资源简介

(共32张PPT)
1.2.1微生物的培养技术及应用
微生物的基本培养技术
目录
CONTENTS
微生物
培养基
灭菌技术
微生物的纯培养
01
02
03
04
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WHAT MAKES US
DIFFERENT
85%
实验室操作
“
日常消毒
微生物的培养技术及应用
”
微生物无处不在，如何防止杂菌污染呢？
微生物
微生物是人们对所有形体微小、肉眼不可见的生物的统称。
大肠杆菌菌落
高倍光学显微镜下的酵母菌
电镜下新冠病毒
细菌（原核生物）
无核膜包被的细胞核。
某些细菌会在营养缺乏或代谢产物积累的环境中形成没有繁殖功能的休眠构造，称为芽孢。芽孢对恶劣环境具有极强抵抗力。芽孢在条件适宜时会重新成为一个细菌。
微生物
真菌（真核生物）
有核膜包被的细胞核。
酵母菌（出芽生殖），霉菌、蘑菇等（孢子生殖），孢子是生殖细胞，对恶劣环境也有极强抵抗力。
病毒（无细胞结构），在活细胞体内寄生。脱离活细胞会形成结晶体状态。
培养基
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
分类 标准 培养基种类 培养基特点 作用
物理 性质 固体培养基 外观固态 微生物的分离、计数等
液体培养基 呈液态 常用于工业生产
功能 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长 选择、分离
鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴定
成分 来源 天然培养基 化学成分还不清楚 工业上大规模的微生物发酵生产
合成培养基 化学成分完全了解 在实验室用来对微生物分析
培养基
成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。某些培养基还需要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的需求。
碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机碳源：CO2、NaHCO3等；
有机碳源：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等
氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机氮源：NH3、铵盐、硝酸盐等；
有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等
培养基
细菌培养基：含有较高的有机氮，常用蛋白胨和酵母提取物等配制；中性偏碱。
霉菌培养基：常用可溶性淀粉加无机物配制，或用添加蔗糖的豆芽汁等配制；中性偏酸。
细菌喜荤霉菌喜素
细菌喜碱，霉菌喜酸
无菌技术
消毒
灭菌
无菌技术
消毒vs灭菌
无菌技术
消毒vs灭菌
请回答下列问题：
1.实验器具用什么方法灭菌？
2.培养基用什么方法灭菌？
3.双手用什么方法消毒？
4.接种环用什么方法灭菌？
5.涂布器用什么方法灭菌？
6.为保证无杂菌，实验操作都要在哪里进行？
7.如何制备无菌水？
高压蒸汽灭菌法
灼烧灭菌法
浸泡在75%酒精中，使用前灼烧
超净工作台的酒精灯火焰旁
用三角瓶装水，高压蒸汽灭菌法灭菌
高压蒸汽灭菌法
75%酒精擦拭
微生物的纯培养
平板划线法
稀释涂布平板法
微生物的纯培养
平板划线法
平板划线操作中三种灼烧的目的不同
1.蘸取菌液前灼烧
2.每次划线前灼烧
3.划线操作结束后灼烧
避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。
杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。
及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。
注意：
1.蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。
2.菌种只蘸取一次。
稀释涂布平板法
微生物的纯培养
酵母菌的纯培养
思考：
1.马铃薯浸汁为酵母菌生长提供了哪些成分？
2.蔗糖属于该培养基的什么成分？
3.琼脂的作用？
4.琼脂可以作为酵母菌生长的碳源吗？
5.为什么制作棉塞不能用脱脂棉？
培养酵母菌
接种和分离酵母菌
倒平板
灭菌
配制培养基
微生物的纯培养
酵母菌的纯培养
思考：
1.马铃薯浸汁为酵母菌生长提供了哪些成分？
2.蔗糖属于该培养基的什么成分？
3.琼脂的作用？
4.琼脂可以作为酵母菌生长的碳源吗？
5.为什么制作棉塞不能用脱脂棉？
培养酵母菌
接种和分离酵母菌
倒平板
灭菌
配制培养基
顺序 接种操作步骤 分析说明或目的
① 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 __________________________
② 在火焰旁冷却接种环，拔去试管棉塞 ________________
③ 将试管口通过火焰 ___________________________________
④ 将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触斜面顶端 __________________________
将接种环灭菌，避免污染菌种
避免杂菌污染菌种
灼烧灭菌，防止试管口菌体污染培养基
使接种环冷却，避免杀死菌种
⑤ 抽出接种环时，带菌部分不要触及管壁或通过火焰 _________________________________
⑥ 在培养基斜面上由底部向上轻轻划“S”型曲线，但不要将培养基表面划破 初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准
⑦ 将试管口与试管塞通过火焰2～3次，迅速塞紧试管 ____________
⑧ 将接过种的试管，放在恒温箱(37 ℃) 中培养_____ _______________________________
防止菌种沾于管壁，防止菌种
被杀死
防止杂菌污染
培养细菌，观察接种和培养的
结果
巩固练习
巩固练习
1.下列微生物培养过程中,要十分重视无菌操作,现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作,防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是(　　)
A.煮沸消毒可以杀死微生物细胞和一部分芽孢
B.接种操作要在酒精灯火焰附近进行
C.培养基要进行高压蒸汽灭菌
D.加入培养基中的指示剂或染色剂不需要灭菌

