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工作任务15-1 镇痛药加合百服宁的薄层分析
(一)目的要求
（1）学习薄层色谱法基本原理及其应用。
（2）学会薄层色谱法操作技术。
（3）了解多组分混合物中各组分分离和鉴定方法。
（二）实验原理
由于吸附剂对加合百服宁中各成分的吸附能力不同，在展开剂作用下，各成分层析速度不同，从而得以分离。通过比较各组分Rf，确定药物中各成分。
市售600mg加合百服宁片含对乙酰氨基酚（500mg）和咖啡因（65mg）。将该片剂用无水乙醇﹕二氯甲烷=1﹕2混合溶剂萃取，以乙酸乙酯作展开剂，在硅胶板上展开，通过紫外光灯确定斑点，计算Rf，确定其中各成分。
（三）实验步骤
1．准备仪器和试剂
三用紫外分析仪、研钵、广口瓶（或层析缸）、小漏斗、硅胶板（GF254 10cm×3.5cm）、量筒（50mL）、毛细管、铅笔、直尺、市售百服宁片、二氯甲烷（AR.）、无水乙醇（AR.）、乙酸乙酯（AR.）、棉花或小滤纸。
对乙酰氨基酚标准品（2%，以乙醇:二氯甲烷=1:2混合溶剂溶解）；咖啡因标准品（2%，以乙醇:二氯甲烷=1:2混合溶剂溶解）。
2．试样制备
将1片市售百服宁片研成粉末状，加30mL乙醇:二氯甲烷=1:2混合溶剂，搅拌10min后，过滤，取滤液于小烧杯中，备用。
3．色谱操作步骤
（1）点样 在距硅胶板一端1cm处，用铅笔轻轻画一条起始线，在起始线上，用毛细管分别点试样溶液、咖啡因标准品、对乙酰氨基酚标准品各约5μL。样点间距1cm以上，样点距边缘1cm以上，样斑点直径不超过2mm。样点太少，可重复点，但须待前次样点干后，再点。
（2）展开 在广口瓶（或层析缸）中，加适量乙酸乙酯（展开剂），液层高约0.8cm，将点好样晾干的硅胶板，置于广口瓶（或层析缸）中，先不要浸入展开剂中（可用物体垫起），盖好瓶盖，饱和15min。再将点有样的一端浸入展开剂中约0.3～0.5cm（可用物体垫起），迅速盖好瓶盖，展开。待展开剂前沿移行至距硅胶板顶端约1cm时，取出硅胶板，平放，迅速在展开剂前沿用铅笔作标记。
（3）鉴定 待硅胶板干后，置于三用紫外分析仪在254nm紫外光下观察，可清晰看到各斑点，用铅笔在斑点中心作标记。用尺子测量各斑点至原点距离和展开剂前沿至原点距离，计算Rf，并将试样与标准品对照。
工作任务15-2 氨基酸的纸色谱分析
（一）准备仪器和试剂
1.仪器
量筒（10mL）、长颈漏斗、剪刀、尺子、毛细管（点样用）、喷雾器、铅笔（自备）、层析缸（配有塞盖及挂钩）、培养皿（直径20cm和直径l0cm各1个）、大表面皿（22cm）、圆规、硬纸圈、电热套。
2.试剂和材料
层析滤纸、茚三酮的丙酮溶液（0.3%）、丙氨酸溶液（0.01mol L 1）、胱氨酸溶液（0.01mol L 1）、亮氨酸溶液（0.01mol L 1）及它们的混合液（1:1:1）、展开剂（正丁醇:甲酸=3:1，体积比）。
（二）操作技术
1.水平径向展开法
（1）点样 取一张直径为12cm的层析滤纸，用圆规在其中心画一直径为2cm的小圆，并将滤纸划分为四等份，在每一等份的滤纸边缘上用铅笔分别写上丙、亮、胱、混四个字。用毛细管在相应等份的小圆弧中心分别点上各氨基酸和混合物样点，一般点样两三次，样点直径为2～3mm，晾干。然后用铅笔在滤纸中央穿一小孔，将纸栓插入其中，纸栓直径4～5mm为宜，长度约2cm，松紧适度，并尽量做成圆形，如图15-10所示。
（2）展开 打开大表面皿，从小培养皿中加入8mL振摇均匀的展开剂（含甲酸的正丁醇），再在小培养皿外面放一硬纸圈，将点好样的滤纸放在小培养皿上方，纸栓下部浸入展开剂中，然后盖上大表面皿，见图15-11。
当展开剂前沿流至距滤纸边缘约1cm处时，取出滤纸，拔去纸栓，立即用铅笔画下展开剂前沿所在位置。
图15-10 圆形层析滤纸 图15-11 纸色谱水平径向展开法示意图
（3）显色 滤纸晾干后，用喷雾器将0.3%茚三酮的丙酮溶液均匀地喷洒在滤纸上，至滤纸刚潮湿为止。在电热套上缓慢烘干至各氨基酸紫色斑点出现，用铅笔画好斑点轮廓，并在滤纸上测量出各个斑点中心到起始点距离a和溶剂前沿到起始点距离b，如图15-12所示。
图15-12 纸色谱水平径向法展开图 图15-13 纸色谱上行法示意图
（4）鉴定 计算每种氨基酸的Rf值。根据各Rf值定性分析混合氨基酸的成分。
2.上行展开法
(1)点样 取一滤纸条(17cm×5cm）在距一端2cm处用铅笔画一起始线，分别点上丙氨酸、亮氨酸、胱氨酸及氨基酸混合物，点样方法同上，晾干后，展开。
(2)展开 用量筒量取约l0mL振摇均匀的展开剂，通过长颈漏斗倒入层析缸底部，切勿使展开剂沾及缸壁，塞好带钩的塞盖，如图15-13所示，静置备用。
将滤纸条悬挂在层析缸的玻璃钩上，点样端浸入展开剂约1cm深，进行展开。当展开剂上升到一定高度，取出滤纸条，立即用铅笔画下展开剂前沿位置，晾干（滤纸条晾干时必须水平放置，避免色斑因重力作用而拖尾）。
(3)显色 用喷雾器将0.3%茚三酮的丙酮溶液均匀地喷洒在滤纸上，至滤纸刚潮湿为止，在电热套上烘干至各氨基酸紫色斑点出现，用铅笔画好斑点的轮廓。
(4)鉴定 量出样点起始点至色斑中心距离a及样点至溶剂前沿距离b，计算每个氨基酸的Rf值。根据各Rf值定性分析混合氨基酸的成分。
（三）实验注意事项
在纸色谱实验操作过程中，滤纸应始终保持平整（不能折叠）和洁净（不能用手触摸，以免显色后指纹在滤纸上显现），取放滤纸条时要用镊子夹取滤纸边缘。显色剂应现用现配，喷洒显色剂要均匀、适量。
在展开过程中不能随意打开盖子查看，以免展开剂挥发而改变Rf值。

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