进行金菠萝外植体的消毒？
任务反思
任务6.4 美国红栌的组织培养技术
任务目标
任务准备
任务实施
任务反思
1.了解美国红栌各培养阶段适宜的培养基。
2.明确美国红栌的组织培养方法。
3.掌握美国红栌的初代培养、增殖与继代培养、壮苗与生根培养、驯化移植的过程。
1.能熟练配制美国红栌各培养阶段的培养基。
2.能熟练、准确进行美国红栌的切割、分离与接种等无菌操作。
3.能正确进行美国红栌的初代培养、增殖与继代培养、壮苗与生根培养。
4.能熟练进行美国红栌的驯化与移栽。
任务目标
一、外植体的选择与接种
二、初代培养
三、增殖与继代培养
四、壮苗与生根培养
五、驯化与移栽
任务准备
一、外植体的选择与接种
以幼枝切段为外植体：取直径为5～15mm的当年枝条，整理成长度为2～2.5cm左右的小段。
先用70％～75％酒精灭菌30s，再用0.1％HgCl2灭菌8min处理效果最好，灭菌后无菌水涮洗3～5次，接种到诱导培养基上。
二、初代培养
外植体接种到诱导培养基MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L上，置于（25℃±2）℃培养室进行培养。15d左右即可萌发出嫩芽。
三、增殖与继代培养
将长出的嫩芽剪取下来，转接到增殖培养基MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L上进行继代培养，增殖系数可达到4以上。
四、壮苗与生根培养
壮苗培养基：MS+BA 0.25mg/L+NAA 0.2mg/L。
生根培养上：1/2MS+NAA 0.2mg/L。
经10d左右培养，茎基部切口附近即开始陆续长出不定根。再经10～15d培养，即可成为根系发育良好的完整试管小植株。
五、驯化与移栽
洗净苗根部的培养基，移栽于装有蛭石的营养钵中，然后加设小拱棚以保湿。
移栽前期将空气湿度保持在75%～85%之间，温度控制在20～25℃，组培苗大约在1个月左右可长出新根新叶，移栽成活率可达90%。
美国红栌组培快繁技能实训
一、目的与要求
二、器具与试剂、材料
三、方法与步骤
四、结果记录与分析
五、评价与考核
任务实施
掌握美国红栌的初代培养、增殖与继代培养、壮苗与生根培养、驯化与移栽的过程。
一、目的与要求
。
1、器具
2、试剂
3、材料
二、仪器用具与试剂
。
具体操作步骤见‘任务准备’相关内容。
三、方法与步骤
1.接种2周后，统计污染率，并分析污染的原因。
2.生根培养时，材料的分割与接种应注意哪些方面？并统计生根率。
3.观察移栽后的组培苗的生长情况，并统计移栽成活率。
四、结果记录与分析
美国红栌组培快繁技能实训评价与考核标准参照表6-2执行。
五、评价与考核
1.简述美国红栌组培快繁流程。
2.继代转接时，应如何分割培养的材料？
任务反思
谢谢聆听！

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