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2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体
植物体细胞杂交
植物细胞融合
植物组织培养
复习回顾
运用植物体细胞杂交技术，可以打破不同种植物的生殖隔离，培育出新的作物类型。那么，有没有技术让不同种动物的体细胞杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？
一.动物细胞融合技术
1、概念：
指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
4、结果：
形成杂交细胞。即融合后形成的原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。
2、原理：
细胞膜的流动性
3、诱导方式
物理法：离心、振动、电激
化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
↓
细胞膜被病毒颗粒穿通
↓
细胞膜连接
↓
细胞核融合，形成杂交细胞
5.过程：
6.意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。
7.应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。
1.“灭活病毒”中灭活的具体含义是什么？
思考：
用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
2.灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
基本原理
融合前处理
诱导方法
用 途
细胞膜的流动性、
植物细胞的全能性
细胞膜的流动性
用纤维素酶、果胶酶去壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散
培育新品种
制备单克隆抗体
物理法：电融合法、离心法
化学法：PEG，高Ca2+ —高PH融合法
电融合法，PEG融合法，灭活的病毒
植物体细胞杂交和动物细胞融合比较
（1）早期获得抗体的方法
____________________________________________
____________________________________________
（2）上述抗体的缺点：
（3）大量制备单一抗体的思路和需解决的问题
向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体
产量低、纯度低、特异性差
每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
单一B淋巴细胞
细胞群
选择
克隆
产生
大量纯度高特异性强的抗体
一个B淋巴细胞不可能无限增殖
1.研究背景
能产生单一的特异性抗体，但不能无限增殖
癌细胞
能在体外大量增殖，但不能产生抗体
动物细胞融合
1.B细胞的特点（优点和局限性）*？
思考1：
2.哪种细胞可以无限增殖？
3.癌细胞的特点（优点和局限性）*？
4.有什么办法能得到既能迅速大量增殖又能产生大量特定抗体的细胞？
（4）单克隆抗体制备思路
一种B淋巴细胞（只产生一种特定抗体）
能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞
动物细胞融合
杂交瘤细胞
动物细胞培养
大量的特定抗体
米尔斯坦
科勒
由于发明了单克隆抗体的制备技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖
注射特定的抗原
多种B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
诱导融合
①未融合的细胞
②多种杂交细胞（包括B-B细胞、瘤-瘤细胞、杂交瘤细胞）
动物细胞融合
2.过程
①未融合的细胞
②多种杂交细胞
杂交瘤细胞
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）
用特定的选择培养基
第一次筛选
克隆化培养、抗体检测
第二次筛选（可进行多次）
注射到小鼠腹腔内
体外培养
获取单克隆抗体
从小鼠腹水中
从细胞培养液中
动物细胞培养
①未融合的细胞②多种杂交细胞
杂交瘤细胞
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）
用特定的选择培养基
第一次筛选
克隆化培养、抗体检测
第二次筛选（可进行多次）
注射到小鼠腹腔内
体外培养
获取单克隆抗体
从小鼠腹水中
从细胞培养液中
注射特定的抗原
多种B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
诱导融合
动物细胞融合
动物细胞培养
（1）该过程中应用到的技术：
（2）原理：
（3）注射特定抗原的目的：
（4）诱导融合的方法：
动物细胞特有的为______________
动物细胞融合、动物细胞培养
细胞膜具有一定的流动性、细胞增殖
用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞
PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
*不是为了得到抗体！
灭活病毒诱导法
思考2：
未融合的亲本细胞
两两融合的细胞
融合的具有同种核的细胞
融合的杂交瘤细胞
B-B细胞
瘤-瘤细胞
只考虑两两融合，诱导融合之后，一定会得到所需的杂交瘤细胞吗？
思考3：
（5）第一次筛选的目的：
（6）如何筛选：
（7）筛选原理：
（8）杂交瘤细胞的特点：
筛选获得杂交瘤细胞
用特定的选择培养基进行筛选
在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长
既能迅速大量繁殖，又能产生抗体
（9）第二次筛选的目的：
（10）如何筛选：
（11）选择抗体检测呈_____性的杂交瘤细胞，即
__________________________________
（12）抗体检测原理：
获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）
阳
分泌的抗体能与特定的抗原结合
抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）
单克隆抗体
筛选二
杂交细胞
杂交瘤细胞
体外或
体内培养
筛选一
骨髓瘤细胞
诱导融合
分泌特异抗体的杂交瘤细胞
杂交瘤细胞群
提取
已免疫的B淋巴细胞
动物细胞融合技术
动物细胞培养技术
既能大量繁殖
又能产生专一抗体
特异性强
灵敏度高
可大量制备
注射抗原
3.小结

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