资源简介

(共65张PPT)
微生物 代谢类型 生物分类 发酵产品 分布 温度 对氧的需求
乳酸菌
酵母菌
醋酸菌
异养厌氧型
C6H12O6 2C3H6O3(乳酸)+能量
酶
乳制品的发酵、
泡菜的制作
异养兼性厌氧型
C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量
酶
酿酒、制作馒头和面包等
异养需氧型
C6H12O6＋2O2 2CH3COOH＋2CO2＋2H2O
酶
酶
C2H5OH ＋ O2
CH3COOH ＋ H2O
可用于制作各种风味的醋
细菌
原核生物
真菌
真核生物
细菌
原核生物
空气、土壤、植物体表、人或动物的肠道内
30-35℃
18-30℃
常温
前期需氧，
后期不需氧
一直需氧
密闭不需氧
发酵微生物及特点
含糖量较高的水果、蔬菜表面
空气中
微生物的发酵反应式
泡菜制作：
果酒制作：
果醋制作：
第2节 微生物的培养技术及应用
微生物
原核类:
真核类
非细胞类：
细菌、支原体、放线菌、蓝细菌
个体微小、结构简单
酵母菌、霉菌
真菌：
原生生物：
藻类、原生动物类（草履虫)
病毒
◆微生物的共同特点：
念珠藻、颤藻、发菜、蓝球藻
概念：
难以用肉眼观察的微小生物的统称。
相关信息P9
微生物
2.1 微生物的基本培养技术
一、培养基的配制
（一）营养组成
微生物的碳源、氮源、生长因子
（二） 配制原则
（三）培养基的类型和用途
（一）无菌操作的目的
（二）获得纯净培养物的关键
（三）无菌技术：消毒与灭菌
二、无菌技术
三、微生物的纯培养
实验室培养微生物的条件:
研究和应用微生物的前提
——培养基
——无菌技术
1.要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；
2.要确保其他微生物无法混入
3.将需要的微生物分离出来
——纯培养
（发酵工程的重要基础）
——防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物
1、培养基的概念:
3、培养基的类型：
固体培养基
液体培养基
加入凝固剂(如琼脂)
2、培养基的作用:
人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其_________的营养基质。
营养物质
生长繁殖
用以 微生物或 。
积累其代谢物
培养、分离、鉴定、保存
分离、
计数、
鉴定等
不含凝固剂（如琼脂）、呈液体状态的培养基。
呈固体状态的培养基。
一、培养基
① 液体培养基中加入琼脂后制成的 是实验室最常用的培养基之一。
② 微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的 。
注意：凝固剂（如琼脂），不能给微生物提供能量，只起到凝固作用。
液体培养基
琼脂固体培养基
加入琼脂
3、培养基的类型：
琼脂固体培养基
菌落
（2）特征：
大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。
（3）功能：
（1）定义：
鉴定菌种的重要依据
单个或少数同种菌体在固体培养基表面或内部大量繁殖，形成肉眼可见的子细胞群体。
知识补充：菌落
沙门氏菌
毛霉
青霉菌
酵母菌
放线菌
念珠菌
霉菌
酵母菌
一般都含：碳源、氮源、水、无机盐
此外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
(一) 培养基的营养构成
提供所需碳元素的营养物质
(1) 碳源:
无机碳源
有机碳源
例如CO2、CO32-、HCO3-等
例如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等
牛肉膏
—培养自养微生物
—培养异养微生物
作用：① 构成细胞物质和一些代谢产物；② 异养微生物的能源
主要指生长因子
无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等
有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等
提供N元素的营养物质
主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。
(2) 微生物的氮源:
(4) 生长因子:
常见的生长因子：
微生物生长不可缺少的微量有机物。
酶和核酸的组成成分。
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。
(3)无机盐：调节酸碱平衡、维持一定的渗透压
NaCl、 K2HPO4、MgSO4等
牛肉膏、蛋白胨来源于动物,含有糖、维生素和有机氮等营养物质
培养基组分 提供的主要营养
牛肉膏5.0 g 源、 源、磷酸盐和维生素
蛋白胨10.0 g 源、 源和维生素
NaCl 5.0 g ，
琼脂20.0 g /
蒸馏水定容至1 000 mL 水
碳
氮
碳
氮
无机盐
分析下列培养基的营养构成
eg：牛肉膏蛋白胨培养基配方
对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源。
即有些化合物作为营养要素成分时并非单一方面的作用。
并非所有微生物都需添加特殊营养物质
(5) 特殊需求：满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。
④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ；
②培养霉菌时，需要将培养基调至 ；
③培养细菌时，需要将培养基调至 ；
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
思考：所有微生物是否都可以用培养基进行培养
提示:否。病毒是没有细胞结构的微生物，必须在活细胞内寄生并以复制的方式增殖，因此不能用培养基进行培养。寄生类细菌如结核杆菌也不能用培养基培养
4、培养基的营养构成：
(二) 配制原则
（1）目的明确：
（2）营养协调：
（3）pH值适宜：
有机碳源
异养型：
根据微生物的种类、培养目的选择原料
自养型：
不加碳源
加入缓冲剂
（无机碳源：CO2 、NaHCO3 ）
细菌为7.2-7.6，真菌为5.0-6.0，培养不同微生物所需pH不同
浓度和比例适宜
液体培养基
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
半固体培养基
无动力
有动力(弥散)
固体培养基：菌落
1、按物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基
(三) 培养基的类型和用途
是否运动
