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(共20张PPT)
定性分析与定量分析的基础
定性分析基础
物质对光的选择吸收
A
B
A

在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。
A

C
增大
定量分析基础
定性与定量分析方法
（一）对比吸收光谱的一致性
丹参注射液紫外光谱
比较样品化合物的吸收光谱特征与标准化合物的吸收光谱特征；或与文献所载的化合物的标准谱图进行核对。
结论：同一物质有相同吸收光谱图，反之不一定是同一物质。
一、定性分析的方法（对比法）
（二）对比吸收光谱特征数据
在不同化合物的吸收光谱中，最大吸收波长可以相同，但因摩尔质量不同，它们的吸光系数有明显差异，因此在比较 的同时，再比较（ ）或（ ）则可加以区分。
例如 甲基麻黄碱和去甲基麻黄碱均为251nm、257nm、264nm，但可从二者的摩尔吸光系数加以区别。
甲基麻黄碱 251nm（lgε2.20），257nm（lgε2.27），264nm（lgε2.19）
去甲基麻黄碱 251nm（lgε2.11），257nm（lgε2.11），264nm（lgε2.20）
（三） 对比吸光度（或吸光系数）的比值
不同的最大吸收波长处的吸光度（与标准品在相同条件下测定）的比值是用于鉴别化合物的特性。
如维生素B12的吸收光谱有三个吸收峰，
分别为278nm、36lnm、550nm。2015年版
《中国药典》规定，作为鉴别的依据，361nm
与278nm吸光度的比值应为1.70～1.88；361nm
与550nm的吸光度比值应为3.15～3.45。
361nm
550nm
278nm
二、定量分析的方法
（一） 单组分样品的定量方法
1. 标准曲线法（适用大批量样品）
①配制一系列不同浓度的标准溶液，选择
合适的参比溶液，在相同条件下，以待测组分
的最大吸收波长λmax作为入射光，分别测定各
标准溶液对应的吸光度。
②以浓度c为横坐标、吸光度A为纵坐标
描绘曲线，称为标准曲线，也叫工作曲线。
③按照相同的实验条件和操作程序，用待测溶液配制未知试样溶液并测定其吸光度A样，在标准曲线上找到与之对应的未知试样溶液的浓度c样 。
标准曲线
2. 标准对照法
与标准品的已知浓度比较（浓度尽可能接近）
因是同种物质，故 K标＝K样；因吸收池厚度相同，即L标=L样。所以：
需要指出的是c样为稀释溶液浓度，若求原样品溶液中组分的浓度，应乘以稀释倍数。即：c原样＝c样×稀释倍数。
　　如果样品的称量及稀释度与标准品完全一致，则 ：
例题1：维生素B12原料的含量测定：精密称取原料样品30mg，加水溶解并稀释至1升，摇匀，得每毫升样品30μg，另精密称取维生素B12对照品30mg，加水溶解并稀释至1升，其浓度为30μg/ml，在361nm波长处分别测的吸光值为： A样=0.481和A标=0.512，试计算维生素B12的含量。
解：
= ×
=
=93.95%
与标准品的吸光系数比较
在没有标准品的情况下，可从有关手册或文献上查得标准物质的吸光系数。然后采用与标准物质相同的溶剂，配制样品溶液，在相同波长下测定样品的吸光度A值，求出样品的吸光系数，按下式计算含量：
例题2：取维生素B12样品30mg，用蒸馏水配成1000ml的溶液，于1cm的吸收池中，在361nm波长处分别测的吸光度A为0.607，求样品中维生素B12的含量。（已知维生素B12 的=207）
解：
c=
（ ）样202.3
=97.7%
解线性方程法 对于如图所示的两组分混合物
混合组分吸收光谱相互重叠的三种情况
∵
∴
（二）多组分样品的定量方法
≠
