资源简介

(共18张PPT)
动物细胞工程
-----------动物细胞融合技术和单克隆抗体
类风湿性关节炎（RA）是由免疫细胞的激活引起，释放出一系列细胞因子，通过增加组织蛋白酶的产生和激活破骨细胞而引发关节滑膜炎症的慢性自身免疫性疾病，主要病症为关节软组织肿胀、关节骨损伤。
这一实验结果说明了 ？
为研究RA的发生与细胞因子的关系，研究人员分别测定了多例健康志愿者和RA患者血清中细胞因子的平均含量，结果如下图。
注：肿瘤坏死因子（TNF）：由活化的巨噬细胞、T淋巴细胞等产生的细胞分子（小分子多肽）
白细胞介素--4/10（IL-4/IL-10）：由肥大细胞、嗜碱性粒细胞产生的细胞因子
对照组
症状期
缓解期
资料1：
作为炎症因子的代表 —TNF， 能够激活滑膜成纤维细胞过表达组织蛋白酶，分解骨骼和软骨中的胶原蛋白，进而导致软骨和骨骼破坏关节侵蚀。另外TNF也能激活破骨细胞形成，进而溶解骨质。
请研发一种治疗药物，为患者带来希望。
TNF受体
TNF受体
抗TNF抗体
二、传统的血清抗体制备
抗原
缺陷：产量低、纯度低、且特异性差
反复
注射
动物体内
B淋巴细胞
浆细胞
抗体
Q：如何解决上述缺陷呢？
单一的B淋巴细胞
克隆
B淋巴细胞群
产生
化学性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体
（单克隆抗体）
单个B淋巴细胞寿命有限，大约为3~5天，在体外不能无限增殖
Q:能否培养出一种既能分泌特异抗体，又能在体外大量增殖的细胞？
英国 米尔斯坦
美国 科勒
1975年成功获得单克隆抗体
1984年诺贝尔生理学/医学奖
任务:小组合作，请尝试建构制备
抗TNF单克隆抗体的流程
三、抗TNF单克隆抗体的制备
多种B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
纯化TNF作为抗原
注射小鼠体内
Q：诱导动物细胞融合的常用方法有哪些呢？
物理方法（离心、振动、电激）
化学方法（聚乙二醇）
生物方法（灭活的病毒）
Q:如何筛选杂交瘤细胞
Q:诱导融合后的细胞，是否都是杂交瘤细胞？
未融合的B淋巴细胞
未融合的骨髓瘤细胞
B—B 杂交细胞
瘤—瘤 杂交细胞
B—瘤 杂交瘤细胞
B细胞
骨髓瘤细胞
诱导融合
免疫小鼠
三、抗TNF单克隆抗体的制备
资料2：
已知细胞合成DNA有D(全合成途径)和S（补救合成途径）两条途径，其中D途径能被氨基喋呤（A）阻断。B淋巴细胞中这两种DNA的合成途径都有，但B淋巴细胞不能无限增殖。而鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径， 但它能不断分裂增殖。
任务：请根据以上信息，设计一种方法，从培养液中筛选出杂交瘤细胞。
注：次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）
筛选杂交瘤细胞
Q:如何筛选能产生抗TNF抗体的杂交瘤细胞？
B细胞
骨髓瘤细胞
诱导融合
免疫小鼠
特定的选择培养基
三、抗TNF单克隆抗体的制备
筛选产生抗TNF抗体的杂交瘤细胞
Q：分泌的抗体都是抗TNF的吗？如何检测？
杂交瘤细胞
抗原—抗体杂交技术
TNF
筛选杂交瘤细胞
筛选产生抗TNF抗体的杂交瘤细胞
B细胞
骨髓瘤细胞
诱导融合
免疫小鼠
Q:如何获得大量的单克隆抗体？
特定的选择培养基
抗原-抗体杂交技术
三、抗TNF单克隆抗体的制备
体内培养（注射小鼠腹腔内）
体外培养
抗TNF单克隆抗体
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞
三、抗TNF单克隆抗体的制备
M:GAPDH(广泛分布于各种细胞的一种酶)
1.裸鼠单核细胞全细胞裂解物
2.纯化的TNF蛋白
3.牛单核细胞全细胞裂解物
4.人单核细胞全细胞裂解物
资料3：
研究人员从扩大培养的培养液中，提取抗TNF单克隆抗体与不同抗原进行杂交检测，结果如下图。
实验结果表明，抗TNF单克隆抗体不能与1、3结合，具有 ，可以用于后续TNF所引发类风湿性关节炎等相关疾病的研究.
特异性
资料3：
为验证抗 TNF 单克隆抗体作为治疗药物的效果，研究人员以小鼠为实验对象进行研究。
由上述实验结果分析，抗TNF单克隆抗体是否可以作为治疗RA的一种候选药物_____________，判断依据是_____________。
时间/天数
关节肿胀增加体积
正常鼠+生理盐水
RA模型鼠+抗TNF
RA模型鼠+生理盐水
RA模型鼠+糖皮质激素
血清中TNF水平相对值
注：糖皮质激素是一种治疗RA的药物
任务：
阅读课本P50思考·讨论“单克隆抗体的应用”，查阅收集材料，单克隆抗体的其他应用。

展开更多......

收起↑