加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基： 分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物
2、按功能分： 选择培养基 鉴别培养基
3、按成分分： 天然培养基
合成培养基
鉴别培养基: 伊红美蓝培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在
大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，菌落被染成深紫色，
从菌落表面可以看到金属光泽。
选择培养基
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
功能
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产、连续培养
观察微生物的运动、
分类鉴定
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
微生物分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
天然培养基
合成培养基
鉴别培养基
拓展延伸：培养基的类型及功能
【典例解析】
例：关于微生物营养物质的叙述中，正确的是( )
A. 是碳源的物质不可能同时是氮源 B. 凡碳源都提供能量
C. 除水以外的无机物只提供无机盐 D. 无机氮源也能提供能量
D
含C、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能量
CO2是自养微生物的碳源，但不提供能量。
碳源
有机碳源：
无机碳源：
异养微生物
自养微生物
能量
CO2
硝化细菌：NH3—HNO2—HNO3 (释放化学能)
氮源
有机氮源：
无机氮源：
普通微生物
固氮微生物
能量
NH3 （可为硝化细菌提供能量）
主要营养物质 碳源 氮源
光能自养型 微生物 无机盐 可来自大气中的CO2 含氮无机盐，eg，硝酸盐
化能自养型 微生物 无机盐 可来自大气中的CO2 NH3 （可为硝化细菌提供能量）
异养型微生物 有机物 含碳有机物(提供能量) 有机氮源(主要)
(提供能量)
固氮微生物 有机物 含碳有机物(提供能量) N2
2、下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养自养微生物还是异养微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量/g 0.4 4.0 0.5 0.5 100 mL
此培养基可用来培养自养型微生物。圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供有机碳源，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。
3、培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？
不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。
无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括_____和_____。
消毒
灭菌
消毒
灭菌
二、无菌技术
（二）获得纯净培养物的关键：
（一）无菌操作的目的：
获得纯净的培养物
防止外来杂菌的污染
自学任务：阅读教材P10-11，回答以下问题：
1、消毒和灭菌的定义分别是什么？
2、常用的消毒和灭菌方法分别有哪些？
3、每种消毒方法的适用对象是什么？
4、每种灭菌方法的适用对象是什么？
（三）无菌技术：消毒与灭菌
1、消毒与灭菌的概念
（1）消毒：
（2）灭菌：
以强烈化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、孢子，而达到完全无菌的过程。
利用温和化学、物理、或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物
原理：
通过理化手段，使微生物的蛋白质、核酸变性，从而失去生命活性
操作的空间、操作者的衣着和手
用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基
相关信息（p10）：生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。
有些细菌（如芽孢杆菌等）在一定条件下细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体 。芽孢的壁很厚，对干旱、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。如某些细菌的芽孢煮沸3小时才死亡。每个细菌仅形成一个芽孢。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞，正常情况下不需要两两结合就可以由单个细胞直接发育成新个体。
芽孢
孢子
划分标准 消毒 灭菌
作用强度
作用程度
芽孢和孢子
适用对象
常用方法
2、两种无菌技术的比较
强烈的理化因素
杀死物体内外所有的微生物
能杀灭
操作工具、玻璃器皿、培养基等
实验操作空间、活体生物材料、操作者的双手和衣着
较为温和的理化因素
杀死物体表面和内部的部分微生物
一般不能杀灭
煮沸消毒法、巴氏消毒、
化学药剂消毒、紫外线消毒
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
方法 条件 适用范围
煮沸消毒法
巴氏消毒
化学药剂消毒
紫外线消毒
接种室内空气、接种箱、超净工作台
用紫外线照射30min
实验者的手臂、实验台等
75%酒精、氯气、
石炭酸、煤酚皂溶液
牛奶,啤酒等不宜高温消毒灭菌的食品
62-65℃，30min 或
80-90℃，30s-1min
日常食物、罐装食品
100℃，5-6min
3消毒
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。
注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
高压蒸汽灭菌（效果最好）：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121 ℃下维持15-30min。）
① 湿热灭菌：利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方式
