资源简介

(共23张PPT)
饲料中粗蛋白质含量测定
目录
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检测分析依据
检测分析原理
检测试剂材料
检测仪器设备
检测分析步骤
检测数据处理
7
检测清场工作
GB/T 6432-2018
适用范围
规定了测定饲料中粗蛋白质的凯氏定氮法
适用于饲料原料及饲料产品中粗蛋白质的测定
方法广泛应用于粗蛋白质的检测
试样在催化剂的作用下，经硫酸消解，含氮化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含量，乘以6.25，计算出粗蛋白质含量。
蛋白质 ～ N ～ HCl
消化
样品＋ 13H2SO4 (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
蒸馏与吸收
2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↑ ＋ Na2SO4 ＋ 2H2O
2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
滴定
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
CuSO4
K2SO4
K2SO4 +H2SO4 =2KHSO4
（3）做蒸馏时碱性指示剂
（1）催化作用：加速有机物的氧化分解。
硫酸铜的作用机理如下：
C+ 2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+CO2↑
Cu2SO4+2Ｈ2SO4 =2CuSO4 +SO2+2H2O
硫酸铜的作用
（2）消化终点指示剂：蓝绿色澄清透明
分析纯试剂
水：符合GB/T6682中规定的三级水
化学纯试剂
混合催化剂
称取0.4g五水硫酸铜、6.0g硫酸钾或硫酸钠，研磨混匀。
注意：1.购买商品化的凯氏定氮催化剂片
2.碱液回收处理
盐酸标准溶液
c（HCl=0.1(mol/L）
按GB/T 601 规定配制和标定。
注意： 1.配制溶液
2.基准试剂恒量
3.天平使用
氢氧化钠溶液（400g/L）
称取40g氢氧化钠用水溶解稀释至100mL。
注意：1.药品称取在烧杯中；
2.加水后，小心搅拌溶解；
3.冷却后，转移至盛浓碱容器中，密闭。
溶 液 配 制
甲基红乙醇溶液
称取0.1g甲基红，用乙醇溶解并稀释至100mL。
注意：1.用乙醇溶解后，再稀释至100mL
硼酸吸收液I（20g/L）
称取20g硼酸钠，用水溶解稀释至1000mL。
注意：1.药品称取在烧杯中；
2.加水后，可加热搅拌溶解。
溶 液 配 制
溴甲酚绿乙醇溶液
称取0.5g溴甲酚绿，用乙醇溶解并稀释至100mL。
注意：1.用乙醇溶解后，再稀释至100mL
混合指示剂 溶液
将甲基红乙醇溶液和溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合。
注意：1.溶液室温避光保存，有效期3个月。
粉碎机
0.42mm孔径分析筛
分析天平（感量0.1mg）
分液器
凯氏定氮仪
消煮炉
吸 量 管
移 液 管
1ml 3支 2ml 1支
5ml 2支 10ml 1支20ml 1支
10ml 大肚移液管 1支
容 量 瓶
50ml 8个 100ml 2个
1000ml 2个 （透明棕色各一）
烧 杯
50ml 1个 100ml 2个
500ml 4个 1000ml 1个
2000ml 1个
滴定管
50ml 滴定管 1支
消煮管
250mL 消煮管 8个
锥形瓶
250mL锥形瓶 3个
另需准备：
洗瓶2个、橡胶手套，白线手套，称量手套，药匙，称量纸，天平刷，铅笔橡皮尺子，标准计算纸，方托盘，标签纸，滤纸，记号笔，擦镜纸，抹布、蒸馏水若干。
抽 样
取 样
A
B
（1）蛋白质样液制备
试
样
制
备
按GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，可用四分法缩减取样约200g。
按GB/T 20195-2006 制备试样，粉碎，通过0.42mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，贴上标签，备用。
称 样
消 煮
称取试样0.5g，精确到0.1mg，置于消煮管中。
平行两份试验。
试
样
消
煮
助 剂
加入6.4g混合催化剂，小心加入12mL硫酸。
将消煮管放入消煮炉上，在420℃下消化1h。
取出，冷却至室温。
（1）蛋白质样液制备
