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2024年高考生物复习-选择性必修3 生物技术与工程（新高考专用）
1． (2023·江苏·高考真题)研究者通过体细胞杂交技术，探索利用条斑紫菜和拟线紫菜培育杂种紫菜。下列相关叙述正确的是(　　)
A．从食用紫菜的动物消化道内提取蛋白酶，用于去除细胞壁
B．原生质体需在低渗溶液中长期保存，以防止过度失水而死亡
C．检测原生质体活力时可用苯酚品红或甲紫溶液处理，活的原生质体被染色
D．聚乙二醇促进原生质体融合后，以叶绿体颜色等差异为标志可识别杂种细胞
回归教材01 植物体细胞杂交技术是指：将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁。
2．(2023·河北·高考真题)为筛选能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，下列相关实验设计错误的是( )
A．从酸奶和泡菜中采样分离乳酸菌
B．平板倒置培养为筛选乳酸菌创造无氧环境
C．对目的菌株进行胆固醇降解能力的测定
D．检测目的菌株对消化道环境的耐受力
回归教材02 筛选目的菌株应从富含目的菌的环境中去取样。倒平板后及平板微生物培养时需要倒置培养，微生物初步筛选后还要进行相关实验以检测目的菌的发酵能力或特性。
3． (2023·辽宁·高考真题)细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度(菌落数/m )。下列叙述错误的是( )
A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理
B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置
C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值
D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高
回归教材03 稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
4．(2023·重庆·高考真题)某小组通过PCR(假设引物长度为8个碱基短于实际长度)获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切(下图)，再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是( )
A．其中一个引物序列为5＇TGCGCAGT-3＇
B．步骤①所用的酶是SpeI和CfoI
C．用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2个片段
D．酶切片段和载体连接时，可使用E．coli连接酶或T4连接酶
回归教材04 E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端；T4DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。
5．(2023·辽宁·高考真题)大量悬浮培养产流感病毒的单克隆细胞，可用于流感疫苗的生产。下列叙述错误的是( )
A．悬浮培养单克隆细胞可有效避免接触抑制
B．用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清
C．当病毒达到一定数量时会影响细胞的增殖
D．培养基pH不会影响单克隆细胞的病毒产量
6．(2023·山东·高考真题)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是( )
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
回归教材06 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。属于灭菌。消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
7．(2023·广东·高考真题)“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是( )
A．裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质
B．分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等
C．沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度
D．鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色
回归教材07 向试管中各加入适量的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，溶液呈现蓝色。
8． (2023·广东·高考真题)科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。此过程不涉及的操作是( )
A．超数排卵 B．精子获能处理
C．细胞核移植 D．胚胎培养
回归教材08 体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。
9．(2023·浙江·高考真题)以哺乳动物为研究对象的生物技术已获得了长足的进步。对生物技术应用于人类，在安全与伦理方面有不同的观点，下列叙述正确的是( )
A．试管婴儿技术应全面禁止
B．治疗性克隆不需要监控和审查
C．生殖性克隆不存在伦理道德方面的风险
D．我国不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验
回归教材09 生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。
10．[多选](2023·山东·高考真题)果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有( )
A．都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理
B．都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖
C．发酵前都需要对原料进行灭菌
D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期
回归教材10 果酒与啤酒的发酵原理均是酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精。
11．(2024·浙江·高考真题)某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。下列叙述错误的是( )
A．①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离
B．②加培养液的目的是促进细胞增殖
C．③分装时需调整到合适的细胞密度
D．整个过程需要在无菌、无毒条件下进行
回归教材11 贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集。之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。
12．(2023·天津·高考真题)多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体 才能获得后代。下图列举了几项技术成果。
下列叙述正确的是 ( )
A．经胚胎移植产生的后代与受体均保持一致
B．①需获得MII期的去核卵母细胞
C．②能大幅改良动物性状