优点：可以杀灭所有的生物，基本保持培养基的营养成分不被破坏。
对象：培养基等。
4、灭菌
对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于
玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)
金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌
② 干热灭菌：干热灭菌箱内160-170 ℃下加热2-3h
③ 灼烧灭菌：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
优点：可迅速彻底灭菌
对象：接种工具如接种环,接种针,涂布器,以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位
干热灭菌箱
接种针
接种环
涂布器
4、灭菌
灭菌方法 适用对象 所需条件 灭菌时间
灼烧灭菌
干热灭菌
湿热灭菌 （高压蒸汽灭菌）
4
灭菌
15-30min
100kPa，121 ℃
培养基、实验器材
2-3h
干热灭菌箱（160℃-170 ℃ ）
耐高温需干燥的物品（玻璃器皿、金属用具等）
烧红
酒精灯火焰充分燃烧层灼烧(外焰)
接种的工具（接种环、接种针）、试管口、瓶口
灼烧灭菌
干热灭菌箱
高压蒸汽灭菌锅
两个方面：
对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒
培养细菌用的培养基与培养皿
试管、烧瓶、吸管和接种环等进行灭菌
还要注意：
① 消毒和灭菌后，避免已经灭菌的材料用具
与周围物品接触；
② 为了避免周围环境微生物污染，操作应在
超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。
超净工作台
消毒:
灭菌:
③使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，
以免污染环境。
5、防止杂菌污染的措施
旁栏P10：无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？
无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。
无菌技术应围绕着如何避免杂菌污染展开。
无菌技术的作用：①防止实验室的培养物被其他外来微生物污染
②有效避免操作者被微生物感染
培养基的类型
培养基的营养物质
消毒
灭菌
微生物的实验室培养
【课堂回顾】
培养基
无菌技术
按物理性质划分
按组成成分划分
按功能划分
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素(如乳酸杆菌)、碱基等
煮沸消毒
巴氏消毒
紫外线消毒
化学药剂消毒
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
不耐高温的液体（牛奶）
接种室、超净工作台
培养皿.吸管等玻璃器皿耐高温、需保持干燥的物品
接种环等金属工具
实验操作者的双手
培养基
家庭餐具等生活用品消毒
a.煮沸消毒法
b.巴氏消毒法
c.化学药剂消毒
d.紫外线消毒
e.灼烧灭菌
f.干热灭菌
g.高压蒸汽灭菌
巩固练习：将以下器具、物品或对象与所采用的消毒或灭菌方法连线
教材中的隐性知识　
源于选修1 P85 附录4“高压灭菌的操作方法”
(1) 灭菌桶装入待灭菌物品不要装太挤的原因是
_____________________________________。
(2) 加热灭菌锅时应打开排气阀，目的是 ，
之后，才能关上排气阀。
避免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果
排除锅内冷空气
牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，
这两种方法的优点是________________________________________。
在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，
还有什么目的？
无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
传统发酵通常直接利用原材料中天然酵母菌
工业生产通常使用人工选育的高活性酿酒酵母
如何获得纯种酵母菌？
三、微生物的纯化培养
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
配方、步骤、倒平板
（二）微生物的分离与纯化技术
平板划线法
稀释涂布平板法
（三）结果分析与评价
（四）菌种的保藏
接种
灭菌
培养
纯培养物：
纯培养：
培养物：
将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体。
获得纯培养物的过程。（获得单菌落）
配制培养基
分离
操作步骤：
大肠杆菌培养基
酵母菌培养基
金黄色葡萄球菌和枯草杆菌培养基
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
① 菌落：
② 获得单菌落的方法：
采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
酵母菌的纯培养
③原理：
探究-实践
平板划线法、稀释涂布平板法
单菌落：单个微生物繁殖形成的菌落
④方法步骤
1、制备培养基
1)配制培养基
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。
2)灭菌
3)倒平板
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
培养基：
培养皿：
用高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌
在干热灭菌箱内干热灭菌
酵母菌的纯培养
包牛皮纸
1. 避免因水蒸气凝结而浸湿棉塞。
2. 避免再次污染
倒平板的具体步骤：
酵母菌的纯培养
探究-实践
1.拔出锥形瓶的棉塞
2.将瓶口迅速通过火焰
3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖
4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
不能完全打开，以免杂菌污染培养基。
目的：可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
倒平板注意事项：
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
