资源简介

(共26张PPT)
第4单元
遗传的分子基础
第3课时　DNA的粗提取与鉴定
内容索引
核心体系
学习目标
活动方案
检测反馈
学 习 目 标
学习目标　1. 说出DNA的粗提取与鉴定的原理。2. 掌握DNA的粗提取与鉴定的方法。
核 心 体 系
活 动 方 案
鸡血细胞中DNA的粗提取与鉴定的大致实验步骤如下：
破碎鸡血细胞，释放DNA→溶解核DNA→析出含DNA的黏稠物→将DNA黏稠物再溶解→提取含杂质较少的DNA→DNA鉴定
请回答下面的问题。
(1) 该实验中为什么不能使用猪红细胞作为实验材料？获得鸡血后，在其中需加入柠檬酸钠，目的是什么？
【答案】 哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，没有DNA。防止血液凝固。
活动一　说出DNA的粗提取与鉴定的原理和方法
(2) 该实验中是如何使红细胞破裂的？如果使用的是植物材料，则不能使用这种方法，为什么？提取植物细胞中的DNA时，可以采取什么方法使细胞破裂？提取DNA利用的是什么原理？
【答案】 将鸡血细胞置于蒸馏水中，使细胞吸水涨破。植物细胞外有细胞壁，在蒸馏水中不会涨破。可以用洗涤剂溶解细胞膜。DNA可以溶于2 mol/L NaCl溶液。
(3) 实验中可以通过哪些方式去除杂质？
【答案】 通过控制NaCl溶液的浓度反复溶解、过滤、析出；加入木瓜蛋白酶分解蛋白质；用60～70 ℃的恒温水浴箱保温，使蛋白质变性；用冷酒精析出DNA，同时除去溶解于酒精的杂质。
(4) 实验中两次加入蒸馏水的目的分别是什么？
【答案】 第一次：使血细胞吸水涨破，释放出DNA；第二次：加到含DNA的物质的量浓度为2 mol/L 的NaCl溶液中稀释NaCl，使其物质的量浓度下降到0.14 mol/L，析出DNA。
(5) 实验中加入95%的冷酒精的目的是什么？
【答案】 DNA不溶于95%的冷酒精，加入冷酒精是为了使DNA析出，同时除去一些能溶解于酒精的杂质。
(6) 鉴定DNA的原理是什么？
【答案】 DNA与二苯胺沸水浴呈蓝色。
(7) 若用菜花(花椰菜)等植物细胞作为实验材料时，破碎细胞、释放DNA的操作方法是什么？
【答案】 用加有食盐的洗涤剂，缓慢地研磨，使植物细胞破碎，释放出的DNA溶解在食盐溶液中。
CTAB法和SDS法是提取DNA的常用方法，CTAB提取液含有CTAB、EDTA等成分，SDS提取液含SDS、EDTA等成分。CTAB能破坏膜结构，使蛋白质变性，提高DNA在提取液中的溶解度；SDS能破坏膜结构，使蛋白质变性；EDTA能螯合Mg2＋、Mn2＋，抑制DNA酶的活性。某科研小组为了寻找提取蜡梅DNA的优良方法，比较了两种提取DNA的方法，主要操作如下图所示：
活动二　举例说明DNA的粗提取的运用
实验测定结果如下(表中OD260反映溶液中核酸的浓度，OD280反映溶液中蛋白质的浓度。理论上，纯DNA溶液的OD260/OD280为1.800，纯RNA溶液的OD260/OD280为2.000)。
CTAB SDS OD260 OD280 OD260/OD280 OD260 OD280 OD260/OD280
0.033 0.018 1.833 0.006 0.005 1.200
请回答下列问题。
(1) 与常温下研磨相比，液氮中研磨的优点是____________________ ___________________________，CTAB法和SDS法提取液中都加入EDTA的目的是____________________________________________。
(2) 氯仿-异戊醇密度均大于水且不溶于水,DNA不溶于氯仿-异戊醇,蛋白质等杂质可溶于氯仿-异戊醇，实验过程中加入氯仿-异戊醇离心后，应取①________加异丙醇(异丙醇与水互溶)并离心进行纯化，利用异丙醇溶液纯化DNA的原理是________________________________________。
研磨充分，低温抑制
酶活性，降低DNA的分解
减少DNA水解，提高DNA的完整性和总量
上清液
DNA不溶于异丙醇，而杂质能溶于异丙醇
(3) 两种方法中，__________法提取的DNA较多，其可能原因是_____________________________________________________________。
(4) 两种方法中，________法提取的DNA纯度较低，其含有的主要杂质是________。