D．③可通过②技术实现扩大化生产，①②可通过③技术实现性状改良
回归教材12 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物。
13．(2023·山东·高考真题)利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是( )
A．利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物
B．植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产
C．次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养
D．该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量
回归教材13 由于植物细胞的次生代谢物含量很低，从植物组织提取会大量破坏植物资源，有些产物又不能或难以通过化学合成途径得到，因此人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产。
14．(2023·北京·高考真题)自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。
(2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊(如图)，表明 。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现 。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。
(4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证(主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱) 。
回归教材14 微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。微生物的培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
15． (2023·全国·高考真题)GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以GFP基因为材料，利用基因工程技术获得了能发其他颜色荧光的蛋白，丰富了荧光蛋白的颜色种类。回答下列问题。
(1)构建突变基因文库，科研人员将GFP基因的不同突变基因分别插入载体，并转入大肠杆菌制备出GFP基因的突变基因文库。通常，基因文库是指 。
(2)构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因(均为突变基因)构建表达载体，其模式图如下所示(箭头为GFP突变基因的转录方向)。图中①为 ；②为 ，其作用是 ；图中氨苄青霉素抗性基因是一种标记基因，其作用是 。
(3)目的基因的表达。科研人员将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达，发现大肠杆菌有的发绿色荧光，有的发黄色荧光，有的不发荧光。请从密码子特点的角度分析，发绿色荧光的可能原因是 (答出1点即可)。
(4)新蛋白与突变基因的关联性分析。将上述发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后，对其所含的GFP突变基因进行测序，发现其碱基序列与GFP基因的不同，将该GFP突变基因命名为YFP基因(黄色荧光蛋白基因)。若要通过基因工程的方法探究YFP基因能否在真核细胞中表达，实验思路是 。
回归教材15 基因表达载体的构建是基因工程的核心。其中心内容是使目的基因与运载体结合，形成重组运载体，最后通过重组运载体将目的基因导入受体细胞。基因表达载体的构建过程
(1)用一定的限制酶切割载体，使其出现一个黏性末端(或平末端)的切口。
(2)用限制酶切割目的基因，产生与载体一样的黏性末端(或平末端)。
(3)将切下的目的基因片段与载体混合，再加入适量DNA连接酶，使载体与目的基因结合成重组DNA分子
1．比较果酒与果醋制作的过程
2．有关发酵工程的几点注意
(1)性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得。
(2)发酵工程所用的菌种大多是单一菌种。
(3)发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵。
(4)如果发酵产品是微生物菌体，可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥得到产品；如果发酵产品是微生物的代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。
(5)发酵工程的产品主要包括微生物的代谢产物、酶及微生物的菌体。
3．生长素与细胞分裂素在植物组织培养中的作用关系植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
①在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。
②生长素与细胞分裂素同时使用时会因比值不同而效果不同。当比值高时，有利于根的分化而抑制芽的形成；当比值低时，有利于芽的分化而抑制根的形成：当比值适中时，促进愈伤组织的形成。
4．动物细胞培养和植物组织培养的比较
项目 动物细胞培养 植物组织培养
理论基础 细胞增殖 植物细胞的全能性
培养前处理 无菌：用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理使组织分散成单个细胞 无菌、离体
取材 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 植物幼嫩的部位或花药等
培养基性质 液体 固体
培养基成分 糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等 水、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和琼脂等
结果 细胞培养产生大量细胞不形成新个体 可产生新个体
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产 快速繁殖、作物脱毒、细胞产物的工厂化生产和单倍体育种等
相同点 ①都需人工条件下的无菌操作；②都需要适宜的温度、H等条件；③都进行有丝分裂，都不涉及减数分裂
5．与植物原生质体融合相比，动物特有的诱导细胞融合的方法是用灭活的病毒作为诱导剂。
6．比较制备单克隆抗体过程中的两次筛选
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选原因 诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞也有很多种
筛选方法 用特定的选择培养基筛选未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长 用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
筛选目的 得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
7．胚胎移植归纳总结
(1)超数排卵使用的激素是 促性腺激素 。
(2)用于胚胎移植的早期胚胎是 桑椹胚或囊胚。
(3)良种牛的后代的遗传特性是由供体公牛和供体母牛决定的。
(4)胚胎工程的最后一道“工序”是胚胎移植。
(5)胚胎移植的方法有非手术法和手术法。
(6)冲卵把供体子宫内的胚胎冲洗出来。且胚胎分割的次数不宜过多；但一次给受体动物植入多个胚胎，可增加双胞胎和多胞胎的比例