解析：煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢,属于消毒,A项正确;为防止空气中杂菌污染,接种时要在酒精灯火焰附近进行,B项正确;培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法,C项正确;加入培养基中的指示剂或染色剂均需灭菌处理,D项错误。
巩固练习
2.将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量的蔗糖和琼脂,用蒸馏水定容后灭菌,得到M培养基。下列有关叙述不正确的是(　　)
A.向培养皿中转移已灭菌的M培养基时,要注意不要黏附在壁上
B.培养细菌时,需要将培养基调至中性偏酸
C.M培养基中的马铃薯浸出液可为微生物提供无机盐
D.将M培养基分装到试管后可以做成斜面培养基,以用于菌种的保存

解析：细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长,B项错误。
巩固练习
3.下表所示为某培养基的配方,下列叙述错误的是 (　　)

成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至1 000 mL 0.1万单位
A.根据物理特征划分,该培养基属于液体培养基
B.微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落
C.根据培养基的配方可知,该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型
D.配制好的培养基可直接使用
巩固练习
解析：液体培养基中加入凝固剂(如琼脂)可形成固体培养基,题表所示的培养基配方中没有凝固剂,因此属于液体培养基,A项正确;
微生物在固体培养基表面生长形成肉眼可见的菌落,在液体培养基表面无法形成菌落,B项正确;
该培养基中的(CH2O)可作为有机碳源,因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型,C项正确;
配制好的培养基需经灭菌后才可使用,D项错误。
巩固练习
4.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，据图分析错误的是( )

A.获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法
B.获得图B效果的接种方法是平板划线法
C.若在纯化土壤细菌时菌液浓度过高，培养基上的菌落可能会连成一片
D.两种接种方式用到的工具相同
巩固练习
5.下列关于微生物培养基种类划分的叙述，错误的是( )
A.培养基按其物理性质可以分为液体培养基和固体培养基
B.培养基按其化学成分可以分为天然培养基和合成培养基
C.培养基按其功能用途可以分为鉴别培养基和选择培养基
D.培养基按其营养构成可以分为含水培养基和无水培养基

巩固练习
6.回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是　　　　　　　　　　　　　　。硝化细菌在没有碳源的培养基上　　　　(填“能够”或“不能”)生长,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　。
(2)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。
(3)使用后的培养基在丢弃前需要经过　　　　处理,这种处理方式可以杀死丢弃物中所有的微生物。
巩固练习
答案：(1)不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同　能够　硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源　(2)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征　(3)高压灭菌
解析：(1)不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同,故通常制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是自养型微生物,可通过化能合成作用利用空气中的CO2作为碳源,故硝化细菌在没有碳源的培养基中能够生长。(2)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征,因此研究人员可根据菌落的特征初步区分微生物的种类。(3)使用后的培养基在丢弃前要进行高压灭菌处理,防止其中的微生物对外界环境产生不利影响。
巩固练习
7.某同学配制含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后,对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌,当培养基温度下降到50 ℃时,在酒精灯火焰附近倒平板,待培养基冷却至室温,按下表处理:
组别 处　　理
A 打开培养皿盖,距地面0.3 m处暴露15 min
B 打开培养皿盖,距地面0.6 m处暴露15 min
C 打开培养皿盖,距地面0.9 m处暴露15 min
D 打开培养皿盖,距地面1.2 m处暴露15 min
E 不打开培养皿盖
巩固练习
将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2~3 d,观察每个培养皿中的菌落特征和数目。回答下列问题。
(1)上述实验的实验目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　。若E组的培养基表面有菌落生长,说明　　　　　　　　　。
(2)培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为微生物生长提供　　 和　　　　　 。“在酒精灯火焰附近”进行相关操作是为了　　　　　　。
(3)实验过程特别强调温度控制,请简要说明下列温控措施的目的。
①“待培养基冷却至室温”的目的是　　　　　　　　　　　。
②“将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养”的目的是　 。
(4)实验结束后,对使用过的培养基应进行　　　　　处理。
巩固练习
答案：(1)探究不同高度空气中微生物的种类和数量　培养基灭菌不合格(受到杂菌污染)　(2)碳源　氮源　避免周围环境中微生物的污染　(3)①使培养基凝固,防止培养基温度过高杀死接种在其上的微生物　②让微生物在适宜的温度下生长(繁殖)　(4)高压灭菌
解析：(1)题述实验中的自变量是打开培养皿盖的培养皿距地面的高度,因此该实验的实验目的是探究不同高度空气中微生物的种类和数量。若E组的培养基表面有菌落生长,说明该培养基灭菌不彻底(受到杂菌污染)。(2)培养基中的牛肉膏主要为微生物生长提供碳源,蛋白胨主要为微生物生长提供氮源。“在酒精灯火焰附近”进行相关操作是为了避免周围环境中微生物的污染。(3)①“待培养基冷却至室温”的目的是使培养基凝固,防止培养基温度过高杀死接种在其上的微生物。②“将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养”的目的是让微生物在适宜的温度下生长(繁殖)。(4)实验结束后,对使用过的培养基应进行高压灭菌处理。

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