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动物细胞的培养
动物细胞的培养
是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
（1）科学研究：
能直接观察到培养细胞的动态变化过程，从而能直接观察、分析细胞的形态结构和真正意义上生命活动。培养正常或病变的细胞，可用于生理、病理、药理等方面的研究。
例如， 细胞全能性的揭示、细胞周期调节控制的分析、癌变机理和衰老原因、抗癌药物的筛选、有毒物质的检测等研究，都与细胞培养技术密不可分。
动物细胞的培养
是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
如皮肤细胞的培养用于烧伤患者的皮肤移植，其他器官的细胞培养用于相关损伤组织器官的修复等。
借助于某些细胞的大规模培养获得细胞代谢产物，如获得动物疫苗、干扰素、单克隆抗体等有重要价值的生物 制品，是动物细胞培养的重要应用之一。
通过大规模动物细胞培养来获得动物性食品，如世界首个“人造牛肉汉堡”的问世。
（2）现实生活：
动物细胞的培养
是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
稳定的环境条件
充足的营养物质
严格的无菌操作
动物细胞的培养
是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
稳定的环境条件
④气体条件：
②湿 度：
③PH值：
70%以下
7.2 7.4
①温度：
37 ℃
充足的O2
CO2培养箱开放式培养（5%的CO2浓度，95%的空气）：
不仅提供了适宜的温度，还能控制稳定的pH环境，可以保证细胞呼吸对氧气的需要。
动物细胞的培养
是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
2. 充足的营养物质
培养液基本成分包括水、无机盐、氨基酸、维生素、糖类、生长因子等。
添加血清
①提供生长因子和激素
②提供贴附因子和伸展因子
③提供结合蛋白
④提供必需脂肪酸和微量元素
胎牛血清、小牛血清、成牛血清
定期更换：为防止细胞代谢产生的有毒物质危害细胞。
动物细胞的培养
是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
3. 严格的无菌条件
④操作过程：
①培养材料：
无菌环境取材，酒精消毒等
②培养基：
高压蒸汽灭菌、过滤除菌、加入抗生素
③培养环境：
无菌室、超净台、紫外灯杀菌、器材高压蒸汽灭菌
严格无菌，在酒精灯火焰旁操作等
防止污染是决定细胞培养成败的关键
动物细胞的培养
贴附是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与细胞间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触。正是基于细胞这种贴附生长的特征，使得不同细胞之间结合而形成组织，也使得细胞和周围环境之间保持联系。
(1)贴附生长
来源于血液、淋巴组织的细胞以及某些肿瘤细胞不需要贴附在支持物上，而是呈悬浮生长状态。
体外培养时，绝大多数细胞仍然保持了贴附生长的特性，必须贴附在某一固相支持物上如培养瓶壁上生长。
培养皿
培养瓶
体外培养的动物细胞的特点
动物细胞的培养
体外培养的动物细胞的特点
接触抑制是体外细胞培养时贴附型细胞生长的特性。
由于细胞之间有接触抑制的特性，一般的正常细胞并不重叠于其他细胞之上生长，而是单层生长。
癌细胞由于无接触抑制而能够继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，发生堆积。因此，是否接触抑制可作为区别正常细胞与癌细胞的标志之一。
(2)接触抑制
原代培养
动物细胞的培养
2.传代培养
将原代培养细胞分成若干份，接种到若干培养基中，使其继续生长繁殖。
是指细胞或组织离开有机体后的首次培养。
动物细胞的培养
原代培养
肝脏细胞、肾脏细胞等
①组织块法：
②分散细胞法：
心肌细胞、皮肤细胞等
动物细胞的培养
原代培养
②分散细胞法：采用机械法或酶消化法，使组织块解离，通过注射器挤压，筛网过滤、反复吹打等方法，使细胞彼此分散，形成单细胞悬液。
肝脏细胞、肾脏细胞等
动物细胞的培养
原代培养
定期观察
原代培养细胞的显微观察，我们每天要用倒置显微镜，观察细胞的生长状况，如果有细胞污染要及时清理，一般5-6天，细胞会铺满瓶壁50%以上。
而原代培养期内，培养物中各种细胞成分混杂，具有明显的异质性，细胞之间相互依存性强，细胞集落形成率很低。
动物细胞的培养
原代培养
问题：1.为什么动物细胞培养取材选用动物胚胎或幼龄动物的器官或组织？
分裂能力强，分化程度低，容易培养
消化组织细胞间中的胶原纤维和细胞外的其他成分
胃蛋白酶在pH为7.2-7.4的动物细胞培养液中无活性。
控制好胰蛋白酶的处理时间！长时间处理会损伤细胞。
2.为什么用胰蛋白酶处理？
4.用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？
3.为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？
动物细胞的培养
随着时间的延长，体外培养的细胞数量不断增加。当增长到一定程度后，由于发生接触抑制或培养空间的限制及营养物质的消耗枯竭，生长会逐渐减慢，甚至停止并死亡。因此，需要将原培养瓶内的细胞分离并稀释后转到多个培养瓶中，在新的培养基中进行传代培养。
问题：原代培养后为什么要进行传代培养
细胞传一代后，一般经历以下4个阶段：
潜伏期、对数生长期、稳定期和衰退期。
2.传代培养
动物细胞的培养
大多数动物细胞为贴壁依赖性细胞，这些细胞紧密的贴于瓶壁上，大多数需要通过胰蛋白酶等消化液处理，细胞才能够与瓶壁分离。
动物细胞的培养
2.传代培养
分离细胞
弃除老的培养基，用PBS缓冲液洗涤后，用胰蛋白酶消化细胞，获得的细胞悬液。
动物细胞的培养
2.传代培养
加台盼蓝染液（染死细胞），在显微镜下用计数板进行观察计数。计算细胞的存活率。然后对细胞悬液进行离心。根据计数结果调整细胞密度。
细胞计数并调整细胞密度
①取动物组织块并剪碎组织。
②胰蛋白酶酶解，获得细胞悬浮液。
③转入特殊培养液中进行原代培养。
④分装到多个卡氏瓶中进行传代培养。
动物细胞的培养
原代培养、传代培养
组织细胞
细胞系
选择与纯化
细胞株
具异质性
具特殊性质、均一性
动物细胞的培养
同学们，再见

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