8．PCR技术和DNA复制的比较
体内复制 PCR技术
解旋 在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开 加热到94℃，双链全部解开不需解旋酶
引物 一小段RNA 一般用DNA片段
DNA聚合酶 细胞自身的DNA聚合酶(不耐高温) Taq酶
复制特点 半保留复制，边解旋边复制，多起点复制 半保留复制，完全解旋后复制从模板链的一端开始复制
复制的方向 子链的5'端向3'端延伸 子链的5'端向3”端延伸
1．(2024·河北沧州·一模)关于发酵及发酵工程的叙述，正确的是( )
A．进行果酒或泡菜发酵时，发酵装置均要留出1/3空间，防止发酵菌种无氧呼吸产生CO2引起发酵液溢出
B．传统发酵利用的菌种是天然的混合菌种，发酵工程利用的则是经基因工程或诱变育种后选育的单一菌种
C．利用发酵工程生产啤酒时，需对培养基和发酵设备进行灭菌，且发酵过程要严格检测和控制发酵条件
D．发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物，不包括酶及菌体本身
2．(2024·福建·三模)在分离、纯化细菌的实验中，划线接种(甲)及培养结果(乙)如图所示，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述正确的是( )
A．实验所用培养基一般用干热灭菌法进行灭菌
B．为了防止杂菌污染，接种环灼烧后立即蘸取菌液进行划线
C．图中d区域的划线操作是从c区域划线的末端开始的
D．图示划线接种过程中至少需要对接种环灼烧5次
3．(2024·河北·模拟预测)我国北方地区冬春季温度低，常温条件下筛选的纤维素分解菌难以发挥作用。研究人员从河北滨海区低温土壤中分离筛选纤维素酶活性较高的菌株，构建复合菌系，以期为北方低温地区秸秆的资源化利用提供菌种资源。下表为CMC培养基的配方，其中CMC—Na是天然纤维素的衍生物。已知刚果红能与纤维素形成红色复合物。下列叙述正确的是( )
组分 CMC-Na (NH4)2SO4 K2HPO4 MgSO4 7H2O KH2PO4 蛋白胨 酵母膏 加水定容至
含量 10g 4g lg 0.5g 1g lg 1g 1000mL
A．该培养基属于选择培养基，其中能提供氮源的物质为(NH4)2SO4
B．配置CMC固体培养基时，还需加入琼脂，且应先灭菌再调pH
C．CMC培养基应在压力为100kPa、温度为121℃的条件下灭菌15～30min
D．向CMC培养基中加入刚果红后，菌落直径/透明圈直径的值越大的菌分解纤维素的能力越强
4．(2024·广西·二模)由于某目的基因酶切后的末端为平末端， 载体E只有产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P 将目的基因接入载体E。据图分析， 下列叙述正确的是( )
A．通过 PCR 扩增获取目的基因是基因工程的核心工作
B．为了便于该目的基因接入载体E，可用限制酶 EcoRV 或SmaI切割载体P
C．载体P不能作为基因表达载体，是因为其没有表达该目的基因的启动子与终止子
D．若受体细胞表现出抗性基因的相应性状，表明重组载体成功导入受体细胞
5．(2024·浙江绍兴·二模)2023年，中国科学家成功地在猪胚胎中培育出含有人细胞的肾脏。科学家先利用基因编辑技术获得免疫缺陷猪胚胎，再将经特殊处理的人干细胞注入猪胚胎的特定位置，并将胚胎移入代孕母的子宫内进行培养，最终培育出拥有70%人细胞且功能正常的肾脏。下列叙述正确的是(　　)
A．人干细胞培养需置于含有95%空气和5%氧气的培养箱中
B．待猪胚胎发育至原肠胚时方可注入人干细胞
C．代孕母需提前注射孕激素等以调整其发情周期
D．上述方法制备的肾脏移植到人体，一定不会发生免疫排斥
6．(2024·山西·模拟预测)草莓是人们喜食的一种水果，有较高的营养价值。下图是利用植物组织培养技术培育脱毒草莓苗的过程，下列有关说法错误的是( )
A．图中①过程一般不需要光照，②过程需要给予一定时间和强度的光照
B．培养基中加入蔗糖，其作用是维持培养基中的渗透压和为细胞提供能量
C．植物组织培养技术可用于脱毒草莓的培育，而不能用于转基因草莓的培育
D．培养基中的生长素和细胞分裂素在促进细胞分裂方面起协同作用
7．(2024·重庆·模拟预测)2017年，世界上第一例、第二例体细胞克隆猴先后在中国诞生，标志着中国在非人灵长类疾病动物模型研究中处于国际领先地位。科学家为了提高胚胎发育率和妊娠率，将组蛋白去甲基化酶的 mRNA 注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂(TSA) 处理，简化过程如下。下列说法正确的是( )
A．“去核”指的是去除卵母细胞的细胞核
B．体细胞和去核卵母细胞的融合可以采用电融合、PEG融合等方法
C．胚胎移植前需要对代孕母猴进行同期发情和超数排卵处理
D．重构胚一般需要发育到囊胚或原肠胚后才进行胚胎移植
8．(2024·贵州黔西·一模)欲得到更多的后代，可进行胚胎分割，如图为哺乳动物胚胎分割和性别鉴定示意图，下列叙述正确的是( )
A．图①过程分割出的少量胚体细胞可鉴定性别
B．图②过程得到的两个a的生殖方式是有性繁殖
C．进行胚胎分割只能选择发育良好、形态正常的囊胚
D．通过胚胎分割产生的两个或多个个体具有不同的遗传物质
9．(2024·陕西汉中·二模)请根据传统发酵技术的相关知识，回答以下问题：
(1)腐乳比新鲜豆腐更利于消化，是因为毛霉菌种产生的 发挥了主要作用。通过发酵，豆腐中营养物质的种类 (填“增多”或“减少”)。在制作腐乳过程中加盐的作用是 (答两点)。
(2)在苹果醋发酵过程中要向发酵瓶通入，原因是 。发酵过程中没有进行严格的消毒灭菌，却少有杂菌生长，主要原因是 。
(3)泡菜制作过程中主要涉及的菌种为 ，测定泡菜中亚硝酸盐含量通常采用 法。制作泡菜的盐水要煮沸并冷却，煮沸的目的是 ，冷却的目的是 。
10．(2024·山西·模拟预测)目的基因甲表达的蛋白甲在医药上具有重要价值。为构建生产蛋白甲的重组大肠杆菌，研究人员利用转基因技术开展研究。下图是用于转基因的质粒结构、基因甲的酶切位点以及限制酶识别序列与切割位点示意图。构建基因表达载体时，基因甲插入LacZ基因内部。请回答下列问题：
注：AmpR基因表示氨苄青霉素抗性基因，PO表示启动子，LacZ基因表达的酶可催化X-gal物质转化为蓝色物质，使菌落呈蓝色，否则呈白色。
(1)XhoⅠ与SalⅠ切割基因产生的黏性末端 (填“相同”或“不相同”)。构建重组质粒时，除限制酶外，还需要使用 酶连接质粒和目的基因。
(2)基因甲与质粒以不同限制酶切割位点进行连接为正向连接，以相同限制酶切割位点进行连接为反向连接。当两者发生反向连接时，由于 ，因此可用XhoⅠ与SalⅠ对重组质粒的连接方法进行鉴定。
(3)质粒上的M序列被称为 ，可使目的基因转录停止。为鉴定重组质粒导入大肠杆菌是否成功，可配制含有 的选择培养基培养受体菌，可能的实验结果及相应的结论有 。2024年高考生物复习-选择性必修3 生物技术与工程（新高考专用）
1． (2023·江苏·高考真题)研究者通过体细胞杂交技术，探索利用条斑紫菜和拟线紫菜培育杂种紫菜。下列相关叙述正确的是(　　)
A．从食用紫菜的动物消化道内提取蛋白酶，用于去除细胞壁
B．原生质体需在低渗溶液中长期保存，以防止过度失水而死亡
C．检测原生质体活力时可用苯酚品红或甲紫溶液处理，活的原生质体被染色
D．聚乙二醇促进原生质体融合后，以叶绿体颜色等差异为标志可识别杂种细胞
[答案]D．[解析]A、从食用紫菜的动物消化道内提取蛋白酶，不能用于去除细胞壁，因为紫菜细胞的细胞壁成分中没有蛋白质，A错误；B、获得的原生质体若处在低渗溶液中，会吸水涨破，B错误；C、检测原生质体活力时可用台盼蓝染色，活的原生质体不能被染色，C错误；D、聚乙二醇作为诱导剂可促进原生质体融合，对于杂种细胞可以叶绿体颜色等差异为标志来进行识别，D正确。故选D。
回归教材01 植物体细胞杂交技术是指：将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁。