1、培养基灭菌后，为什么需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板
＞50℃，烫手
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落产生以确定是否被污染。
3、怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
2、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
因为平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,平板倒置后,既可防止培养基表面的水分过快挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基
问题讨论:
＜50℃，若不及时操作，琼脂就会凝固
倒平板操作注意事项
培养基冷却到50°左右开始倒平板。温度过高会烫手，温度过低培养基会凝固。
使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰，目的是灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。
平板冷凝后要将平板倒置。因为平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，培养基表面的湿度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
2、接种和分离酵母菌
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
分散或稀释
生长繁殖
连续划线法
分区划线法（最常用）
（1）“平板划线”操作方法：
平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次画线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
(2)“平板划线”实验操作步骤
7.灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。
1.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
2.在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。
3.将试管口通过火焰。
4.将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 。
5.将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
6.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基！
否则难以达到分离单菌落的目的
平板划线的操作方法
划3个平板
1个不划线
（重复实验）
（空白对照）
注意：划线用力要适宜，防止用力过大划破培养基
1. 会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2.存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
3、培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h。
作对照，若未接种的平板无菌落生成，说明培养基没有污染
可防止培养基表面的水分挥发；也可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
思考1：为什么培养酵母菌时要将平板倒置？
思考2：为什么要同时放入未接种的平板？
分区划线法
1
2
3
4
5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次②划线首尾不能相接(最后一次不要与第一次相连)
③每次划线前接种环进行灼烧灭菌
④划线后，培养皿倒置培养
(3)平板划线法注意事项:
思考：若完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？
划线区域有5个，接种环灼烧灭菌次数是6次
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？
在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
问题讨论
项目 目的
沾取菌液前灼烧
每次划线前灼烧
划线操作结束后灼烧
避免接种环上可能存在的微生物污染菌种
杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端
及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。
随划线次数的增加，菌种的数目减少，以便得到菌落
（2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
（3）在作第二次以及其后的划线操作时，为 什么总是从
上一次划线的末端开始划线？
划线末端细菌的数目比较少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终分散成单个细菌。
(4) 为什么最后一次划线不能与第一次划线相连？
最后一次划线已经将酵母菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则增加了酵母菌的数目，达不到纯化的效果。
酵母菌的纯培养
2.接种和分离酵母菌
课堂小结
1.制备培养基
3.培养酵母菌
①配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水）
②灭菌
③倒平板（在酒精灯火焰附近操作）
培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅）
培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅）
用接种环在固体培养基上用平板划线法接种
平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱培养
有一段时间，水果“酵素”风靡各地。水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器,再加入糖和水,密封,置于阴凉处发酵一至两周。有人说,吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。
