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工作任务12-1 紫外-可见分光光度法测定复方制剂含量
（一）目的要求
1．掌握双波长紫外-可见分光光度法消除干扰的原理和波长选择原则。
2．掌握用紫外-可见分光光度法定量测定双组分混合物的原理和方法。
3．熟悉紫外-可见分光光度计的使用。
（二）实验原理
复方磺胺嘧啶片系由磺胺嘧啶（SD）和甲氧苄啶（TMP）组成的复方制剂。两者在紫外光区均有较强的吸收。在盐酸溶液（9→1000）中，磺胺嘧啶在308 nm处有吸收，而甲氧苄啶在此波长处无吸收，故可在此波长处直接测定磺胺嘧啶的吸收度而求得含量。甲氧苄啶在277nm波长处有较大吸收，而磺胺嘧啶在277nm处与308nm处有等吸收点。故可采用双波长法以277nm为测定波长，308nm为参比波长，测定甲氧苄啶在该两波长处ΔA（ΔA=A277-A308）值来计算含量。
（三）实验操作步骤
1．准备仪器与试剂
TU-1901紫外分光光度计（北京普析分析仪器公司）、石英比色皿、AL-204电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、100 mL容量瓶、移液管。
磺胺嘧啶对照品、甲氧苄啶对照品、复方磺胺嘧啶片、氢氧化钠溶液（0.4%）、盐酸溶液（9→1000）、冰醋酸，以上试剂均为分析纯。
2．实验步骤
《中国药典》（2000版二部）规定，复方磺胺嘧啶片每片中含磺胺嘧啶（C10H10N4O2S）应为0.360～0.440 g，含甲氧苄啶（C14H18N4O3）应为45.0～55.0 mg。
（1）磺胺嘧啶的含量测定 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺嘧啶0.2g），置于100 mL容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液适量，振摇使磺胺嘧啶溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置于另一100mL容量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（药典附录ⅣA），在308nm波长处测定吸收度；另取105℃干燥至恒重的磺胺嘧啶对照品适量，精密称定，加盐酸溶液（9→1000）溶解并定量稀释制成每1mL中约含40μg的溶液，同法测定，计算，即得。
（2）甲氧苄啶的含量测定 精密称取上述研细的药片细粉适量（约相当于甲氧苄啶40 mg），置于100mL容量瓶中，加冰醋酸30mL，振摇使甲氧苄啶溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取甲氧苄啶对照品40 mg与磺胺嘧啶对照品约0.3 g，分别置于100 mL容量瓶中，各加冰醋酸30mL溶解，加水稀释至刻度，摇匀，前者作为对照品溶液Ⅰ，后者滤过，取续滤液作为对照品溶液Ⅱ。精密量取供试品溶液与对照品溶液Ⅰ、Ⅱ各5mL，分别置于100mL容量瓶中，各加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法测定。取对照品溶液Ⅱ的稀释液，以308nm为参比波长λ2，在277 nm波长附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为测定波长λ1，要求ΔA=Aλ2 Aλ1=0。再在λ2和λ1波长处，分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液Ⅰ的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。
图12-11 复方磺胺嘧啶的紫外光谱图
（四）实验数据记录和处理
（五）实验注意事项
1．正确使用石英比色皿。
2．吸收度读数3次，取平均值计算含量。
工作任务13-1 布洛芬的红外吸收光谱鉴别
（一）目的要求
1．掌握溴化钾压片法制备固体试样的方法。
2．学会傅立叶变换红外光谱仪的使用方法。
3．掌握化合物定性鉴定的方法，初步学会对红外吸收光谱图解析。
（二）实验指导
将原料药布洛芬用溴化钾压片后进行红外光谱测定，测得的试样谱图与中国药典上的标准谱图对照，若两张谱图吸收峰位置和形状完全相同，峰强度一致，则可认为两者是同一化合物。如果两张谱图不一样，或峰位不一致，则说明两者不是同一化合物，或试样有杂质。
（三）操作步骤
1．准备仪器和试剂
傅立叶变换红外光谱仪、红外光灯、玛瑙研钵、压片机、压片模具和试样架、不锈钢药勺、布洛芬（原料药）、KBr（光谱纯）、95%乙醇（AR）。
2．操作步骤
（1）打开红外光谱仪，预热，再打开电脑，进入红外光谱工作站，设置相关参数。
（2）试样制备 称取1～2mg布洛芬供试品，置于玛瑙研钵中，加入干燥的光谱纯溴化钾200mg，在红外光照射下，充分研磨均匀，使其粒度在2.5μm（通过250目筛孔）以下。取少量上述混合试样倒入压片机的模具中铺匀，连接真空泵，置于油压机上，先抽气5min除去混合物中空气与湿气，再边抽气边加压，加压至800～1000Mpa，保持2～5min。除去真空机，取下压片磨具，即得表面光洁、无裂缝均匀透明薄片。用同法压制空白溴化钾片。
（3）测定红外光谱 将空白溴化钾片及布洛芬压片分别置于红外光谱仪测量光路中，从400～4000cm–1波数范围内对空白和试样进行光谱扫描，测定并录制试样红外光谱图。
（4）与标准红外光谱比较 从所得的布洛芬红外吸收光谱图找出羧基、苯环骨架、苯环对二取代、甲基、异丙基等有关吸收峰，并与布洛芬标准红外光谱图逐一进行对照比较。
本品的红外光谱图应与标准图谱（见《药品红外光谱集》第4版943图）一致。
（四）实验数据记录和处理
1．对基线倾斜的谱图进行校正，噪音大时采用平滑功能，然后绘制出标有吸收峰的红外光谱图。
2．对照标准谱图与试样谱图归属。
3．结论： 。
（五）实验注意事项
1．制样前确保试样和溴化钾是干燥纯品。
2．研磨时为保证所处环境的干燥度，可在红外光灯照射下研磨，以防试样吸水。研磨应朝同一方向均匀用力直至试样中无肉眼可见的粒子，以确保KBr压片均匀度和透明度，以及防止待测试样在研磨过程中产生转晶。
3．压片前，模具应用酒精清洗干净；压片时加压压力不能过大，以免损坏模具，抽气时间也不宜过长。
4．试样制备和测定过程中，不要面对试样和试样室呼气，降低CO2对测定结果的干扰。
5．由于仪器型号和分辨率、试样纯度和测定条件等都会影响吸收光谱形状，试样光谱和标准光谱可能不全相同，但特征峰数据不会有太大变化。

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