2．(2023·河北·高考真题)为筛选能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，下列相关实验设计错误的是( )
A．从酸奶和泡菜中采样分离乳酸菌
B．平板倒置培养为筛选乳酸菌创造无氧环境
C．对目的菌株进行胆固醇降解能力的测定
D．检测目的菌株对消化道环境的耐受力
[答案]B．[解析]A、筛选目的菌时应从富含目的菌的环境中去取样，酸奶和泡菜中富含乳酸菌，可以从中采样进行分离纯化，A正确；B、平板倒置培养是为了防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，不是创造无氧环境，B错误；C、筛选的是能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，所以，初步筛选后，还需要进一步进行目的菌胆固醇降解能力的测定，以获得符合要求的乳酸菌，C正确；D、因筛选出的目的菌是在肠道发挥作用，所以，还需要检测目的菌株对消化道环境的耐受力，D正确。故选B。
回归教材02 筛选目的菌株应从富含目的菌的环境中去取样。倒平板后及平板微生物培养时需要倒置培养，微生物初步筛选后还要进行相关实验以检测目的菌的发酵能力或特性。
3． (2023·辽宁·高考真题)细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度(菌落数/m )。下列叙述错误的是( )
A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理
B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置
C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值
D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高
[答案]D．[解析]A、为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌，对实验操作者的双手进行消毒，A正确；B、纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确；C、微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确；D、使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。故选D。
回归教材03 稀释涂布平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
4．(2023·重庆·高考真题)某小组通过PCR(假设引物长度为8个碱基短于实际长度)获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切(下图)，再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是( )
A．其中一个引物序列为5＇TGCGCAGT-3＇
B．步骤①所用的酶是SpeI和CfoI
C．用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2个片段
D．酶切片段和载体连接时，可使用E．coli连接酶或T4连接酶
[答案]B．[解析]A、由于引物只能引导子链从5＇到3＇，根据碱基互补配对原则，其中一个引物序列为5＇TGCGCAGT-3＇，A正确；B、根据三种酶的酶切位点，左侧的黏性末端是使用NheI切割形成的，右边的黏性末端是用CfoI切割形成的，B错误；C、用步骤①的酶对载体进行酶切，使用了NheI和CfoI进行切割，根据他们的识别位点以及原本DNA的序列，切割之后至少获得了2个片段，C正确；D、图中形成的是黏性末端，而E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端；T4DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端，D正确。故选B。
回归教材04 E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端；T4DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。
5．(2023·辽宁·高考真题)大量悬浮培养产流感病毒的单克隆细胞，可用于流感疫苗的生产。下列叙述错误的是( )
A．悬浮培养单克隆细胞可有效避免接触抑制
B．用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清
C．当病毒达到一定数量时会影响细胞的增殖
D．培养基pH不会影响单克隆细胞的病毒产量
[答案]D．[解析]A、悬浮培养单克隆细胞，可以保证足够的气体交换，通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内，可有效避免接触抑制，A正确；B、由于细胞的生长是比较复杂的过程，血清中含有一些必须的因子，用于培养单克隆细胞的培养基通常需加血清，B正确；C、病毒借助于细胞进行繁殖，利用了活细胞的物质、能量、酶等，当病毒达到一定数量时细胞的生命活动受到影响，会影响细胞的增殖，C正确；D、细胞的正常生命活动需要适宜的pH，培养基pH会影响细胞代谢，进而影响单克隆细胞的病毒产量，D错误。故选D。
6．(2023·山东·高考真题)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是( )
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
[答案]D．[解析]A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；B、平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；C、使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。故选D。
回归教材06 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。属于灭菌。消毒和灭菌是两个不同的概念，消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物的方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
7．(2023·广东·高考真题)“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是( )
A．裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质
B．分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等
C．沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度
D．鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色
[答案]D．[解析]A、裂解是加蒸馏水让细胞吸水涨破，释放出DNA等物质，A正确；B、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L的NaCl溶液， 将溶液过滤，即可将混合物中的多糖、蛋白质等与DNA分离，B正确；C、DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精，可以反复多次用酒精沉淀出DNA，提高DNA纯度，C正确；D、将DNA溶解于NaCl，加入二苯胺试剂，沸水浴五分钟，待冷却后，能呈现蓝色，D错误。故选D。
