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(共37张PPT)
一 微生物的基本培养技术
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事例屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。
从社会中来
微生物
类群
原生生物：
原核生物:
真菌:
病毒:
如酵母菌、霉菌等
单细胞的真核生物
如草履虫、硅藻等
无细胞结构
真核细胞
如乳酸菌、大肠杆菌、醋酸菌等
如噬菌体等
①提供合适的营养和环境条件。
②防止杂菌污染，并将所需要的微生物分离出来。
在实验室培养微生物的关键：
一、培养基的配制
【自主探究】请结合教材P9-10面，思考这些问题的答案。
1.培养基的用途有哪些？
2.培养基的必备营养成分有哪些？
3.配制培养基时，如何满足不同微生物的特殊需求？举例说明。
4.培养基的种类有哪些？
2.培养基的必备营养成分:
水、碳源、氮源、无机盐等。
⑴碳源
无机碳源：
有机碳源：
CO2、NaHCO3
糖类、脂肪酸、牛肉膏、蛋白胨等
⑵氮源
无机氮源：
有机氮源：
主要是铵盐、硝酸盐，还有N2和NH3
牛肉膏、蛋白胨、尿素等
自养微生物
（提供碳元素）
（提供氮元素）
来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质
异养微生物
一、培养基的配制
1.培养基的用途：
培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
P10旁栏思考1：为什么培养基需要氮源？
氮是微生物合成蛋白质、核酸等物质必须的元素。
特殊营养物质、pH、氧气
特殊营养物质：指某些微生物生长必不可少的微量有机物。例如牛肉膏、蛋白胨、酵母膏中含有维生素。
举例说明：
培养乳酸菌需要添加维生素
培养霉菌时需将PH调至酸性，培养细菌时将PH调至中性或微碱性
培养厌氧微生物时需要提供无氧条件
一、培养基的配制
3.培养基的“个性定制”：
培养基组分及含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
H2O 定容至1000ml
【例】某种常见的细菌培养基——1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
碳源、磷酸盐和维生素等
氮源和维生素等
无机盐
水
又称肉汤培养基，用于培养细菌
思考：上述培养基中主要提供碳源和主要提供氮源的物质各是什么？
　主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。
培养基还需满足微生物对pH、特殊营养物质以及O2的需求
④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ；
②培养霉菌时，需要将培养基调至 ；
③培养细菌时，需要将培养基调至 ；
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
【补充】生长因子：微生物生长必不可少、需求量很少的物质；某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。
目的要明确；营养要协调；pH要 适宜。
培养基的配制原则
举例：1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
培养基组分 提供的主要营养
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
Nacl 5g
H2O 定容至1000ml
碳源、磷酸盐和维生素等
氮源和维生素等
无机盐
水
一、培养基的配制
思考：上述培养基中主要提供碳源和主要提供氮源的物质各是什么？
　主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。
(1)用于发酵的微生物主要指细菌和真菌(　　)
(2)培养基中加入琼脂的目的是提供碳源(　　)
(3)所有微生物在培养时，培养基中都需加入氮源(　　)
(4)培养不同微生物的培养基成分完全一样(　　)
判断正误
√
×
×
×
3.(2021·四川成都月考)如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是
1
2
3
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5
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成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万
单位
A.根据物理性质划分，该培养基属于液体培养基
B.该培养基不能用于培养大肠杆菌
C.根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异
　养型
D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基
√
解析　固体培养基和液体培养基的区别在于是否加入凝固剂(如琼脂)，题表所示的培养基配方中没有琼脂，因此属于液体培养基，A正确、D错误；
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成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万
单位
加入青霉素会抑制细菌的生长繁殖，B正确；
该培养基中的(CH2O)可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C正确。
01
培养基的配制
1.培养基概念：
3.培养基常见类型：
2.培养基作用：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
固体
培养基
液体
培养基
如，琼脂
分离、
计数、
鉴定等
扩大培养
工业生产
长有酵母菌菌落
盛有液体培养基
有、无添加凝固剂
琼脂是一种从红藻中提取的多糖
琼脂在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，在常规培养条件下呈现固态。
固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
拓展：培养基的类型
划分 培养基种类 特点 用途
物理 性质
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产
观察微生物的运动、分类鉴定。
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
容器放倒不致流出，剧烈震动则破散
固体培养基：菌落
单个微生物在琼脂固体培养基上大量繁殖时，就会在培养基表面或内部形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
一个菌落就是一个种群
菌落是鉴定菌种的重要依据
菌落
单个或少数同种菌体在固体培养基上大量繁殖，形成肉眼可见的子细胞群体。
1.定义：
2.特征：
大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。
3.功能：
菌落是鉴定菌种的重要依据。
[知识补充]
划分 培养基种类 特点 用途
化学 成分来源
用途 功能
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂，用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
天然培养基
合成培养基
鉴别培养基
拓展：培养基的类型
用已知成分的化学物质配制
【注意】病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能利用人工培养基来培养。
4.培养基种类：
①按物理状态来分：可分为固体培养基、液体培养基等。