评估论点的可信程度
思维训练
水果“酵素”是什么？
其制作原理是什么？
其中可能含有哪些成分？
其是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？
其中的所有成分都有益于人体健康吗？
“酵素”就是“酶”的另一种说法。
其制作是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。
其中可能有糖类(包括一些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分。
不存在它独有的、特殊的营养物质。
其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。
因此，此论点值得怀疑。
一、概念检测
1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。
（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ）
（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。（ ）
（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ）
×
√
×
练习与应用（P14）
2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存等。
干制——降低食品的水分含量；
腌制——通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；
低温储存——通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
二、拓展应用
1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
练习与应用（P14）
(1) 这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有______________。
培养皿和培养基
(2) “将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？
接种
（3）从实验结果来看,洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用
什么方法来避免手上微生物的污染？
通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。
可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
2.某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min， 230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
（1）摇床转速不同,意味着培养条件有什么不同？
二、拓展应用
意味着培养液中O2含量不同。
练习与应用（P14）
（2）从图中数据你可以得出什么结论 其原因是
什么
培养液中02含量越高,酵母菌种群密度越大。
（3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌
的种群密度基本达到稳定
营养物质和生存空间有限。这时候已经达到了环境容纳量。
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
2、稀释涂布平板法
a. 梯度稀释菌液：
6支试管，分别加入9ml无菌水
用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。
b. 涂布平板操作
(1) 涂布器浸在盛有酒精的烧杯中
(2) 取少量菌液(<0.1ml)滴加到
培养基表面
(3) 将沾有少量酒精的涂布器在火
焰上引燃，待酒精燃尽后，
冷却8-10s
(4) 用涂布器将菌液均匀涂布在培
养基表面，涂布时可转动培养
皿，使菌液分布均匀
(1)
(2)
(3)
(4)
（5）培养：
将接种后的培养基和一个未接种的培养基
放入37℃恒温箱中培养12h-24h后
观察并记录
各梯度分别涂布3个平板
1个不涂布作空白对照
共10个平板
稀释103倍
稀释105倍
稀释104倍
空白对照
优点
缺点
共同点
平板划线法 稀释涂布平板法
固体培养基；无菌操作；形成单个的菌落；都可观察菌落特征
观察菌落特征，纯化菌种
可以计数，可以观察菌落特征
不能计数
操作复杂，需要涂布多个平板
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同
1、培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1-2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
2、接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
3、是否进行了及时细致的观察与记录
（三）结果分析与评价
教材中的隐性知识　
源于选修1 P18“旁栏小资料”
(1) 微生物的接种方法除平板划线法和稀释涂布平板法外，
还包括 接种、 接种等方法。
(2) 微生物接种的核心是 。
斜面
穿刺
防止杂菌污染，保证培养物的纯度
主要方法 临时保藏法 甘油管藏法
保藏对象
方法步骤
长期保存的菌种
频繁使用的菌种
4℃
1ml甘油(灭菌)＋1ml菌液
-20℃
试管固体斜面培养基上
四、菌种的保藏
保存到时间不长
菌种易被污染、变异
研究小组用琼脂扩散法测定玫瑰精油对手机表面细菌的抑制情况。
该方法的操作步骤如下：首先制备牛肉膏蛋白胨平板，用涂布器将5种细菌分别
接种到5个平板上，得到细菌平板。然后制备直径为5 mm的滤纸圆片，采用
_____灭菌法处理，将灭菌的滤纸片分别放入____________________________中
浸泡10 min，后将滤纸片放在5个细菌平板表面。最后将平板放入___________中倒置培养48小时。通过测量________________来检测玫瑰精油对5种细菌的抑制效果。
干热　
适宜浓度的玫瑰精油和无菌水
恒温培养箱
透明圈的直径
(抑菌圈的直径)

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