回归教材07 向试管中各加入适量的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，溶液呈现蓝色。
8． (2023·广东·高考真题)科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。此过程不涉及的操作是( )
A．超数排卵 B．精子获能处理
C．细胞核移植 D．胚胎培养
[答案]C．[解析]由题干信息可知，该过程通过体外受精获得胚胎，再通过胚胎移植，使长角羚羊成功妊娠并产仔，因此需要进行超数排卵、精子获能处理，并对获得的受精卵进行胚胎培养；由于该过程为有性生殖，因此不需要涉及细胞核移植，所以C正确、ABD错误。故选C。
回归教材08 体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。
9．(2023·浙江·高考真题)以哺乳动物为研究对象的生物技术已获得了长足的进步。对生物技术应用于人类，在安全与伦理方面有不同的观点，下列叙述正确的是( )
A．试管婴儿技术应全面禁止
B．治疗性克隆不需要监控和审查
C．生殖性克隆不存在伦理道德方面的风险
D．我国不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验
[答案]D．[解析]A、我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验，但治疗性克隆可在有效监控和严格审查下实施，A错误；B、我国政府同样重视治疗性克隆所涉及的伦理问题，主张对治疗性克隆进行有效监控和严格审查，B错误；C、生殖性克隆人冲击了现有的一些有关婚姻、家庭和两性关系的伦理道德观念，C错误；D、我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验，D正确。故选D。
回归教材09 生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。
10．[多选](2023·山东·高考真题)果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有( )
A．都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理
B．都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖
C．发酵前都需要对原料进行灭菌
D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期
[答案]AB．[解析]A、二者均利用了酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原理，A正确；B、发酵前期，均需要一定的有氧环境，使酵母菌大量繁殖，B正确；C、果酒的家庭制作不需对原料进行灭菌，C错误；D、果酒的家庭制作不需要进行消毒，D错误。故选AB。
回归教材10 果酒与啤酒的发酵原理均是酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精。
11．(2024·浙江·高考真题)某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。下列叙述错误的是( )
A．①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离
B．②加培养液的目的是促进细胞增殖
C．③分装时需调整到合适的细胞密度
D．整个过程需要在无菌、无毒条件下进行
[答案]B．[解析]A、①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离，A正确；B、②加培养液，多次加培养液先洗去残留的消化酶，然后终止消化液的消化作用，并对细胞加以稀释，B错误；C、③分装时需调整到合适的细胞密度，因为若密度过大细胞直接仍存在接触抑制，C正确；D、动物细胞培养需要无菌无毒环境，因此整个过程需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。故选B。
回归教材11 贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集。之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。
12．(2023·天津·高考真题)多种方法获得的早期胚胎，均需移植给受体 才能获得后代。下图列举了几项技术成果。
下列叙述正确的是 ( )
A．经胚胎移植产生的后代与受体均保持一致
B．①需获得MII期的去核卵母细胞
C．②能大幅改良动物性状
D．③可通过②技术实现扩大化生产，①②可通过③技术实现性状改良
[答案]D．[解析]A、子代动物的遗传性状与供体基本一致，但与受体无关，A错误；B、核移植过程中需要处于MII中期的去核卵母细胞，而过程1是培育试管动物，需要培育到适宜时期(桑葚胚或囊胚等
时期)进行胚胎移植，B错误；C、过程2得到的是克隆动物，是无性生殖的一种，不能大幅改良动物性状，C错误；D、过程2克隆技术可得到大量同种个体，为过程3提供了量产方式；过程3是转基因技术，转基因可导入外源优良基因，为过程1、2提供了改良性状的方式，D正确。故选D。
回归教材12 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物。
13．(2023·山东·高考真题)利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是( )
A．利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物
B．植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产
C．次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养
D．该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量
[答案]A．[解析]A、有些产物不能或难以通过化学合成途径得到，故可利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物，A正确；B、利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物，故可通过该技术进行植物细胞产物的工厂化生产，B错误；C、次生代谢物不是植物生长所必需的，其含量少，可以通过增加细胞的数量来增加次生代谢产物的产量，C错误；D、细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件，提高了多个细胞中次生代谢物的含量，不能提高单个细胞中次生代谢物的含量，D错误。故选A。
回归教材13 由于植物细胞的次生代谢物含量很低，从植物组织提取会大量破坏植物资源，有些产物又不能或难以通过化学合成途径得到，因此人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产。
14．(2023·北京·高考真题)自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供 和维生素等。
(2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊(如图)，表明 。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现 。采
用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。