CTAB
CTAB提高了DNA在提取液中的溶解度，从而能提取出更多的DNA
SDS
蛋白质
检 测 反 馈
2
4
5
1
3
6
1 [学生用书P120]下图所示为“DNA的粗提取与鉴定”实验的部分操作过程。下列有关分析错误的是(　　)
2
4
5
1
3
6
A. 图①中向鸡血细胞液内加入少许嫩肉粉(含蛋白酶)有助于去除杂质
B. 图②操作的目的是纯化DNA，去除溶于体积分数为95%的酒精中的杂质
C. 图③中物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液能溶解黏稠物中的DNA
D. 图④中向含DNA的浓NaCl溶液中加蒸馏水的目的是漂洗DNA
【答案】 D
2
4
5
1
3
6
2 [学生用书P121]下表是关于“DNA的粗提取与鉴定”实验中所使用的材料、操作及其作用，表述正确的是(　　)
【答案】 C
试剂 操作 作用
A 柠檬酸钠溶液 与鸡血混合 防止染色质螺旋缠绕
B 蒸馏水 与鸡血细胞混合 保持细胞形状
C 蒸馏水 加入溶解有DNA的浓NaCl溶液中 析出DNA丝状物
D 冷却的酒精 过滤后的DNA加入其中 产生特定的颜色反应
2
4
5
3
6
3 [学生用书P121]下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是(　　)
A. 菜花和鸡血都可选作提取DNA的材料
B. DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
C. 预冷的乙醇可进一步纯化粗提取的DNA
D. 鉴定时，加入二苯胺试剂即可观察到溶液变为蓝色
1
【答案】 D
2
4
5
3
6
4 [学生用书P121] 下列有关生物学实验的叙述，正确的是(　　)
A. 用显微镜观察人的红细胞形态时，需在载玻片上先滴加适量清水
B. PCR产物中加入二苯胺试剂，加热变蓝说明有目的DNA产生
C. 新鲜的洋葱、鸡血、猪肝等均可作为DNA粗提取的实验材料
D. 观察有丝分裂时，统计视野中各时期的细胞数目，可计算出细胞周期的时长
1
2
4
5
3
6
1
【解析】 为保持动物细胞正常的形态，制作动物细胞临时装片时，需在载玻片上滴加适量生理盐水，A错误；二苯胺试剂只能检测有无DNA，并不能检测DNA的种类，B错误；新鲜的洋葱、鸡血、猪肝等中的细胞都有细胞核，都含有DNA，因此均可作为DNA粗提取的实验材料，C正确；观察有丝分裂时，统计视野中各时期的细胞数目，可计算出各时期所占时间比例，不能计算出细胞周期的时长，D错误。
【答案】 C
2
4
5
3
6
5 [学生用书P121](多选)利用鸡血进行DNA的粗提取与鉴定，有关叙述正确的有(　　)
A. 将鸡血离心后取上清液进行实验
B. DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最大
C. 可用95%的冷酒精进行DNA的纯化
D. 在沸水浴条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈蓝色
1
【答案】 CD
2
4
5
3
6
6 [学生用书P121]下面为“DNA的粗提取与鉴定”实验的一些重要操作示意图。请回答下列有关该实验的问题。
1
2
4
5
3
6
(1) 正确的操作顺序是________________________。
(2) 上图C、E步骤都加入蒸馏水，但其目的不同，分别是_________ ______________和__________________________________________。
(3) 上图A步骤中所用酒精必须经过____________才能使用，该步骤的目的是_________________________。
(4) 为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为DNA，可滴加________试剂，沸水浴，如果出现_______，则该丝状物的主要成分为DNA。
1
C→B→E→D→A
加速鸡血
细胞的破裂
降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出
充分冷却
提取含杂质少的DNA
二苯胺
蓝色
谢谢观看
Thank you for watching

展开更多......

收起↑