等吸收双波长消除法
在试样中含有两个待测组
分a和b时，若要测定组分b，
组分a有干扰，应设法消除组
分a的吸收干扰。首先选择待
测组分b的最大吸收波长λ2作
为测量等吸收双波长消除法示意图波长，然后用作图的方法选择参比波长λ1，使组分a在这两个波长处的吸光度相等。则：
待测组分含量过高时，吸光度超出了准确测量的读数范围，会造成较大的误差，可以采用差示分光光度法，弥补这一缺点。差示光度法是用一个比试样溶液浓度稍低的标准溶液作为参比溶液，将分光光度计调零（透光率100%），测得的吸光度就是被测试样溶液试液与参比溶液的吸光度差值（相对吸光度）。根据朗伯-比尔定律得：
待测溶液与参比溶液的吸光度差值与两溶液的浓度之差成正比，这就是差示
分光光度法的基本原理。
差示分光光度法
第六节 应用与示例
紫外吸收光谱在有机化合物分析中的应用
紫外吸收光谱在研究有机化合物的结构中，可以推断分子的骨架、判断发色基团之间的共轭关系和估计共轭体系中的取代基种类、位置、数目以及构型和构象。但由于紫外可见光谱较为简单，光谱信息少，特征性不强，而且不少简单官能团在近紫外及可见光区没有吸收或吸收很弱，因此，它可配合红外光谱法、核磁共振波谱法和质谱法等常用的结构分析法对未知物进行定性鉴定和结构分析。
推断官能团和推断异构体
第六节 应用与示例
紫外-可见吸收光谱在有机化合物结构研究中的应用主要是鉴定共轭生色团、说明共扼关系、判断共轭体系中取代基的位置、种类和数目等，进而推测未知物的结构骨架。
二、推断官能团和推断异构体
官能团的推断
待测化合物如果在220～800nm波长范围内无吸收（＜1 L/mol·cm），它可能是脂肪族饱和碳氢化合物、胺、氰醇、羧酸、氯代烃和氟代烃等，不含直链或环状共轭体系，没有醛、酮等基团；如果在210～250 nm波长范围内有强吸收带，它可能含有两个共轭单位；如果在260～300nm波长范围内有强吸收带，它可能含有3～5共轭单位：如果在250～300nm波长范围内有弱吸收带，它可能有羰基存在；如果在250～300nm波长范围内有中等强度吸收带，并且含有振动结构，表明有苯环存在；如果化合物有颜色．则分子中含有的共轭生色团一般在5个以上。
二、推断官能团和推断异构体
异构体的推断
结构异构体的推断
许多结构异构体之间可利用其双键的位置不同，应用紫外吸收光谱推断异构体的结构。如松香酸（Ⅰ）和左旋松香酸（Ⅱ）的λmax分别为238 nm的273 nm，相应的εmax值分别为15100 L/（mol·cm）和7100 L/（mol·cm）。这是因为Ⅰ型没有立体障碍，而Ⅱ型有一定的立体障碍，因此，Ⅰ型的εmax比Ⅱ型的εmax大得多。
Ⅰ型 Ⅱ型
二、推断官能团和推断异构体
异构体的推断
顺反异构的推断 因为反式异构体空间位阻小，共轭程度高,所以其最大吸收波长λmax和摩尔吸收系数εmax都大于顺式异构体。如,1，2-二苯乙烯的反式异构体的光谱特征为：λmax＝295.5nm，εmax＝29000 L/(mol·cm)，1,2-二苯乙烯的顺式异构体的光谱特征为：λmax＝280 nm，εmax＝105 00 L/(mol·cm)
反式1，2—二苯乙烯 顺式1，2—二苯乙烯
1
2
3
本章小结
基本原理
光源 钨灯或碘钨灯、氢灯或氘灯
仪器主要部件
定性分析
对比吸收光谱的一致性
对比吸收光谱特征数据
对比吸光度（或吸光系数）的比值
定量分析
单组分样品的定量方法
多组分样品的定量方法
结构鉴定
Lambert-Beer定律
单色器 棱镜或光栅
吸收池 玻璃或石英
检测器
信号处理系统
主要应用
谢谢观看

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