(4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证(主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱) 。
[答案](1)氮源、碳源
(2)A菌能在培养平板中生长繁殖
(3) 稀释 溶菌圈
(4)假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂
[解析](1)蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。
(2)将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。
(3)将含菌量较高的湖泊水样稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。　
(4)根据实验实验材料和设备，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。
回归教材14 微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。微生物的培养基按其特殊用途可分为选择性培养基和鉴别培养基，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
15． (2023·全国·高考真题)GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以GFP基因为材料，利用基因工程技术获得了能发其他颜色荧光的蛋白，丰富了荧光蛋白的颜色种类。回答下列问题。
(1)构建突变基因文库，科研人员将GFP基因的不同突变基因分别插入载体，并转入大肠杆菌制备出GFP基因的突变基因文库。通常，基因文库是指 。
(2)构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因(均为突变基因)构建表达载体，其模式图如下所示(箭头为GFP突变基因的转录方向)。图中①为 ；②为 ，其作用是 ；图中氨苄青霉素抗性基因是一种标记基因，其作用是 。
(3)目的基因的表达。科研人员将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达，发现大肠杆菌有的发绿色荧光，有的发黄色荧光，有的不发荧光。请从密码子特点的角度分析，发绿色荧光的可能原因是 (答出1点即可)。
(4)新蛋白与突变基因的关联性分析。将上述发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后，对其所含的GFP突变基因进行测序，发现其碱基序列与GFP基因的不同，将该GFP突变基因命名为YFP基因(黄色荧光蛋白基因)。若要通过基因工程的方法探究YFP基因能否在真核细胞中表达，实验思路是 。
[答案](1)将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因
(2) 终止子 启动子 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来
(3)密码子具有简并性
(4)将构建好的表达载体(含有目的基因YFP基因)导入酵母菌中进行表达
[解析](1)将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。
(2)一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子，终止子以及标记基因等，且基因的转录方向为从启动子到终止子，故图中①为终止子，②为启动子，启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素基因就可以作为这种基因。
(3)正常情况下，GFP突变基因应该不发绿色荧光，而大肠杆菌有的发绿色荧光，从密码子特点的角度分析，原因是密码子具有简并性，即一种氨基酸可能由一种或多种密码子决定。
(4)基因工程研究中常用的真核表达系统有酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。要通过基因工程的方法探究YFP基因能否在真核细胞中表达，可将构建好的表达载体(含有目的基因YFP基因)导入酵母菌中进行表达，如果酵母菌发出黄色荧光，说明YFP基因能在真核细胞中表达，反之则不能在真核细胞中表达。
回归教材15 基因表达载体的构建是基因工程的核心。其中心内容是使目的基因与运载体结合，形成重组运载体，最后通过重组运载体将目的基因导入受体细胞。基因表达载体的构建过程
(1)用一定的限制酶切割载体，使其出现一个黏性末端(或平末端)的切口。
(2)用限制酶切割目的基因，产生与载体一样的黏性末端(或平末端)。
(3)将切下的目的基因片段与载体混合，再加入适量DNA连接酶，使载体与目的基因结合成重组DNA分子
1．比较果酒与果醋制作的过程
2．有关发酵工程的几点注意
(1)性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程育种获得。
(2)发酵工程所用的菌种大多是单一菌种。
(3)发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵。
(4)如果发酵产品是微生物菌体，可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥得到产品；如果发酵产品是微生物的代谢物，可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。
(5)发酵工程的产品主要包括微生物的代谢产物、酶及微生物的菌体。
3．生长素与细胞分裂素在植物组织培养中的作用关系植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
①在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。
②生长素与细胞分裂素同时使用时会因比值不同而效果不同。当比值高时，有利于根的分化而抑制芽的形成；当比值低时，有利于芽的分化而抑制根的形成：当比值适中时，促进愈伤组织的形成。
4．动物细胞培养和植物组织培养的比较
项目 动物细胞培养 植物组织培养
理论基础 细胞增殖 植物细胞的全能性
培养前处理 无菌：用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理使组织分散成单个细胞 无菌、离体
取材 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 植物幼嫩的部位或花药等
培养基性质 液体 固体
培养基成分 糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等 水、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和琼脂等
结果 细胞培养产生大量细胞不形成新个体 可产生新个体
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产 快速繁殖、作物脱毒、细胞产物的工厂化生产和单倍体育种等
相同点 ①都需人工条件下的无菌操作；②都需要适宜的温度、H等条件；③都进行有丝分裂，都不涉及减数分裂
5．与植物原生质体融合相比，动物特有的诱导细胞融合的方法是用灭活的病毒作为诱导剂。
6．比较制备单克隆抗体过程中的两次筛选
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选原因 诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞也有很多种
筛选方法 用特定的选择培养基筛选未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长 用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
