资源简介

(共41张PPT)
1.2.1微生物的基本培养技术
在制作过程中有杂菌混入
制作用具和原料灭菌
接种纯的菌种
控制发酵条件
思考1：失败的原因是什么？
思考2：怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
从社会中来
实验室培养微生物的条件:
研究和应用微生物的前提
——防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物
——培养基
——无菌技术
1.要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；
2.要确保其他微生物无法混入
3.将需要的微生物分离出来
——纯培养
相关信息
包括细菌、真菌、病毒及一些原生生物等。
微生物
1.概念：
难以用肉眼观察的微小生物的统称。
2.类型：
SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
注:本章提及的微生物主要是指用于发酵的细菌和真菌
培养基的配制
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
01
1.培养基概念：
2.培养基作用：
3.培养基类型：
固体培养基 液体培养基 半固体培养基
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
用途
培养基的类型及用途
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产
观察微生物的运动、
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
天然培养基
合成培养基
鉴别培养基
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
固体培养基：菌落
几种选择培养基
加入青霉素的培养基
分离酵母菌、霉菌等真菌
不加氮源的无氮培养基
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基
分离自养型微生物
4.培养基的配方:
（1）基本成分：
水、碳源、氮源、无机盐。
碳源
无机碳源：
有机碳源：
氮源
NH4＋、NO3-、NH3等。
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。
CO2、CO32-、HCO3-。
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
无机氮源：
有机氮源：
来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质
无机盐
Zn、Cu、Mn、Co、Mo等
大量元素：
微量元素：
Ca、K 、Mg等
牛肉膏、蛋白胨：
自养微生物
异养微生物
为什么培养基需要氮源？
是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
01
培养基的配制
01
（2）特殊需求：
满足微生物对 的需求。
④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。
例如：①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；
②培养霉菌时，需要将培养基调至_____；
③培养细菌时，需要将培养基调至 ；
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
pH、特殊营养物质、O2
01
培养基的配制
4.培养基的配方:
牛肉膏
蛋白胨
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染！
二、无菌技术
获得纯净的微生物培养物的关键是 。无菌技术主要包括 。
防止杂菌污染
消毒和灭菌
(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行 。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。
注意事项：
实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 。
为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在
。
清洁和消毒
灭菌
酒精灯火焰附近进行
相接触
1.消毒和灭菌工作主要包括两方面：
①消毒
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
使用较为温和的物理、化学等方法杀死物体表面或内部一部分微生物
使用强烈的理化方法，杀死物体内外所有微生物，包括芽孢、孢子
煮沸消毒法
日常用品
100 ℃煮沸5～6 min
巴氏消毒法
适用于牛奶、果汁等不耐高温的液体
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
化学药物消毒法
生物活体、水源等
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线消毒法
紫外线照射30 min
灼烧灭菌
微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿（如吸管、培养皿）、金属用具等
物品放入干热灭菌箱,
160～170 ℃加热2～3h
湿热灭菌
其中高压蒸汽灭菌效果最好，适用于培养基、无菌水等
高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min
接种室、接种箱，超净工作台
无菌技术
▲芽孢和孢子：
芽孢：某些细菌生长到一定阶段，在细胞内形成的休眠体
孢子：某些生物（细菌、原生动物、真菌和植物等）的繁殖体
芽孢和孢子具有高度的耐热性，可抗化学药物和抗辐射
知识拓展
灭菌
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
接种环灼烧灭菌
注意：
①使用前必须先把锅内的水加热煮沸，将锅内冷空气排尽，才能达到预设的压力和温度。
②灭菌完成时，待锅内压力自然降到０时，再打开气阀。
P10旁栏思考2：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
还能有效避免操作者自身被微生物感染。
微生物的纯培养031.培养物：3.纯培养：2.纯培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的培养。由单一个体繁殖所获得的微生物群体。获得纯培养物的过程就是纯培养。03
探究 实践
酵母菌的纯培养
1.实验原理：
菌落
一个菌落就是一个种群
鉴定菌种的重要依据：
形状、大小、光泽度、颜色、透明度等。
如何鉴定哪个菌落是酵母菌？
问
获得单菌落的方法？
问
①平板划线法 ②稀释涂布平板法
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
03
探究 实践
酵母菌的纯培养
A、配制培养基
1、制备培养基
03
探究 实践
酵母菌的纯培养
1、制备培养基
B.灭菌
03
探究 实践
酵母菌的纯培养
1、制备培养基
C、倒平板
注意
待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
问题思考与分析：
问
1.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
2、接种和分离
平板划线法
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
稀释分散
生长繁殖
①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红
⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。
⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞
②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞
③试管口通过火焰
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。
酵母菌的纯培养
1）留意接种环灭菌的注意事项。2）划线的注意事项。
1
2
3
4
5
【平板划线法注意事项】
1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；
2.划线首尾不能相接；
3.每次划线前灼烧接种环进行灭菌；
4.划线操作结束后，仍需灼烧接种环。
连续划线法
分区划线法
为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？
在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上原有微生物
取菌种前灼烧：
每次划线前灼烧：
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
接种结束后灼烧：
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
问
问题思考与分析：
3、酵母菌培养
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-48h。
划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）
作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染.
用记号笔标记培养皿中菌落皿底上
平板划线法可以对菌种进行分离，不能对培养液中菌种进行计数
警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，以
防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免
污染环境。

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