②按功能来分：可分为完全培养基、选择培养基、鉴别培养基等。
选择培养基：在微生物中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。（教材16页第2段）
*鉴别培养基：在成分中加入能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只需用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基。
一、培养基的配制
二、无菌技术
【自主探究】请结合教材P10-11面，思考下列问题：
1.获得纯净培养物的关键是什么？
2.消毒和灭菌的区别是什么？
3.为了防止杂菌污染，具体措施有哪些？（四个方面）
4.如何针对不同的作用对象选择合适的消毒/灭菌方法？
——防止外来杂菌的入侵
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
较为温和理化方法，杀死部分微生物
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
二、无菌技术
1.消毒：
指使用较为 的物理、化学或生物等方法杀死物体 或内部 微生物。
温和
表面
一部分
消毒方法 主要方法 应用范围
煮沸 消毒法 家庭餐具等生活用品
巴氏 消毒法 牛奶、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体
（2）消毒的主要方法及应用范围
100 ℃煮沸5～6 min
62～65 ℃ 消毒30 min
或80～90 ℃处理30 s～1 min
（1）概念：
消毒方法 主要方法 应用范围
紫外线 消毒 接种室、接种箱
或超净工作台
消毒方法 主要方法 应用范围
化学 药剂 消毒 皮肤、伤口、动植物组织表面消毒、空气、手术器械、塑料或玻璃器皿
30 W紫外灯照射30 min
（损伤细菌的DNA）
以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，先适量喷洒石炭酸（苯酚）或煤酚皂溶液等消毒溶液以加强消毒效果。
用体积分数为70%～75%的乙醇、碘酒
用氯气消毒水源
2.防止杂菌污染的措施：
P10旁栏思考2：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
还能有效避免操作者自身被微生物感染。
实验前：
对操作空间、操作人员消毒
对所用器皿、接种用具和培养基灭菌
操作时：
在超净工作台上并在酒精灯火焰附近无菌区操作
避免已灭菌处理材料再次污染
二、无菌技术
一下物品所采用的灭菌或消毒方法依次是
培养基
培养皿
接种环
实验操作者的双手
实验室
牛奶
湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
干热灭菌
灼烧灭菌
化学药剂消毒（酒精）
紫外线消毒
巴氏消毒法
4.无菌技术的具体内容
（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和 。
（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。
（3）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 接触。
（4）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 并在 附近进行。
消毒
灭菌
周围的物品
酒精灯火焰
超净工作台上
纯培养物：
纯培养：
培养物：
将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体称为培养物。
有单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
获得纯培养物的过程就是纯培养。
配制培养基
灭菌
接种
分离
培养
操作步骤：
念珠菌显色培养基
大肠杆菌培养基
酵母菌培养基
金黄色葡萄球菌和
枯草杆菌培养基
03
微生物的纯培养
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
1.菌落：
2.纯培养物：
采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
03
微生物的纯培养
酵母菌的纯培养
3.原理：
1．制备培养基
配制培养基
灭菌
倒平板
培养基灭菌：高压蒸汽灭菌——121℃，气压100kPa，15-30min
培养皿灭菌：干热灭菌——160~170 ℃ ，灭菌2h
酵母菌的纯培养
1）配制培养基
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml.
2）灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h.
倒平板
待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
倒平板注意事项：
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
酵母菌的纯培养
平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，
①既可以防止培养基表面的水分挥发，
②又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
平板划线法
酵母菌的纯培养
平板划线法和稀释涂布平板法。
2.接种和分离酵母菌
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。
①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红
②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。
⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞
③试管口通过火焰
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。
酵母菌的纯培养
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
1
2
3
4
5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次
②划线首尾不能相接
③每次划线前接种环进行灭菌
④划线后,培养皿倒置培养
平板划线法注意事项:
思考：若完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，以
防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免
污染环境。
作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染
既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
3.培养酵母菌
酵母菌的纯培养
结果分析与评价：
1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
提示：在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。
提示：如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
酵母菌的纯培养
培养基的类型
培养基的营养物质
常用的消毒方法
常用的灭菌方法
微生物的基本培养技术
培养基
无菌技术
煮沸消毒
巴氏消毒
化学药物消毒
紫外线消毒
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）等
按物理性质划分
按化学成分划分
按目的用途划分
课堂总结

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