筛选目的 得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
7．胚胎移植归纳总结
(1)超数排卵使用的激素是 促性腺激素 。
(2)用于胚胎移植的早期胚胎是 桑椹胚或囊胚。
(3)良种牛的后代的遗传特性是由供体公牛和供体母牛决定的。
(4)胚胎工程的最后一道“工序”是胚胎移植。
(5)胚胎移植的方法有非手术法和手术法。
(6)冲卵把供体子宫内的胚胎冲洗出来。且胚胎分割的次数不宜过多；但一次给受体动物植入多个胚胎，可增加双胞胎和多胞胎的比例
8．PCR技术和DNA复制的比较
体内复制 PCR技术
解旋 在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开 加热到94℃，双链全部解开不需解旋酶
引物 一小段RNA 一般用DNA片段
DNA聚合酶 细胞自身的DNA聚合酶(不耐高温) Taq酶
复制特点 半保留复制，边解旋边复制，多起点复制 半保留复制，完全解旋后复制从模板链的一端开始复制
复制的方向 子链的5'端向3'端延伸 子链的5'端向3”端延伸
1．(2024·河北沧州·一模)关于发酵及发酵工程的叙述，正确的是( )
A．进行果酒或泡菜发酵时，发酵装置均要留出1/3空间，防止发酵菌种无氧呼吸产生CO2引起发酵液溢出
B．传统发酵利用的菌种是天然的混合菌种，发酵工程利用的则是经基因工程或诱变育种后选育的单一菌种
C．利用发酵工程生产啤酒时，需对培养基和发酵设备进行灭菌，且发酵过程要严格检测和控制发酵条件
D．发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物，不包括酶及菌体本身
[答案]C．[解析]A、制作泡菜是乳酸菌发酵不产生二氧化碳，A错误；B、传统发酵技术所利用的菌株是原料是自带菌株，多是混合菌种发酵，发酵工程选育的性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来,也可以通过诱变育种或基因工程育种获得，一般为单一菌种，B错误；C、利用发酵工程生产啤酒时，为避免杂菌污染，发酵的设备和培养基都需经过严格的灭菌，为保证发酵过程的顺利正常进行，要严格控制温度、pH、溶解氧等发酵条件，C正确；D、发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，产品不同，分离的方法也不同，D错误。故选C。
2．(2024·福建·三模)在分离、纯化细菌的实验中，划线接种(甲)及培养结果(乙)如图所示，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述正确的是( )
A．实验所用培养基一般用干热灭菌法进行灭菌
B．为了防止杂菌污染，接种环灼烧后立即蘸取菌液进行划线
C．图中d区域的划线操作是从c区域划线的末端开始的
D．图示划线接种过程中至少需要对接种环灼烧5次
[答案]D．[解析]A、实验所用培养基一般用湿热灭菌法(高压蒸汽灭菌)进行灭菌，A错误；B、接种环灼烧后需适当冷却再蘸取菌液进行划线，避免将菌种烫死，B错误；C、图中a对应的区域出现了单菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，即图中c区域的划线操作是从d区域划线的末端开始的，C错误；D、蘸取菌液前需要灼烧一次接种环，之后在c、b、a区域划线前都要灼烧接种环，以保证菌种来自上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止接种环上的菌种污染环境、感染接种者,因此接种过程中至少需要对接种环灼烧5次，D正确。故选D。
3．(2024·河北·模拟预测)我国北方地区冬春季温度低，常温条件下筛选的纤维素分解菌难以发挥作用。研究人员从河北滨海区低温土壤中分离筛选纤维素酶活性较高的菌株，构建复合菌系，以期为北方低温地区秸秆的资源化利用提供菌种资源。下表为CMC培养基的配方，其中CMC—Na是天然纤维素的衍生物。已知刚果红能与纤维素形成红色复合物。下列叙述正确的是( )
组分 CMC-Na (NH4)2SO4 K2HPO4 MgSO4 7H2O KH2PO4 蛋白胨 酵母膏 加水定容至
含量 10g 4g lg 0.5g 1g lg 1g 1000mL
A．该培养基属于选择培养基，其中能提供氮源的物质为(NH4)2SO4
B．配置CMC固体培养基时，还需加入琼脂，且应先灭菌再调pH
C．CMC培养基应在压力为100kPa、温度为121℃的条件下灭菌15～30min
D．向CMC培养基中加入刚果红后，菌落直径/透明圈直径的值越大的菌分解纤维素的能力越强
[答案]C．[解析]A、该培养基中酵母膏可为微生物提供碳源和氮源，CMC—Na是天然纤维素的衍生物，已知刚果红能与纤维素形成红色复合物，而纤维素被分解后可使红色消失，因此可培养基可鉴别是否存在纤维素分解菌，属于鉴别培养基，其中能提供氮源的物质为(NH4)2SO4、蛋白胨和酵母膏，A错误；B、配置CMC固体培养基时，还需加入琼脂，且应先调pH再灭菌，B错误；C、CMC培养基应在压力为100kPa、温度为121℃的条件下灭菌15~30min，该灭菌方式为高压蒸汽灭菌，C正确；D、菌体分解纤维素的能力越强，菌落周围形成的透明圈越大，向CMC培养基中加入刚果红后，菌落直径/透明圈直径的值越大的菌说明分解纤维素的能力越弱，D错误。故选C。
4．(2024·广西·二模)由于某目的基因酶切后的末端为平末端， 载体E只有产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P 将目的基因接入载体E。据图分析， 下列叙述正确的是( )
A．通过 PCR 扩增获取目的基因是基因工程的核心工作
B．为了便于该目的基因接入载体E，可用限制酶 EcoRV 或SmaI切割载体P
C．载体P不能作为基因表达载体，是因为其没有表达该目的基因的启动子与终止子
D．若受体细胞表现出抗性基因的相应性状，表明重组载体成功导入受体细胞
[答案]C．[解析]A、基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，不是通过PCR扩增获取目的基因，A错误；B、由于载体E只有产生黏性末端的酶切位点，要使中间载体P接入载体E，同时防止载体E自身环化，需要用两种限制酶分别切割载体E和中间载体P，据图可知，中间载体P和载体E均含有XhoI和PstI酶识别序列，故可选用XhoI和PstI酶进行酶切，载体P的这两种酶识别序列中含有EcoRV识别位点，并且其切割的为平末端，可以用于连接目的基因，SmaI酶虽然也能切割得到平末端，但是其识别位点没有位于XhoI和PstI酶识别位点之间，故不能选择其对中间载体P进行切割，B错误；C、由图可知，载体P是中间质粒，不含有有表达MT基因的启动子和终止子，C正确；D、受体细胞表现出抗性基因的相应性状，可能是导入了重组质粒，也可能只导入了空质粒(不含目的基因的质粒)，D错误。故选C。
5．(2024·浙江绍兴·二模)2023年，中国科学家成功地在猪胚胎中培育出含有人细胞的肾脏。科学家先利用基因编辑技术获得免疫缺陷猪胚胎，再将经特殊处理的人干细胞注入猪胚胎的特定位置，并将胚胎移入代孕母的子宫内进行培养，最终培育出拥有70%人细胞且功能正常的肾脏。下列叙述正确的是(　　)
A．人干细胞培养需置于含有95%空气和5%氧气的培养箱中
B．待猪胚胎发育至原肠胚时方可注入人干细胞
C．代孕母需提前注射孕激素等以调整其发情周期
D．上述方法制备的肾脏移植到人体，一定不会发生免疫排斥
[答案]C．[解析]A、人干细胞培养需置于含有95%空气和5%二氧化碳的培养箱中培养，A错误；B、胚胎移植时应将囊胚或桑葚胚时期的胚胎进行移植，原肠胚时期的胚胎不能用于移植，B错误；C、代孕母需提前注射孕激素等以调整其发情周期，使其与供体处于同期发情状态，C正确；D、不同人体细胞的组织相容性抗原不同，若将上述方法制备的肾脏移植到提供干细胞的人体内一般不会发生免疫排斥，但移植到其他人体内可发生免疫排斥，D错误。故选C。
