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(共21张PPT)
二、微生物的培养技术及应用
微生物
２.种类：
酵母菌
青霉菌
大型真菌
球菌
蓝细菌
草履虫
衣藻
禽流感病毒
SARS病毒
1.微生物的概念：
_________________________的统称。
难以用肉眼观察的微小生物
微生物
本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。
沙门氏菌
微生物在培养基上大量繁殖时，形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。
菌落
毛霉
①要为人们需要的微生物提供合适的___________条件。
营养和环境
微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。
实验室培养微生物的条件
——培养基
培养基
1. 概念：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.营养成分：
① 碳源
凡是能提供碳元素的物质
自养生物：
异养生物：
CO2等含碳无机物
含碳有机物
凡是能提供氮元素的物质
固氮微生物：
非固氮微生物；
空气中的氮气等无机氮
氨基酸、蛋白质、尿素等含氮有机物
② 氮源
（1）基本成分：
碳源、氮源、水、无机盐
注：牛肉膏、蛋白胨是异养型微生物的碳源、氮源、能源
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
①提供无机营养；
②调节pH；
③维持渗透压。
③ 水
④ 无机盐
培养基经常使用有：K2HPO4 MgSO4 NaCl Ca(NO3)2 FeSO4
微生物例子 培养基需要的特殊物质或条件
乳酸杆菌
霉菌
细菌
厌氧微生物
添加维生素
调至酸性
调至中性或弱碱性
提供无氧的条件
培养基的特殊需求
(2)还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求
生长因子、维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
3.类型：
固体
培养基
液体
培养基
有无琼脂
分离、计数、
鉴定等
扩大培养、
工业生产
按功能分：
选择培养基：
具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。
按物理性质分：
例如：
1.以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌
　　2.不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物
　　3.培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
　　4.培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球
鉴别培养基
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
例如：伊红--美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌
其原理是大肠杆菌能分解乳糖产生大量的混合酸，菌体带H+故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽，在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合。
4、培养基作用：
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
用途
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产
观察微生物的运动、
分类鉴定
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
天然培养基
合成培养基
鉴别培养基
3．培养基的类型及用途：
二.无菌技术
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染
　
自学指导:阅读课本P10—P11 5分钟
1、无菌技术有哪些？如何区分消毒和灭菌？
2、常用的消毒方法有哪些？这些消毒方法的适用范围是什么？
3、常用的灭菌方法有哪些？这些灭菌方法的适用范围是什么？
以下物品所采用的灭菌或消毒方法依次是
培养基
培养皿
接种环
实验操作者的双手
实验室
牛奶
高压蒸汽灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
化学消毒（酒精）
紫外线消毒
巴氏消毒法
任 务 活 动
类型 适用范围 操作方法
消 毒
较为温和理化生方法，杀死部分微生物和部分芽孢、孢子
煮沸消毒法
日常生活
100 ℃煮沸5～6min
巴氏消毒法
不耐高温的液体
62～65℃消毒30min或80～90℃消毒30s～1min
化学药物消毒法
生物活体、水源等
用酒精擦拭双手、
用氯气消毒水源
紫外线照射消毒法
紫外线照射30min
接种室、接种箱，
超净工作台。
二、无菌技术
1.消毒
适用：实验操作的空间、操作者的衣着和手（和培养的微生物不直接接触）
4.原理：
煮沸、巴氏消毒：高温导致蛋白质变性。
紫外线消毒：破坏DNA结构，导致微生物死亡。
用酒精消毒时，为什么体积分数为70%--75%的酒精消毒效果较好？
因为酒精的浓度过高时，菌体表面蛋白质变性过快，从而凝固成一层保护膜，使乙醇分子不能渗入其中；酒精浓度过低时酒精的杀菌能力减弱。
用酒精消毒：乙醇导致蛋白质变性。
用氯气消毒：形成次氯酸破坏酶系统，使代谢停止。
消毒
生物消毒法
指利用微生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。
例如，有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。
2、灭菌
　　
ａ．概念：
指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
芽孢
有些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个椭圆形，厚壁、含水量低、抗逆性强的休眠体构造叫做芽孢。
孢子
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。
对象：培养基、无菌水等
(1).湿热灭菌：
高压蒸汽灭菌锅
100kPa、121℃下维持15～30min
高压蒸汽灭菌法（效果最好）
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方式
基本保持培养基的营养成分不被破坏
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性
操作步骤 操作要领
加水 将内层灭菌桶取出，向外层锅内加水，水面与三角形搁架平齐
装锅 将灭菌物品放在灭菌桶中(不要装得太满)，加盖，对称固定螺栓
加热排气 加热灭菌锅，打开排气阀，等冷空气完全排尽后，关闭排气阀
保温保压 100 kPa、121 ℃下，保温保压15～30 min
出锅 1.关闭电源
2.压力表降至“0”点，（温度下降）打开排气阀，
3.旋开固定螺栓，取出灭菌物品
排气、升压、保压、降压
对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于
玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)
金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌
②干热灭菌：干热灭菌箱内160-170 ℃下加热2-3h
③灼烧灭菌：酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
效果：最彻底
原理：使微生物燃烧
对象：接种工具，如涂布器、接种环、接种针、其他金属用具；
接种过程中的试管口、瓶口等易被污染部位。
注意：
做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触。为了避免周围环境微生物污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。

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