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(共32张PPT)
2.1微生物的基本培养技术
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。 自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事例屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
问题探讨
一、培养基的配制
1.培养基的概念:
3.培养基的类型：
固体培养基
液体培养基
加入凝固剂(如琼脂)
2.培养基的作用:
人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其_________的营养基质。
营养物质
生长繁殖
用以 微生物或 。
积累其代谢物
半固体培养基：观察微生物的运动、分类鉴定
培养、分离、鉴定、保存
扩大培养
工业生产
分离、计数、
鉴定等
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
放线菌
念珠菌
霉菌
酵母菌
4.菌落
不同菌落的形状、大小、颜色等不同，菌落是鉴定菌种的重要依据。
划分 培养基种类 特点 用途
物理 性质
化学 成分
目的用途
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产
观察微生物的运动、分类鉴定
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
天然培养基
合成培养基
鉴别培养基
补充资料：培养基的类型及用途
①碳源：
无机碳源
有机碳源
例如CO2、CO32-、HCO3-等
例如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等
无机氮源
有机氮源
例如N2、NO3-、NH3、NH4＋等
例如牛肉膏、蛋白胨、尿素等
提供碳元素的物质
提供氮元素的物质
②氮源：
一般情况下，添加无机碳源培养基用来培养自养微生物；
添加有机碳源培养基用来培养异养微生物。
（1）主要营养物质：
碳源、氮源、水、无机盐
③无机盐：调节酸碱平衡、维持一定的渗透压
4.培养基的成分：
牛肉膏、蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质
牛肉膏
蛋白胨
1.对异养型微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。
2.无机氮源不但能给自养型微生物提供氮源，也能作为能源物质，如NH3既作为硝化细菌的氮源，也作为能源。
（2）还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、O2的需求
主要指生长因子：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
微生物 培养基需要的特殊物质或条件
乳酸杆菌
霉菌
细菌
厌氧微生物
添加维生素
调至酸性
调至中性或弱碱性
提供无氧的条件
无菌技术获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染！021.消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。2.灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。操作的空间、操作者的衣着和手用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基芽孢是某些细菌在营养条件缺乏时，在菌体内形成的含水量低、抗逆性强的休眠体；孢子是脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的生殖细胞。-----与消毒最本质区别02类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物。强烈的理化方法，杀死所有微生物。煮沸消毒家庭餐具等生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒牛奶等不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体（皮肤、伤口）、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基及多种器材和物品高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121 ℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台请阅读教材P9资料卡,完成下列表格（迅速彻底）消 毒
煮沸消毒法
巴氏消毒法
化学药剂
紫外线
02
灭 菌
涂布器
02
干热灭菌箱
高压蒸汽灭菌锅
灼烧灭菌
连一连：物品所对应的灭菌或消毒方法
培养基
培养皿
接种环
实验操作者的双手
实验室
牛奶
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
化学药剂消毒
紫外线消毒
巴氏消毒法
练习
还要注意：避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触；为了避免周围环境微生物污染，操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。超净工作台三、微生物的纯培养
纯培养物
培养物
纯培养
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体
获得纯培养物的过程
由单一个体繁殖所获得的微生物群体
配制培养基
灭菌
接种
分离
培养
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
1. 实验原理
①分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
念珠菌显色培养基
大肠杆菌培养基
酵母菌培养基
金黄色葡萄球菌和枯草杆菌培养基
注：菌落的大小、形状、颜色、透明度、光泽度等是鉴定菌种的重要依据。
②采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
1. 实验原理
分散或稀释
繁殖
单个细胞
微生物群
单个菌落
稀释涂布平板法
平板划线法
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
2. 实验目的
① 学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板
② 学会进行无菌操作
③ 尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落
3. 材料用具
酵母菌培养液
提供接种用的酵母菌
配制酵母菌固体培养基
马铃薯
葡萄糖（或蔗糖）
蒸馏水
琼脂
天平，小刀，纱布，烧杯，锥形瓶，棉塞、牛皮纸（或报纸）；
皮筋，培养皿，接种环，酒精灯，超净工作台；
高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱和恒温培养箱等；
超净工作台
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
3. 材料用具
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
1.配制培养基
去皮
切块
加水
(1000mL)
加热煮沸
软烂
马铃薯
纱布过滤
加琼脂
（15～20g）
酵母菌
培养基
加水定容
(1000mL)
称取马铃薯
(200g)
马铃薯块
滤液
加葡萄糖/蔗糖
（20g）
第1 步：制备培养基
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
调pH
①
②
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
2.灭菌：
培养基——高压蒸汽灭菌
转移
灭菌15~30min
皮筋勒紧
包牛皮纸
放入高压蒸汽灭菌锅中（100kPa、121℃）
酵母菌培养基
锥形瓶
加棉塞
第1 步：制备培养基
高压蒸汽灭菌锅
1. 避免因水蒸气凝结而浸湿棉塞。
2. 避免再次污染
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
2.灭菌：
培养皿——干热灭菌
灭菌2h
几层牛皮纸包紧
放入干热灭菌箱（160～170℃）
5～8套培养皿
第1 步：制备培养基
干热灭菌箱
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
3.倒平板：
培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。
1
拔出锥形瓶的棉塞。
2
将瓶口迅速通过火焰。
3
用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿（10～20mL），立即盖上皿盖。
4
等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。
第1步：制备培养基
1.防止培养基水分蒸发。
2.防止皿盖上冷凝水滴落，造成污染。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
不能完全打开，以免杂菌污染培养基。
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
第2 步：接种和分离酵母菌
分离的方法
平板划线法
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。
连续划线法
分区划线法
三、微生物的纯培养
平板划线法的具体操作
1
将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。
2
在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。
将试管口通过火焰。
3
4
在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
第2 步：接种和分离酵母菌
防止温度太高杀死菌种。
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
平板划线法的具体操作
5
将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。
6
灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。
7
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。
第3 步：培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
警示
探究 · 实践：酵母菌的纯培养
4. 方法步骤
对照：说明培养基是否被杂菌污染。
培养基的类型
培养基的营养物质
常用的消毒方法
常用的灭菌方法
微生物的基本培养技术
培养基
无菌技术
煮沸消毒
巴氏消毒
化学药物消毒
紫外线消毒
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）等
按物理性质划分
按化学成分划分
按目的用途划分
课堂总结
概念检测
1. 微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。
（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ）
（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。 （ ）
（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ）
×
√
×
2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
干制——降低食品的水分含量；
腌制——通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；
低温储存——通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
（1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有________________。
（2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？
（3）从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
培养皿和培养基
接种
洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。
可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
2. 某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min， 230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
（1）摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？
培养液中02含量不同。
（2）从图中数据你可以得出什么结论 其原因是什么
培养液中02含量越高，酵母菌种群密度越大。
（3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定
这时候已经达到了环境容纳量。

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