6．(2024·山西·模拟预测)草莓是人们喜食的一种水果，有较高的营养价值。下图是利用植物组织培养技术培育脱毒草莓苗的过程，下列有关说法错误的是( )
A．图中①过程一般不需要光照，②过程需要给予一定时间和强度的光照
B．培养基中加入蔗糖，其作用是维持培养基中的渗透压和为细胞提供能量
C．植物组织培养技术可用于脱毒草莓的培育，而不能用于转基因草莓的培育
D．培养基中的生长素和细胞分裂素在促进细胞分裂方面起协同作用
[答案]C．[解析]A、植物组织培养过程中，形成愈伤组织阶段一般不需要光照，但形成试管苗的过程中需要给予一定时间和强度的光照，A正确；B、植物组织培养的培养基中要加入蔗糖等营养物质，加入蔗糖的作用有二，一是为细胞提供能量(水解为葡萄糖供细胞利用)，二是维持培养基中的渗透压，使培养的细胞不失水，B正确；C、将转基因植物细胞培育成转基因植株需要利用植物组织培养技术，C错误；D、生长素主要促进细胞核分裂，细胞分裂素主要促进细胞质分裂，两者在促进细胞分裂方面起协同作用，D正确。故选C。
7．(2024·重庆·模拟预测)2017年，世界上第一例、第二例体细胞克隆猴先后在中国诞生，标志着中国在非人灵长类疾病动物模型研究中处于国际领先地位。科学家为了提高胚胎发育率和妊娠率，将组蛋白去甲基化酶的 mRNA 注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂(TSA) 处理，简化过程如下。下列说法正确的是( )
A．“去核”指的是去除卵母细胞的细胞核
B．体细胞和去核卵母细胞的融合可以采用电融合、PEG融合等方法
C．胚胎移植前需要对代孕母猴进行同期发情和超数排卵处理
D．重构胚一般需要发育到囊胚或原肠胚后才进行胚胎移植
[答案]B．[解析]A、将卵母细胞培养到MII期后进行去核操作，此时细胞核退化，出现的是纺锤体—染色体复合物，故去核的实质是去除卵母细胞中的纺锤体—染色体复合物，而不是细胞核，A错误；B、动物细胞融合可以采用电融合、PEG融合、灭活病毒诱导等方法，B正确；C、代孕母猴不需要进行超数
排卵处理，供体母猴才需要，C错误；D、重构胚一般发育到囊胚或桑椹胚才进行细胞移植，而不是原肠胚，D错误。故选B。
8．(2024·贵州黔西·一模)欲得到更多的后代，可进行胚胎分割，如图为哺乳动物胚胎分割和性别鉴定示意图，下列叙述正确的是( )
A．图①过程分割出的少量胚体细胞可鉴定性别
B．图②过程得到的两个a的生殖方式是有性繁殖
C．进行胚胎分割只能选择发育良好、形态正常的囊胚
D．通过胚胎分割产生的两个或多个个体具有不同的遗传物质
[答案]A．[解析]A、图①过程能够得到滋养层细胞，由于滋养层细胞将来发育为胎儿的胎膜和胎盘，图①过程分割出的少量胚体细胞可鉴定性别，A正确；B、图②经胚胎分割过程得到的两个a的生殖方式没有经过精卵结合，是无性生殖，B错误；C、进行胚胎分割只能选择发育良好、形态正常的囊胚或桑葚胚(桑椹胚)，C错误；D、来自同一胚胎分割产生的后代具有相同的遗传物质，D错误。故选A。
9．(2024·陕西汉中·二模)请根据传统发酵技术的相关知识，回答以下问题：
(1)腐乳比新鲜豆腐更利于消化，是因为毛霉菌种产生的 发挥了主要作用。通过发酵，豆腐中营养物质的种类 (填“增多”或“减少”)。在制作腐乳过程中加盐的作用是 (答两点)。
(2)在苹果醋发酵过程中要向发酵瓶通入，原因是 。发酵过程中没有进行严格的消毒灭菌，却少有杂菌生长，主要原因是 。
(3)泡菜制作过程中主要涉及的菌种为 ，测定泡菜中亚硝酸盐含量通常采用 法。制作泡菜的盐水要煮沸并冷却，煮沸的目的是 ，冷却的目的是 。
[答案](1) 蛋白酶和脂肪酶 增多 析出豆腐中的水分使其变硬，抑制微生物生长，避免豆腐块变质
(2) 醋酸菌是好氧细菌 在果醋发酵的酸性环境中，多数细菌无法生存
(3) 乳酸菌 比色 杀灭杂菌 防止温度过高杀死乳酸菌
[解析](1)腐乳制作过程中多种微生物参与了发酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生蛋白酶能将豆腐中的蛋白质转化成小分子肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪转化成甘油和脂肪酸；通过发酵，有机物被分解，会有中间产物产生，故营养物质种类增多；在制作腐乳过程中加盐的作用是析出豆腐中的水分使其变硬，抑制微生物生长，避免豆腐块变质。
(2)制果醋需要醋酸菌，醋酸菌为好氧细菌，必须通入氧气，否则会影响醋酸菌的生长、繁殖，进而影响醋酸的产生；发酵过程中没有进行严格的消毒灭菌，却少有杂菌生长，原因是在果醋发酵的酸性环境中，多数细菌无法生存。
(3)泡菜的制作离不开乳酸菌，在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸；要检测泡菜中亚硝酸盐的含量所用的方法是比色法，利用的原理是亚硝酸盐与某些化学物质发生反应后形成玫瑰红色染料，然后根据比对的结果推出泡菜中亚硝酸盐的含量；在制作泡菜的过程中要加入煮沸并冷却的盐水，煮沸的目的是为了杀灭杂菌，冷却的目的是为了防止温度过高杀死乳酸菌。
10．(2024·山西·模拟预测)目的基因甲表达的蛋白甲在医药上具有重要价值。为构建生产蛋白甲的重组大肠杆菌，研究人员利用转基因技术开展研究。下图是用于转基因的质粒结构、基因甲的酶切位点以及限制酶识别序列与切割位点示意图。构建基因表达载体时，基因甲插入LacZ基因内部。请回答下列问题：
注：AmpR基因表示氨苄青霉素抗性基因，PO表示启动子，LacZ基因表达的酶可催化X-gal物质转化为蓝色物质，使菌落呈蓝色，否则呈白色。
(1)XhoⅠ与SalⅠ切割基因产生的黏性末端 (填“相同”或“不相同”)。构建重组质粒时，除限制酶外，还需要使用 酶连接质粒和目的基因。
(2)基因甲与质粒以不同限制酶切割位点进行连接为正向连接，以相同限制酶切割位点进行连接为反向连接。当两者发生反向连接时，由于 ，因此可用XhoⅠ与SalⅠ对重组质粒的连接方法进行鉴定。
(3)质粒上的M序列被称为 ，可使目的基因转录停止。为鉴定重组质粒导入大肠杆菌是否成功，可配制含有 的选择培养基培养受体菌，可能的实验结果及相应的结论有 。
[答案](1) 相同 DNA连接
(2)反向连接的重组质粒上具有XhoⅠ、SalⅠ的识别序列和切割位点，可再次被两种限制酶切开
(3) 终止子 氨苄青霉素和X-gal 若培养基中出现大肠杆菌菌落，且菌落呈白色，则重组质粒导入成功；若培养基中未出现大肠杆菌菌落或出现大肠杆菌菌落，且菌落呈蓝色，则重组质粒导入失败
[解析](1)根据图中酶所识别的序列，XhoⅠ与SalⅠ切割基因产生的黏性末端相同。用限制酶切割质粒和基因甲后，需用DNA连接酶将两者连接，形成重组质粒。
(2)基因甲与质粒以不同限制酶切割位点进行连接为正向连接，以相同限制酶切割位点进行连接为反向连接。反向连接时，重组质粒上具有XhoⅠ、SalⅠ的识别序列和切割位点，可再次被两种限制酶切开。而正
向连接后的部分序列为，不能再次被XhoⅠ与SalⅠ识别，因此可用XhoⅠ与SalⅠ对重组质粒的连接方法进行鉴定。
(3)目的基因下游的序列为终止子，可使目的基因转录停止。质粒上的AmpR(氨苄青霉素抗性基因)、LacZ均作为标记基因。LacZ基因表达的酶可催化X-gal物质转化为蓝色物质，但目的基因插入LacZ基因内部，使LacZ基因遭到破坏。所以鉴定重组质粒导入大肠杆菌是否成功，需要用含有氨苄青霉素和X-gal的选择培养基培养受体菌。若大肠杆菌转入空质粒，其AmpR基因表达氨苄青霉素抗性物质使大肠杆菌可存活并形成菌落，其LacZ基因完整，LacZ基因表达的酶可催化X-gal物质转化为蓝色物质，菌落呈蓝色；若大肠杆菌转入重组质粒，其AmpR基因表达氨苄青霉素抗性物质使大肠杆菌可存活并形成菌落，其LacZ基因因插入目的基因而失活，LacZ基因不能表达相关酶，菌落呈白色；若目的基因导入失败，则大肠杆菌不能抗氨苄青霉素，不能形成大肠杆菌菌落。

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