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(共20张PPT)
1.2.2 微生物的培养技术及应用
02
无菌技术
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染！
无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括
消毒和灭菌。
02
无菌技术
1.消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
操作的空间、操作者的衣着和手
用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基
生物消毒法：利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物的方法。
-----与消毒最本质区别
2.灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
防止外来微生物污染
避免操作者被微生物感染
芽孢指某些细菌（如芽孢杆菌等）在一定条件下细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。如某些细菌的芽孢煮沸3小时才死亡。每个细菌仅形成一个芽孢。
孢子指细菌、真菌、原生动物和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。正常情况下不需要两两结合就可以由单个细胞直接发育成新个体。
知识拓展
02
无菌技术——消毒
类型 适用范围 操作方法
消 毒
较为温和方法，杀死部分微生物。
煮沸消毒
家庭餐具等生活用品
100℃煮沸5～6min
巴氏消毒
牛奶等不耐高温的液体
62～65℃消毒30min或80-90℃消毒30s-1min
化学药剂消毒
生物活体（皮肤、伤口）、水源等
擦拭等,如用酒精擦拭双手、
用氯气消毒水源
紫外线消毒
紫外线照射30min
接种室、接种箱，超净工作台
在照射前，适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。
煮沸消毒法
巴氏消毒法
化学药剂
紫外线
超净工作台
相关信息（p10）：生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。
02
无菌技术——灭菌
优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。
基本保持培养基的营养成分不被破坏。
注意：
①使用前必须先将锅内冷空气排尽，才能达到预设的压力和温度。
②灭菌完成时，待锅内压力自然降到０时，再打开气阀。
①湿热灭菌：利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方式
高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌法（效果最好）：
100kPa、121℃下维持15-30min。常用于培养基、无菌水等的灭菌。
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。
02
无菌技术——灭菌
②干热灭菌：
干热灭菌箱内160～170 ℃下加热2～3h。
原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和
原生质干燥等。
对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于
玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)
金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌。
干热灭菌箱
02
无菌技术——灭菌
③灼烧灭菌：
效果：最彻底
原理：使微生物燃烧
对象：接种工具如涂布器、接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位
酒精灯火焰灼烧
接种针
接种环
涂布器
4. 防止杂菌污染的措施
（1）实验前：
①对操作空间、操作人员消毒；
②对所用器皿、接种用具和培养基灭菌。
①避免已灭菌处理材料用具与周围物品接触造成污染；
②为避免周围微生物污染，实验操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。
（2）操作时：
P10旁栏思考：
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
还能有效避免操作者自身被微生物感染。
4. 防止杂菌污染的措施
（3）实验后：
使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
连一连：物品所对应的灭菌或消毒方法
培养基
培养皿
接种环
实验操作者的双手
实验室
牛奶
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
化学药剂消毒
紫外线消毒
巴氏消毒法
(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染(　　)
(2)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底(　　)
(3)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用干热灭菌法进行灭菌(　　)
1.判断正误
√
√
×
2.关于消毒、灭菌的方法，下列描述错误的是
A.接种用的无菌操作台要进行灭菌处理
B.用巴氏消毒法处理牛奶是因为高温易破坏牛奶的营养成分
C.煮沸半小时后的凉开水中可能仍含有部分芽孢和孢子
D.先喷洒消毒液，再用紫外线照射可增强消毒效果
√
微生物的纯培养
03
1.培养物：
3.纯培养：
2.纯培养物：
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体。
获得纯培养物的过程就是纯培养。
配置培养基
灭菌
接种
分离
培养
操作步骤：
念珠菌显色培养基
大肠杆菌培养基
酵母菌培养基
金黄色葡萄球菌和枯草杆菌培养基
【探究 实践】
酵母菌的纯培养
1.实验原理：
(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落
(2)单菌落：一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
一个单菌落就是一个种群
单菌落
获得单菌落的方法？
问
①平板划线法 ②稀释涂布平板法
03
【探究 实践】
酵母菌的纯培养
特征：
大小、形状、隆起程度、颜色等
功能：
鉴定菌种的重要依据
单个微生物
固体培养基上
大量繁殖
子细胞群体
单菌落
在相同培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征
03
【探究 实践】
酵母菌的纯培养
接种和分离酵母菌
培养酵母菌
灭菌
倒平板
配制培养基
制备培养基
A、配制培养基
1、制备培养基
03
【探究 实践】
酵母菌的纯培养
1、制备培养基
B.灭菌
03
【探究 实践】
酵母菌的纯培养
1、制备培养基
C、倒平板
待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
以免空气中的杂菌污染培养基
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以使培养基表面的水分更好地挥发。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
（1）培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
（2）整个操作在酒精灯火焰旁附近进行，避免周围环境中微生物的污染。
（3）平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（4）倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
（5）将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
倒平板的注意事项

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