凯氏定氮仪
碱 蒸 馏
硼酸吸收
将带消煮液的消煮管插在蒸馏装置上；
以量取25mL硼酸吸收液I于锥形瓶做吸收液；
滴加2滴混合指示剂 。
（1）蛋白质样液制备
氨
的
蒸
馏
蒸馏装置的冷凝管末端浸入锥形瓶吸收液中；
再向消煮管中加碱至溶液完全黑色；
水蒸汽蒸馏。
蒸馏至流出液pH近中性；
蒸馏时间以吸收液体积近100mL为宜；
降下锥形瓶，用水冲洗冷凝管末端，并入锥形瓶内。
A
尽快用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液滴定吸收液；
溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
（2） 盐酸滴定
盐酸定量氨
盐酸滴定
硼酸吸收液
A
精确称取0.2g硫酸铵（精确至0.1g）；
同试样，进行加碱蒸馏、硼酸吸收；
0.1mol/L盐酸标准滴定溶液滴定；
计算硫酸铵含氮量，检查加碱、蒸馏、滴定步骤
判断依据：硫酸铵含氮量应为21.19%±0.2%。
精确称取0.5g蔗糖（精确至0.1mg）；
与试样，与试样同时进行消煮、蒸馏、吸收；
用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液滴定；
记录盐酸标准溶液消耗体积；
评价依据：盐酸标准溶液体积不得超过0.2mL。
B
（3） 蒸馏步骤查验
硫 酸 铵
查 验
蔗糖空白
（4） 空白测定
式中：
V2 ——滴定试样消耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；
V1 ——滴定空白消耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；
c ——盐酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；
M ——试样质量，单位为克（g）；
14 ——氮的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/moL）；
6.25——氮换算成粗蛋白的平均系数。
（1）结果计算
试样中粗蛋白质含量 w 计，数值以质量分数（%）表示，按公式计算：
（2）结果表示
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果；
计算结果表示至小数点后两位。
（3）重复性
废 液 废 渣
处 理
废液：由于样液中含有“强酸或强碱”，所以严禁直接倒入下水道。对于高浓度废酸液体，中和至中性后排放，应在指定地点对化学废液进行处理。
废纸：实验室垃圾不得丢弃于楼 廊中，必须 垃圾袋或桶存放于各个实验室。当达到 定量时，须丢弃到指定的地 ，统 组织处理。
玻璃渣：实验中破碎的器皿等玻璃制品，应佩戴手套后收集到一起，用纸包好，在表面标注，存放于实验室定期集中处理，不可直接扔进垃圾箱。
一次性用品：如塑料滴管、橡胶手套等用后统一打包，统一处理。
玻 璃 仪 器
处 理
滴定管、移液管、量筒等有精密刻度的仪器，不宜使用刷洗的方式，以免摩擦刻度线。常用铬酸洗液浸泡15min左右,再用自来水冲净残留在器皿上的洗液,然后用蒸馏水润洗2-3次。
冲洗后自然凉干或冷风吹干。不得放入电热干燥箱高温烘干。
检查干燥后器皿上是否有残留的水渍和污渍，确保干净后戴手套放入托盘中，进行“入柜、分类、定位”存放。
消煮管在消煮结束后，不可直接放水中冲洗，避免炸裂。用后应及时清洗干净，于专用储藏柜中保存。
烧杯、玻璃棒等一般玻璃器皿：在流动的水龙头下，用毛刷蘸去污粉或合成洗涤剂刷洗；然后转移实验室专用的超声波清洗机中，加入自来水和洗涤剂，盖上机盖，打开开关定时30分钟以上，清洗结束后用自来水冲掉洗涤剂,再用蒸馏水冲洗三次,去掉自来水中带来的钙、镁、铁、氯等离子，放入电热干燥箱高温烘干。烘干后检查器皿上是否有残留的水渍和污渍，确保干净后戴手套与其它玻璃器皿一同存放。
仪器设备 处 理
凯氏定氮仪：使用后，先清洗碱管，避免碱结晶堵塞；再清洁废液桶后，关机拔掉电源，清洁消煮管蒸馏室、槽体和防护屏，擦试冷凝管馏液口所在位置，盖上防尘罩。
消煮炉：关闭电源开关后将电源插头拔出，近期不再使用，要等降至室温，清洁后，盖上排废罩再进行收纳。
瓶口分液器：确保分液器内干净、干燥，用后可留在试剂瓶盖上，以便下次使用。
分析天平：使用后用关机拔掉电源，盖上防尘罩后，避潮、防腐、避光、防雷保存。
谢
谢
聆
听

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